Сопромат на заказ: Заказать решение задач по сопромату

Содержание

Сопромат - решение задач. Заказать задачу.

Меню сайта

Расчет геометрических характеристик сечений он-лайн NEW - считает любые сечения (сложные). Определяет: площадь сечения, моменты инерции, моменты сопротивления.

Расчет балок на прочность он-лайн - построение эпюр Mx, Qy, нахождение максимального изгибающего момента Mx, максимальной сдвигающей силы Qy, расчет прогибов, подбор профиля и др. Все просто, все он-лайн.
+ Полное расписанное решение!
Теперь и для статически неопределимых балок!

Расчет рам, ферм балок он-лайн NEW - эпюры Q, M, N, перемещения узлов. Удобный графический интерфейс. Считает любые схемы.

Лекции - теория, практика, задачи...

Примеры решения задач

Справочная информация - ГОСТы, сортамент проката, свойства материалов и другое.

Программы по сопромату (построение эпюр, различные калькуляторы, шпоры и другое).

Форум сопромата и механики

Книги - разная литература по теме.

Заказать задачу

Друзья сайта (ссылки)

WIKIbetta

Разработчикам (сотрудничество)

Веб-мастерам (партнёрка)

О проекте, контакты

Подпроекты

Заказать задачи через форум

Оставьте сообщение на форуме сайта. Ваша заявка будет рассмотрена в кратчайшие сроки пользователями, которые подписаны на новые сообщения форума.

Вот список тех, кто решает задачи.

Эффективность и оперативность

Готовность пользователей помогать друг другу доказана. В 2008, 2010 и 2011 годах на этом сайте была система фриланса. Меньше чем за год зарегистрировалось более 200 человек, которые заявили, что они решают задачи за деньги.

Срок выполнения заказа

Статистика показывает, что срок решения несложных задач составляет не более 1-2х дней. В некоторых случаю решение можно получить сразу ))

Оплата и цены

Цена устанавливается по договоренности с решающим задачи. Как правило в сети принято получать услуги после оплаты.

Хотите решать задачки за денги?

Для того чтобы принимать заказы и решать задачи за деньги Вам необходимо подписаться на все новые сообщения форума и следить за заявками. Так же рекомендую записаться в этот список.

Сообщество

Вход

Решение задач

Расчет редукторов

Для Android (рекомендую)

NEW Mobile Beam 2. 0
Программа для расчета балок на прочность на Вашем Android устройстве...
Java 2 ME

Решение задач по сопротивлению материалов, заказать решение задач по сопромату. Опытные специалисты. Короткие сроки выполнения.

Решение задач по сопромату

Сопротивление материалов или, как его называют студенты, сопромат является сложнейшим предметом, который изучается на первых курсах. Допустим, Вы способный студент и хотите успеть сделать всё самостоятельно. Но решение задач по сопромату займёт у Вас столько времени, что про другие, возможно, не менее важные предметы учебного курса придётся забыть. В результате есть риск и эту работу не успеть сделать, и к выполнению других не приступить.

Выбор думающих и практичных студентов - заказать решение задач по сопромату профессионалам, которые имеют многолетний опыт работы со студентами. Вы можете оформить заказ анонимно, нам не нужно знать Ваше настоящее имя для того, чтобы качественно и оперативно выполнить решение задач по сопромату на заказ.

В любое время суток Вы можете заказать сопромат. Решение задач выполняется нашими авторами практически круглосуточно. Мы понимаем: если бы у Вас было много времени, то решить задачи по сопромату (сопротивлению материалов) Вы могли бы и без нашей помощи. Оперативность без ущерба для качества - наше основное преимущество.

Многие авторы, работающие в нашем учебном центре, преподают в ВУЗах и не только выполняют, но и проверяют решение задач. Сопромат для них - любимый предмет, и к выполнению любого задания они относятся очень ответственно. Результат будет достигнут на все 100%, если Вы любым удобным для Вас способом передадите нам методические указания. Нет ничего проще, чем выполнить решение задач по сопромату в соответствии с чётко оговоренными требованиями. Для того, чтобы Вы могли объяснить преподавателю каждое действие, мы сопровождаем их подробными комментариями.

Если Вы не получили ответ на какой-либо из своих вопросов на страницах нашего сайта, то задайте нам его в ICQ, E-mail или по телефону. Мы оперативно свяжемся с Вами и дадим необходимые разъяснения.

Также наши специалисты готовы помочь Вам в решении задач по статистике и многим другим предметам.

Решение сопромата: задачи, контрольные, РГР | Помощь студентам: заказать контрольную работу, решение задач заочникам

Сопротивление материалов – решение задач на заказ

Каким будет поведение инженерных конструкций под действием нагрузок? Как рассчитать эти конструкции и определить их оптимальные размеры? Какие могут быть внутренние силы у материала? Все эти вопросы объясняет одна из самых сложных технических дисциплин – это техническая механика. Без знания основ механического движения и процессов, происходящих внутри материала, невозможно спроектировать новую машину, рассчитать прочность конструкции, усовершенствовать производственный процесс. Но досконально изучить теорию недостаточно. Инженер должен знать не только теоретическую механику, но и прикладную. К разделу прикладной механики относятся:
теория машин и механизмов, которая изучает анализ и принципы проектирования механизмов и узлов;

сопротивление материалов, позволяет рассчитать надёжность конструкций и проектируемых сооружений, их устойчивость и прочность;
теория деталей машин, рассматривает конструирование деталей и принципы расчётов.

Прикладная механика станет понятнее, если научиться решать практические задачи. Имея примеры уже правильно решённых задач, будущему специалисту будет легче разобраться в их сути.

Решение задач на заказ

Мы предлагаем решение задач на заказ по сопромату любой сложности:
Построение эпюр;

Расчёты вала на кручение;

Определение деформации и напряжений;

Расчёт балки на изгиб;

Определение центра тяжести;
Расчёты стержня на растяжение и сжатие;
Определение характеристик поперечных сечений;
Косой и прямой изгиб, устойчивость стержней;
Сопротивление усталости;
Сложное сопротивление;
И другие темы.

Заказать сопромат

Мы гарантируем правильность решений в установленные сроки. К готовой работе прилагаются чертежи и пояснения. Это даст возможность студенту понять сопромат и научиться применять творческий подход к решению задач в будущем. Проведя анализ уже решённой задачи, разобрав физический смысл каждой величины, вы сможете сами решить аналогичную задачу. Мы поможем стать вам грамотным специалистом, а не просто инженером с дипломом о высшем техническом образовании. Умение рассчитывать и решать практические задачи даёт возможность повышать качество и работоспособность механизмов.

Ваше обучение станет более лёгким и эффективным, если вы воспользуетесь услугой «решение задач на заказ». Лаконично и грамотно составленные пояснения к задачам помогут вам усвоить принципы решений. Желаем вам стать отличными специалистами, и удачи на зачётах и экзаменах!

Сопротивление материалов (сопромат) — заказать контрольную, решение задач, курсовую, реферат

Сопротивление материалов (сопромат) — это одна из сложнейших дисциплин, изучаемая в учебных заведениях технической направленности. В данном курсе освещаются возможности деформации твердых тел из различных материалов и их сопротивляемости воздействию. При изучении предмета рассматривается такие основные свойства тел, как прочность, жесткость и устойчивость. Проводятся теоретические расчеты воздействия на различные материалы, что плотно связывает сопромат с математикой и теоретической механикой, практически же проявляется в физике и материаловедение. Используется в конструировании и разработке механизмов.

Основным умением, которое выносится из этого курса — это неординарное пользование знаний в проектировании и применение творческого мышления и способности раскрывать новые возможности использования давно известных материалов для надежности работы механизмов и функционирования объектов. Проявление творческих способностей необходимо даже в столь точных и, казалось бы, сухих областях знаний.

Эта дисциплина одна из основ механики и необходима при конструировании и строительстве. Благодаря знаниям сопромата инженерами выбираются наиболее экономичные и прочные материалы, что обеспечивает надежность и целесообразность любого технического объекта.

Сопромат, как курс для изучения, включается в программы первого и второго курса. Студенты, еще не приспособившееся к новой форме получения знаний, обязаны усвоить одни из сложнейших курсов и подготовить курсовую,контрольную и даже дипломную работу по данному предмету. Обеспечить правильность оформление и точность материалов могут только специалисты. Таким образом, использование готовых работ при выполнении заданий поможет минимизировать количество допускаемых ошибок и служить прекрасным подспорьем в дальнейшей учебной деятельности для студентов.

Заказать задание МАДИ Математика Термех Сопромат

Помощь в решении задач по математике, теоретической механике и сопромату студентам МАДИ и МГУПП

Заказать задание

Как заказать задание

Как оплатить заказ

Условия отказа от услуги

Договор-оферта на оказание услуг

Выберите ВУЗ

МАДИ дневное/вечернее отделение

МАДИ заочное отделение

МГУПП

Выберите предмет

Математика

Теоретическая механика

Сопромат (тех.

механика)

Строительная механика

Выберите задание

Математика

Теоретическая механика

Сопромат (тех. механика)

Номер РГР (условия здесь)

К1К2К3.1К3.2К4С1С2С3С4С5С6С7Д1Д2Д3Д4Д5.1Д5.2Д6Д7Д8Д9Д10Д11

Год издания книжки

Последний201520142013201220112010200920082007200620052004200320022001

Номер варианта:

Параметр k или n:

Вариант выбирается

по таблице в конце методички Подробнее

все номера варианта из каждого задания Подробнее

Нужно решить

Все задания варианта

Все, кроме заданий со звездочками

Выбрать задания

Выбор заданий

  1. С1
  2. С2
  3. С3
  4. С4
  5. С5
  6. С6
  7. С7
  8. К1
  9. К2
  10. К3. 1
  11. К3.2
  12. К4
  13. Д1
  14. Д2
  15. Д3
  16. Д4
  17. Д5.1
  18. Д5.2
  19. Д6
  20. Д7
  21. Д8
  22. Д9
  23. Д10
  24. Д11
  25. 25
  26. 26
  27. 27
  28. 28
  29. 29
  30. 30
  31. 31
  32. 32
  33. 33

Номер варианта (по трем числам):

первое число (арабские цифры)

второе число (арабские цифры)

римская цифра (1-12)

Мой заказ:

Итого:

Способ получения

В электронном виде (после оплаты)

Выберите способ оплаты

Оплата банковской картой

Другие способы оплаты

В метро Аэропорт с 13 до 14 по рабочим дням.

День получения: Ближайший рабочий деньБлижайший понедельникБлижайший вторникБлижайшая средаБлижайший четвергБлижайшая пятницаДругой день

Необходимо указать один или оба контакта

Ваш e-mail:

Ваш адрес страницы ВКонтакте или id:

Укажите адрес ВК, если хотите получить скидку на некоторые задания по теоретической механике для участников группы vk.com/rgr_madi

Коментарий

Выберите задание

Задание 1. Расчеты на действие продольных сил (книжечка)

Задание 1. Расчеты на действие продольных сил (новое задание)

Задание 1. Построение эпюр изгибающих и крутящих моментов...

Задание 2. Расчеты на кручение (книжечка)

Задание 2. Расчеты на кручение (новое задание)

Задание 2. Главные центральные моменты инерции плоской фигуры

Задание 3. Расчет балки на изгиб (книжечка)

Другие задания тоже выполняются. Для заказа пишите на e-mail: [email protected]

Номер варианта:

Выберите задание

Косой изгиб

Расчет плоской рамы

Расчет пространственного бруса

Задание 2.1

Задание 2.2. Статически неопределимые системы

Задание 2.3. Статически неопределимые конструкции

Задание 3. Продольный изгиб

На сайте вы можете заказать работы по деталям машин, сопромату, теоретической, технической, прикладной механике

Кто выполняет работы?

Обращаю Ваше внимание, что на сайте работает один человек, он же автор сайта, он же автор работ, он же я.
Хорошо это или плохо?
Для вас, как для заказчика это ЗАМЕЧАТЕЛЬНО! И ниже я объясню почему это хорошо и постараюсь убедить Вас сделать заказ именно у меня.

Срок выполнения

Заказ выполняется в течение одного-двух дней после оплаты. В отличие от мегафирм и сайтов-аукционов, где на согласование, переписку и поиск исполнителя уходит много времени, работу у меня вы можете получить в кратчайшие сроки.

Оформление работ

Работы всегда оформляются в ворде, формулы набираются в Equation. Картинки, схемы и прочая графика делается в автокаде и картинкой вставляется в текст. В случае сложных схем для повышения качества графики добавляются ПДФ-файлы.
На каждой странице сайта вы найдете образцы оформления. Ваши задачи будут выполнены в таком же качестве. Клиенту высылаются все файлы задания в редактируемом виде. В отличие от мегафирм и сайтов-аукционов, где вы заказываете работу, не зная, что в итоге получите и в каком офомрлении, у меня вы всегда можете посмотреть образец.

Почему лучше делать заказ именно у меня, а не в мегафирме или на сайте-аукционе

Если вы решили заказать работу через интернет,то у вас есть три варианта: мегафирма, сайт-аукцион и индивидуальный исполнитель.
У всех крупных фирм и сайтов-аукционов есть один общий минус - там работает кто попало. Вчерашние студенты, люди, в перерывах от основной работы, исполнители-новички, пробующие силы, люди, зашедшие перехватить денег.
Да-да. Именно кто попало, "с улицы по объявлению". Вы тоже можете зарегистрироваться на любом сайте-аукционе или послать анкету исполнителя в мегафирму и ничего вам за это не будет. Успеете испорить десяток-другой чужих заказов, пока вас не заблокируют :-). А может наудачу и проскочит что-то, всякое бывает.
Не верьте рекламе, что в фирмах работают доктора-профессора, кандидаты наук, преподаватели именно ваших вузов, и супер-пупер профессионалы. Это не так по одной простой причине. Все мы, исполнители студенческих заказов, работаем за деньги. При прямом контакте я получаю 100% оплаты. И вы 100% своих денег тратите на оплату работы.
При заказе "через фирму" вы оплачиваете хозяев, начальников, налоги (взятки), рекламу, бухгалтеров, программистов, диспетчера, прямые телефоны, поддержку, обсуживаение и еще много чего. По своему опыту знаю, что до исполнителя в фирме доходит в лучшем случае половина заплаченных вами денег. Остальное - прямое удорожание заказа. В итоге вы сдадите свой заказ девочке-диспетчеру, которая в нем ничего не понимает и она выложит его не читая на внутрифирменный сайт или на открытый аукцион, где его заберет за копейки голодный вчерашний студент. И фирма выберет в исполнители именно его, как давшего самую низкую цену, а вам напишет, что выполнено профессионалом. Хотя бывает, что и повезет. Профессионалы тоже иногда берут заказы на аукционах или в фирмах.
Чуть лучше обстоят дела на сайтах-аукционах, где более-менее прозрачная цена и отзывы по исполнителям позволяют сориентироваться в предложениях. Но откуда вы знаете, кто ставит эту цену, вчерашний студент, исполнитель, купивший себе вип-статус и рейтинг за деньги или та же мегафирма, у которой договор с сайтом-аукционом?
Скажу по своему большому опыту, что если вы хотите за разумную цену получить качественную работу, то лучше искать специализированную небольшую фирму или индивидуального исполнителя. То есть меня.

Проверка на антиплагиат

Этот пункт позволит вам проверить честность и профессиональность исполнителя, у которого вы собираетесь заказать работу.
Если вам клятвенно пообещали, что антиплагиат будет до небес и что он вообще будет, знайте - перед вами мошенник или просто некомпетентный/бестолковый человек.
Задачи технического направления никогда не проверяются через антиплагиат и это логично. В задачах используются одни и те же слова, картинки и формулы плагиат не проверяет. Бывают групповые задачи, где на одно условие и на один ход решения дают десятки вариантов данных. Единственный вариант из такой методички, выложенный в инете, сразу сводит на ноль антиплагиат-проверку всех последующих вариантов. Поэтому если вам где-то пообещали проверку на плагиат - задумайтесь о честности или профессиональности исполнителя.

"Строго по методичке"

Сразу огорчу будущего клиента - оформление СТРОГО по методичке я, как и любой профессионал, не делаю, за исключением случаев "толковых" или типовых часто встречающихся методичек. И причин тут несколько.
Во-первых каждый преподаватель в душе творец и когда он пишет свою методичку (то есть собирает задачи с нескольких чужих или просто меняет обложку), то он чувствует, что недоработал и начинает самовыражаться. В чем? Меняет обозначения. Вместо обозначения силы F пишет P или G, реакцию опоры RA меняет на RAY, YA, RВЕРТ, Y/ и так далее. Добавляет ненужные пункты, размазывая по ним решение, вставляет какие-либо любимые им фразы, которые не несут смысла и, вроде бы призванные пояснять решение, запутывают его окончательно.
Во-вторых иногда в методичках содержатся устаревшие обозначения, обозначения не в системе СИ, которые кочуют по учебным материалам с середины прошлого века. Бывает путаница обозначений, когда на одной странице одно, в примере другое или обозначения меняются от задачи к задаче - следствие "выдергивания" задач из разных методичек-источников.
В-третьих примеры методичек зачастую перемежаются пояснениями, вставками лекций, кашей, "водой" или настолько запутаны, что даже зная, как решается задача, разобраться непросто.
Наконец в примерах решения и оформления из методичек очень часто бывают ошибки, опечатки, которые приходится предаврительно находить и только осилив все вышеперечисленное можно сделать работу "строго по методичке"!
Труд выполнимый (и то не всегда), но бессмысленный и дорогой, который может сделать либо педант, либо человек, которому нечем заняться.
В заключение к этому длинному параграфу честно скажу, что делаю максимально близко к требованиям задания, соблюдая в разумных пределах требования оформления, объема работы и структуры решения. За пару десятков лет написания студенческих работ я знаю, как надо их оформлять. Доверьтесь профессионалу и не верьте мегафирмам и аукционам, которые обещают решение "строго по методичке", даже если вы им прислали на оценку только условие задачи.

Как найти свою задачу?

Обычно клиент попадает на сайт через поисковик сразу на нужную страницу и, если вам повезло, то вы видите задачу из методички именно вашего вуза.
Если же задача ваша, похожа на вашу, а методичка не та, то не удивляйтесь, преподаватели - это вчерашние студенты, поэтому зачастую пишут методички простым способом - меняют обложки, иногда смешивают задачи из разных методичек или слегка изменяют условия.
Воспользуйтесь внутрисайтовым поиском, чтобы найти задачи, соответствующие вашей. Если вы нашли похожую задачу, то знайте - я ее делаю.

Какие работы я не делаю

Специализация - это всегда узкая направленность. Даже по имеющимся в навигационном меню предметам, я делаю не все работы и не все типы задач. Некоторые задания делать не выгодно по деньгам, некоторые излишне сложны, некоторые встречаются редко.
Если вы нашли свою или похожую задачу на сайте через поиск, то я ее делаю, если не нашли, то, скорее всего, я за нее не возьмусь.
Особое внимание обращаю, что я НЕ ДЕЛАЮ: дипломные, эссе, рефераты, сочинения, консультации во время экзаменов, доработки по чужим заказам, работы по заумным и уникальным заказам (расчеты синхрофазотронов, рефераты о разведении нутрий, проектирование подвески к автотрактору БТЗ-62.4-Р и т.п.).

О сайте

Привет! Меня зовут Константин Вавилов, я занимаюсь разработкой этого сайта, пишу статьи о сопромате, о задачах, которые решаются в рамках этой дисциплины. Давай я расскажу тебе более подробно о сайте…

О СопроМате

«СопроМат» – это проект, посвященный сопромату, науки о прочности, жесткости и устойчивости конструкций.  Данную дисциплину учат студенты любой инженерной специальности, которая может быть связана с машиностроительной, строительной, авиационной отраслью. Так как при проектировании любой конструкции обязательным этапом является проведение прочностных расчетов, расчетов на жесткость и других. Не зная законов сопромата нельзя создать новой техники, механизмов, оборудования. Нельзя построить такие инженерные сооружения как: мосты, многоэтажные здания и т.д. Поэтому так важно знать этот предмет настоящим инженерам.

Чем может быть полезен данный сайт?

На сайте часто публикуется теоретические материалы, написанные простым языком, который, думаю, будет понятен даже студенту заочной формы обучения. В этом заключается отличие материалов этого сайта, от специальной литературы, где написано все, сложным для восприятия, научным языком.

Но самой главной «фишкой» этого сайта являются практические материалы. Дело в том, что помимо разработки сайтов, я занимаюсь решением задач по сопромату на заказ. Причем занимаюсь этим очень долго. Решал, наверно, все возможные задачи, накопил колоссальный  опыт и теперь делюсь им безвозмездно на страничках этого сайта. На сайте публикую авторские уроки по решению, а также примеры решения задач, которые когда-то делал на заказ. Возможно, кому-то пригодятся.

Важно!

Сайт «СопроМат» находится пока что в разработке. Все статьи, иллюстрации к статьям еще достаточно сырые, могут содержать какие-то ошибки, но все это периодически дорабатывается, корректируется, а также пишутся новые материалы. Если есть какие-то пожелания, для сайта, пишите в комментариях.

Если найдете какие-нибудь ошибки, оговорки, опечатки, недоделки в статьях, напишите, буду благодарен.

Сопротивление порядку и власти (РОАР)

Религия служила для легитимации политической власти, но она также была основой для сопротивления порядку и власти. Будь то восстание Маккавеев, практика ненасильственного сопротивления Ганди, современные неоязыческие религии или контрсистемные движения, описанные Марком Юргенсмейером в его книге 2001 года «Террор в разуме Бога», религиозные убеждения побуждали людей отвергать социальный порядок. что они считают несправедливыми и, возможно, восстают против этого.Даже в сегодняшних секуляризованных обществах религия служит основой для социальных движений и проявлений, направленных на противодействие насущным социально-экономическим угрозам, таким как изменение климата, социальное неравенство, авторитарные правительства и дискриминация меньшинств. Эти наблюдения стимулировали новые тенденции в научных дебатах, особенно в отношении появления альтернативных религиозных идей и ритуалов в современных обществах. Как старые и новые религиозные убеждения узаконили различные движения сопротивления в разных общинах? Какие причины повлияли на насильственную мобилизацию против установленного общественного порядка, ненасильственную борьбу или создание альтернативных структур сообщества? Что эти движения и идеи могут сказать нам о роли, которую религия играет сегодня как в секуляризованных, так и в несекуляризованных обществах? Конференция приглашает к участию в исследованиях концептуализации, управления и инструментализации религиозных идей и верований в отношении прошлых и современных движений сопротивления. Мы приветствуем заявки от докторантов, а также от магистрантов из всех областей гуманитарных и социальных наук, включая, помимо прочего: Антропологию Право Политические науки Экономику Филологию Психологию Историю Философию Социологию. Приглашаются к подаче заявки люди из других областей и их дисциплин. Центр будет получать заявки, посвященные всем аспектам взаимодействия религий, государств и обществ во всех регионах и исторических периодах.

Тезисы, объемом не более 300 слов, следует присылать на crsconference2020 @ ceu.edu

до 15 марта 2020 года

Кандидаты получат окончательное решение не позднее 27 марта 2020 года.

Принятые участники будут иметь возможность выбрать регистрацию своего участия через:

Базовый регистрационный сбор: 50 евро

Взнос за предварительную регистрацию: 140 евро, в который входит трехдневное проживание в Центре проживания CEU (более подробная информация на сайте http: // residencecenter. ceu.edu/) и трехдневный проездной на общественный транспорт.

Приглашение к подаче статей можно найти на веб-сайте CRS: https://religion.ceu.edu/crs-elte-masaryk-phd-conference-25-27-june-2020 или на нашей странице в Facebook: https: // www. .facebook.com / crsconference2020 /

За дополнительной информацией обращайтесь к студенческим организаторам Хуану Мануэлю Рубио Аревало, Кристине Бодзасне Ченьи-Надь и Яну Тртилеку по электронной почте [email protected]

  1. Хуан Мануэль Рубио Аревало (доктор философии, CEU, средневековые исследования)
  2. Кристина Бодзасне Ченьи-Надь (доктор философии, ELTE, философия)
  3. Ян Тртилек (доктор философии, Масарик, религиоведение)

Заказы сопротивления | Игровая механика - XCOM 2 Game Guide

Далее Игровая механика Скрытые действия Назад Игровая механика Солдатские отношения

Приказы Сопротивления - еще одна новинка, представленная Война избранных . Вкратце, это карты специального заказа, которые при размещении в соответствующих гнездах предлагают различные бонусы, которые дают дополнительные очки навыков, снижают производственные затраты или приводят к немедленному завершению некоторых проектов или даже предлагают дополнительное пространство для контакта с сопротивлением. движение. Они не важны для игрового процесса, но предоставляют дополнительные возможности игрового процесса.

Возможно, вы захотите разблокировать дополнительные карты и заказать гнезда как можно скорее.

Приказы Сопротивления могут быть настроены в специальном окне, которое открывается раз в месяц, сразу после того, как Совет выделяет ресурсы для игрока. - вы можете посмотреть это окно в любое время, но изменения могут быть внесены только в этом конкретном случае.На экране заказов вы найдете четыре столбца, каждый из которых позволяет вам отдавать заказы на немного разных условиях. Первый - это столбец «Приказы с подстановочными знаками» - там вы можете назначить карточку приказа любой фракции. Остальные три представляют три фракции - Жнецы (желтые), Отступники (красные) и Тамплиеры (фиолетовые). Там вы можете назначить только те карты, которые соответствуют фракции.

После завершения миссий «Охота на избранных X» будут разблокированы дополнительные слоты для карт.

В начале игры вы можете назначить только одну карту для слота wild card и ни одной фракции, но вместе с прогрессом игры и завершением секретных операций для фракции сопротивления это число будет увеличиваться.Если вы максимально увеличите отношения со всеми фракциями, включая дикие карты, вы сможете использовать до 9 командных карт (3 диких карты и 2 для каждой фракции) - соответствующий выбор может значительно повлиять на игровой процесс.

Наконец, несколько советов, которые могут быть полезны при использовании этой механики:

  1. По умолчанию у вас есть только 1 место в столбце «подстановочный знак». Чтобы увеличить их, вы должны построить новую базу - Движение Сопротивления. Как только вы это сделаете, вам нужно будет оснастить его обоими улучшениями, каждое из которых откроет дополнительное место в упомянутом столбце, предлагая до 3 слотов для любой карты.
  2. Чтобы увеличить количество приказов для отдельной фракции, вы должны выполнять определенные Скрытые Действия, то есть миссии для фракции Сопротивления. Это миссии, которые позволяют вам нацеливаться на врага Избранных - «Охота на Избранных X», как часть I, так и часть II, которые всегда находятся в верхней части списка миссий. Выполнение части 1 разблокирует один слот, а второй части - второе сиденье. Их выполнение также вознаградит вас дополнительными командными картами и откроет дополнительные скрытые действия.
  3. Приказы Сопротивления позволяют увеличить количество контактов с Сопротивлением на 2, благодаря карте, зарезервированной для фракции Отступников (красные карты). 2 дополнительных контакта - это гигантский бонус, который особенно полезен в первые недели игры, когда нет возможности построить подходящее сооружение.
  4. Помните, что карты заказов не могут быть изменены до следующего «разрешения на финансирование» с Советом (когда вы получите ресурсы с игрового поля) - поэтому выбирайте их с умом.
  5. Наиболее выгодные приказы, которые вы должны разблокировать, - это те, которые увеличивают получаемые очки опыта и удваивают получение AP (оба связаны с тамплиерами), увеличивая количество контактов с движением сопротивления (карта Жнеца) и то, которое вызывает враги бросают больше предметов после смерти. (Карта отступника). Если у вас возникли проблемы с контролем за ходом проекта AWATAR, вы можете рассмотреть возможность использования карты «Саботаж» (Renegades), которая удаляет один сегмент индикатора выполнения проекта в конце каждого месяца
Далее Игровая механика Скрытые действия Назад Игровая механика Солдатские отношения

Актуальность эпистаза высшего порядка в лекарственной устойчивости | Молекулярная биология и эволюция

4"> Абстрактные

Мы изучили пять химически различных, но родственных антифолатов 1,3,5-триазина в отношении их влияния на рост набора мутантов по дигидрофолатредуктазе. Мутанты содержат комбинаторно полный набор данных всех 16 возможных комбинаций четырех аминокислотных замен, связанных с устойчивостью к пириметамину у малярийного паразита Plasmodium falciparum . Пириметамин был основным лекарством от малярии в течение многих лет, и он до сих пор используется в периодическом лечении во время беременности или в качестве препарата-партнера в комбинированной терапии артемизинином. Наша цель состояла в том, чтобы исследовать степень, в которой аллели приводят к сходным адаптивным топографиям и паттернам эпистаза у химически связанных лекарств.Мы обнаружили, что адаптивные топографии действительно похожи с одинаковыми или близкородственными аллелями, фиксируемыми при компьютерном моделировании ступенчатой ​​эволюции. Для всех препаратов, кроме одного, в топографии присутствует как минимум один неоптимальный пик пригодности. Наши данные согласуются с более ранними результатами, показывающими, что эпистатические взаимодействия третьего порядка и выше, по-видимому, вносят лишь незначительный вклад в общую адаптивную топографию и в значительной степени сохраняются. Что касается разработки лекарств, наши данные показывают, что взаимодействия более высокого порядка, вероятно, не будут иметь большого значения в качестве рекомендательного инструмента при выборе соединений свинца.

6"> Введение

Фермент дигидрофолатредуктаза (DHFR) является ключевой мишенью для антибиотиков, противомалярийных и противораковых препаратов. Триметоприм назначают при многих бактериальных инфекциях, а также широко используют в кормах для домашнего скота. Пириметамин был основным лекарством от малярии в течение почти десяти лет, и он до сих пор используется для прерывистого лечения во время беременности или в качестве препарата-партнера в комбинированной терапии артемизинином. Метотрексат используется против некоторых видов рака и аутоиммунных заболеваний.Эффективность всех трех препаратов была поставлена ​​под угрозу из-за развития лекарственной устойчивости у населения, подвергающегося лечению, будь то бактерии, малярийные паразиты или раковые клетки.

DHFR является благоприятной мишенью для лекарств, потому что это важный фермент, а мутанты устойчивости находятся в самом DHFR, а не в импорте, экспорте, детоксикации лекарств или других механизмах (Toprak et al. 2012). По этой причине DHFR также стал моделью для изучения молекулярной эволюции лекарственной устойчивости (Lozovsky et al.2009; Костанцо и Хартл 2011; Берштейн и др. 2015; Palmer et al. 2015; Rodrigues et al. 2016; Rodrigues et al. 2019).

Устойчивость малярийного паразита к пириметамину развивается в результате постепенного приобретения четырех аминокислотных замен (Wang et al. 1997). Временной порядок, в котором они приобретаются, ограничен из-за взаимодействия между заменами (Lozovsky et al. 2009). Такие взаимодействия составляют эпистаз, и для четырех мутантных сайтов существует (в дополнение к четырем основным эффектам) 11 эпистатических эффектов, состоящих из шести парных взаимодействий, четырех трехсторонних взаимодействий и одного четырехстороннего взаимодействия. Количественный анализ этих взаимодействий становится возможным благодаря анализу комбинаторно полного набора данных (Weinreich et al. 2006), который состоит из фенотипов всех возможных комбинаций набора мутаций. Для n мутантных нуклеотидных сайтов или генов, каждый из которых имеет два возможных состояния (мутантный и дикий тип), существует 2 n таких комбинаций.

Генетики признали и изучали парные взаимодействия с самого начала современной генетики, но взаимодействия более высокого порядка обычно игнорировались, в основном потому, что комбинаторно полные наборы данных были недоступны, а рамки для интерпретации отсутствовали.Современные методы манипуляции генами и геномами сделали возможным создание комбинаторно полных наборов данных, а для описания адаптивных топографий были разработаны как геометрические (Crona et al. 2013), так и аналитические (Weinreich et al. 2013) методы. В этой статье мы применяем аналитическую основу с использованием преобразований Фурье – Уолша, которые создают набор линейных контрастов, дающих оценку вклада каждого из эпистатических членов в общую адаптивную топографию (Weinreich et al. 2018).

Хотя исследования попарного эпистаза и эпистаза более высокого порядка выявляют взаимодействия ген за геном или ген за геномом, они не в состоянии решить, как возмущения окружающей среды могут изменить эти взаимодействия (Hartl 2014). Ключевой вопрос заключается в том, сохраняются ли в значительной степени эпистатические эффекты в аналогичных средах или они очень лабильны и непредсказуемы. Известно, что серьезные изменения окружающей среды, такие как различные классы противомикробных препаратов, часто могут изменить основные эффекты аллелей (Hastings, Sibley, 2002; Matsui, Ehrenreich, 2016; Wang et al.2019), и вполне вероятно, что изменения в основных эффектах также изменяют взаимодействия более высокого порядка. Эффекты меньших возмущений неизвестны, но они могут быть меньше, чем может сначала предположить интуиция. Например, приспособленность демонстрирует эпистаз убывающей отдачи (Кряжимский и др., 2014), и этот паттерн может сохраняться даже при изменении ранжирования основных эффектов.

Настоящее исследование было разработано для изучения степени, в которой небольшие возмущения в окружающей среде изменяют основные и эпистатические эффекты мутаций в DHFR.Возмущения соответствуют пяти химически модифицированным версиям 1,3,5-триазинового антифолата (Hunt et al.2005), а комбинаторно полный набор данных состоит из всех 16 возможных комбинаций четырех аминокислотных замен в DHFR малярийного паразита . Plasmodium falciparum (Лозовский и др., 2009). Уровни устойчивости к антифолатам оценивали в экспериментах, проведенных с использованием системы на почкующихся дрожжах, Saccharomyces cerevisiae , разработанной Sibley and Macreadie (2001) и Hastings and Sibley (2002).Мы обнаружили, что основные эффекты, а также все двусторонние взаимодействия и взаимодействия более высокого порядка в значительной степени сохраняются для антифолатов триазина, несмотря на довольно большие различия в их эффективности в качестве ингибиторов DHFR. Консервативные паттерны основных эффектов и эпистаза, наблюдаемые при применении триазиновых антифолатов, сильно отличаются от паттернов, наблюдаемых для пириметамина, химически непохожего аминопиримидина.

3"> Результаты

4"> Антифолатные конструкции

Химические структуры пяти антифолатов триазина и пириметамина показаны на рисунке 1.Молекулы триазина, обозначенные c57-c61, имеют различные функциональные группы, присоединенные к 1,3,5-триазиновому кольцу. Пириметамин имеет совершенно иную структуру, являясь хлорфенильным производным этилдиаминопиримидина.

Рис. 1.

Структура антифолатов триазина в сравнении с пириметамином.

Рис. 1.

Структуры триазиновых антифолатов в сравнении с пириметамином.

Мы протестировали триазиновые антифолаты на комбинаторно полном наборе данных, состоящем из всех 16 возможных комбинаций четырех аминокислотных замен, связанных с устойчивостью к пириметамину.Этот набор мутантов был выбран потому, что потенциальная эффективность любых новых антифолатов должна учитывать уже существующие полиморфизмы, выбранные для устойчивости к пириметамину. Обозначения 16 аллелей являются десятичными эквивалентами двоичного кода, причем аллель 0000 (десятичный 0) обозначает DHFR дикого типа P. falciparum с аминокислотными сайтами N51, C59, S108 и I164. Одиночные мутанты: I164L = 0001 (десятичное число 1), S108N = 0010 (десятичное число 2), C59R = 0100 (десятичное число 4) и N51I = 1000 (десятичное число 8).Двойные и тройные мутанты состоят из четверок 0 и 1 в зависимости от того, является ли каждый сайт диким типом или мутантом. Четверной мутант - 1111 (десятичное 15). В дополнительной таблице S1, Дополнительный материал в Интернете, перечислены десятичные и бинарные обозначения аллелей, а также аминокислотные замены, которые содержатся в каждом из них.

8"> Адаптивные топографии

На рис. 2 показаны уровни устойчивости 16 возможных генотипов к каждому из триазиновых антифолатов.Мерой устойчивости является IC50 (ингибирующая концентрация 50), та концентрация лекарственного средства, которая снижает скорость роста в отсутствие лекарственного средства на 50%. Рисунок 2 представлен в виде логарифма IC50, где концентрация лекарственного средства выражена в наномолях на литр. Непреобразованные оценки IC50 сведены в дополнительную таблицу S1 «Дополнительные материалы онлайн». На рисунке 2 на каждой панели звездочка обозначает логарифм среднего значения IC50 по всем аллелям. Эти данные определяют адаптивную топографию аллелей DHFR для каждого из препаратов.

Рис. 2.

Значения IC50 триазиновых антифолатов. Аллели пронумерованы от 0 (двоичный 0000, дикий тип) до 15 (двоичный 1111, который несет все четыре мутации). Красные включают S108N. Звездочка обозначает положение среднего арифметического IC50 по логарифмической шкале.

Рис. 2.

Значения IC50 триазиновых антифолатов. Аллели пронумерованы от 0 (двоичный 0000, дикий тип) до 15 (двоичный 1111, который несет все четыре мутации). Красные включают S108N.Звездочка обозначает положение среднего арифметического IC50 по логарифмической шкале.

Следует отметить ряд особенностей адаптивных топографий. Во-первых, среднее значение IC50 различается для разных препаратов почти в 8 раз (173 нМ для c58 против 1366 нМ для c61). Во-вторых, отношение максимальной устойчивости к минимальной устойчивости (макс. / Мин.) Заметно различается для разных препаратов: от 32 для c61 до 2044 для c58. В-третьих, замена S108N неизменно ассоциируется с большей чувствительностью к лекарствам.Во всех препаратах аллели, несущие серин-108 дикого типа, находятся выше / ниже средней устойчивости в соотношении 27/12, тогда как аллели, несущие мутантный 108-аспарагин, выше / ниже средней устойчивости в отношении 10/27 ( P = 0,0003, точный критерий Фишера). Это открытие является неожиданным в свете того факта, что S108N является основным фактором устойчивости к пириметамину (Lozovsky et al. 2009), но согласуется с более ранними результатами с препаратом c57 (WR99210) (Hastings and Sibley 2002).Однако обратите внимание, что c61 является исключением, поскольку замена S108N равномерно распределена выше и ниже медианы, хотя это может просто отражать степень, в которой все аллели DHFR сгруппированы вместе на более высоких уровнях устойчивости.

Аллели DHFR у всех триазиновых антифолатов согласованы в том смысле, что ранг аллелей в разных лекарствах более постоянен, чем можно было бы ожидать случайно. Чтобы количественно оценить этот результат, мы сначала оценили все 16 аллелей всех пяти препаратов с учетом связей.Нулевое распределение дисперсии по лекарственным препаратам было получено путем анализа 100000 рангов, отобранных случайным образом по наблюдаемым распределениям. Дисперсия между лекарственными препаратами с аллелями 0, 1, 5, 8, 9, 12, 13, 14 и 15 была значительно меньше, чем у нулевого распределения ( P < 0,05). Из них только аллели 14 и 15 несут S108N. Другими словами, аллели 7/8 с S108 имеют дисперсию между лекарствами, значительно меньшую, чем нулевое распределение, но только 2/8 аллелей с 108N обладают этим свойством.Эта разница сама по себе является статистически значимой ( P = 0,04, точный критерий Фишера). Разница в согласованности между препаратами S108 и 108N в значительной степени обусловлена ​​аллелями 5, 8, 9, 12 и 13, которые последовательно входят в число наиболее устойчивых аллелей среди всех тиазиновых антифолатов.

Несмотря на количество случаев, в которых пары аллелей имеют значения устойчивости в пределах одной стандартной ошибки среднего (SEM) (они обозначены как «связи» и сгруппированы вместе в одной ячейке на рис.2) каждый антифолат триазина имеет один и только один наиболее устойчивый аллель. Для лекарств c57, c58, c59 и c61 этот аллель равен 9 (аллель 1001 в двоичной системе), а для лекарства c60 это аллель 8 (1000), который отличается от аллеля 9 только наличием I164 вместо 164L.

4"> Моделирование эволюции в пространстве последовательностей

Чтобы понять эволюционные последствия рисунка 2, мы выполнили компьютерное моделирование, чтобы отследить траектории эволюции DHFR под давлением наркотиков в большой популяции, изначально установленной для аллеля 0 (бинарный 0000), поскольку современный эффективный размер популяции африканских популяций был оценено 10 7 –10 8 (Chang et al.2012). Эволюция моделировалась 10 000 раз для каждого лекарства, и траектории записывались от аллеля 0 до каждого промежуточного состояния до некоторого окончательного равновесного аллеля, который больше нельзя было заменить.

Моделирование основано на модели эволюционного отбора со слабой мутацией и сильным отбором, в которой мутации происходят нечасто, а отбор достаточно силен, чтобы фиксация или потеря каждой новой мутации происходили до того, как следующая мутация попадает в популяцию. Предполагается, что размер популяции достаточно велик, а давление лекарств достаточно интенсивно, чтобы мутации, снижающие устойчивость, не могли быть зафиксированы случайно.Блок-схема, суммирующая алгоритм отбора слабых мутаций и сильных мутаций, использованный в моделировании, включена на дополнительный рисунок S1 в Lozovsky et al. (2009).

Моделирование включает три источника случайности. Первый - это случайный выбор адаптивного ландшафта. Хотя аллели на рисунке 2 объединены в группы, оценочная устойчивость каждого аллеля имеет свою собственную SEM (дополнительная таблица S2, дополнительные материалы онлайн). Расчетные SEM в среднем в ~ 0,047 раз больше среднего значения, следовательно, они малы по сравнению с размером бинов. Но для аллелей в ячейках важна неопределенность в оценках. Из-за неопределенности каждая панель рисунка 2 определяет ансамбль адаптивных ландшафтов, каждый из которых немного отличается от одного к другому. Чтобы принять во внимание неопределенность, мы использовали тот факт, что распределение средних является гауссовым со средним значением, равным истинному среднему, и стандартным отклонением, равным SEM. Поэтому первым шагом в каждом моделировании было получение значения сопротивления для каждого аллеля путем случайного выбора числа из нормального распределения сопротивлений со средним значением, равным среднему значению аллеля, и стандартным отклонением, равным SEM.SEM достаточно велик, чтобы разрешить связи в каждой ячейке, но не настолько велик, чтобы переключить аллель из одной ячейки устойчивости в другую. Для каждого лекарственного средства случайное распределение устойчивости к каждому из 16 аллелей определяет одного члена ансамбля адаптивных топографий для лекарственного средства.

Второй источник случайности в моделировании - смещение мутаций. Поскольку аллели DHFR принадлежат P. falciparum , уместно использовать довольно большую ошибку мутаций, наблюдаемую в этом организме (дополнительная таблица S3 в Lozovsky et al.2009 г.). Эти смещения мутаций следующие:

  • N51I прямая мутация 0,137, обратная 0,154

  • прямая мутация C59R 0,112, обратная 0,195

  • S108N прямая мутация 0,162, обратная 0,120

  • I164L прямая мутация 0,051, обратная мутация 0,051 0,069

Любой фиксированный в настоящее время аллель может мутировать любым из четырех способов. В моделировании вероятности этих мутаций основаны на относительных величинах приведенных выше значений, нормализованных до суммы 1, для каждой из четырех возможностей.

Третий источник случайности в моделировании - это вероятность фиксации новой мутации с учетом ее устойчивости (приспособленности) к преобладающему в настоящее время аллелю. Для этой цели мы используем модель Фишера (1922), которая предполагает пуассоновское распределение числа потомков в бесконечной популяции. Учитывая новую мутацию с приспособленностью 1 + s относительно значения 1 для преобладающего аллеля, модель Фишера подразумевает, что вероятность того, что новая мутация в конечном итоге выживет, равна 1 - d , где d - наименьшее положительное решение d = Exp [(1 + s ) (1 - d )].

2"> Эволюционные траектории

В таблице 1 перечислены основные эволюционные траектории всех пяти антифолатов триазина, а также пириметамина. Замены аллелей перечислены по мере их появления, и список заканчивается, когда аллель больше не может быть заменен. В таблице указан процент каждого пути, наблюдаемого в симуляциях, и включены только те пути, на которые приходится не менее 5% симуляций. (Полный список включен в дополнительную таблицу S3, Дополнительные материалы онлайн.) Все пути относительно короткие, с небольшими промежуточными шагами. За исключением антифолата c59, для которого аллель пути 0–8–9 отслеживается без исключения, другие ингибиторы показывают различные результаты. Пути для c57 и c58 похожи друг на друга и вполне предсказуемы, при этом на основные пути приходится 83% и 95% всех результатов, соответственно. Пути для c60 также вполне предсказуемы, но обычно заканчиваются на аллеле 8 вместо аллеля 9. (Аллели 8 и 9 различаются только отсутствием или присутствием I164L.) В отличие от этого пути для c61 сильно различаются из-за тесной кластеризации значений сопротивления (рис. 2) и множества связей. Для c60 основные пути в ансамбле составляют только 23% результатов. Таблица 1 также показывает, что эволюционные траектории устойчивости к антифолатам триазина сильно отличаются от таковых для устойчивости к пириметамину.

Таблица 1. Ансамбль адаптивных ландшафтов

: дорожки с P 0.05 для хотя бы одного препарата.

7 6256 14 → 4 → 4 15
. Процент среди 10 000 смоделированных адаптивных топографий
.
Путь . c57 . c58 . c59 . c60 . c61 . PYR .
0 → 8 → 9 33 47 100 - 12 -
0 → 8 - - - 9025 - -
0 → 4 → 12 → 8 → 9 13 32 - - - -
0 → 4 → 12 → 8 - - 29 - -
0 → 4 → 5 12 16 - 13 - -
→ 13 → 9 12 - - - - -
0 → 4 → 12 → 13 → 9 7 - - -- -
0 → 1 → 9 6 - - - - -
0 → 1 → 5 - - - 9025 -
0 → 1 → 9 → 8 - - - 5 - -
0 → 2 → 3 - - - - 6 -
0 → 2 → 3 → 7 - - - - 5 -
- - - - - 12
0 → 4 → 12 → 14 → 15 - - - - - -
0 → 2 → 6 → 14 → 15 - - - - - 11
0 → 2 → 10 → 14 → 15 - - - - - - 10
0 → 8 → 12 → 14 → 15 - - - - - 7
0 → 8 → 10 → 14 → 15 - - - - - - 6
Процентные пути с P 0.05 83 95 100 88 23 58
7 6256 14 → 4 → 4 15
. Процент среди 10 000 смоделированных адаптивных топографий
.
Путь . c57 . c58 . c59 . c60 . c61 . PYR .
0 → 8 → 9 33 47 100 - 12 -
0 → 8 - - - 9025 - -
0 → 4 → 12 → 8 → 9 13 32 - - - -
0 → 4 → 12 → 8 - - 29 - -
0 → 4 → 5 12 16 - 13 - -
→ 13 → 9 12 - - - - -
0 → 4 → 12 → 13 → 9 7 - - -- -
0 → 1 → 9 6 - - - - -
0 → 1 → 5 - - - 9025 -
0 → 1 → 9 → 8 - - - 5 - -
0 → 2 → 3 - - - - 6 -
0 → 2 → 3 → 7 - - - - 5 -
- - - - - 12
0 → 4 → 12 → 14 → 15 - - - - - -
0 → 2 → 6 → 14 → 15 - - - - - 11
0 → 2 → 10 → 14 → 15 - - - - - - 10
0 → 8 → 12 → 14 → 15 - - - - - 7
0 → 8 → 10 → 14 → 15 - - - - - - 6
Процентные пути с P 0.05 83 95 100 88 23 58
Таблица 1.

Ансамбль адаптивных ландшафтов: пути с P 0,05 для хотя бы одного лекарства.

7 6256 14 → 4 → 4 15
. Процент среди 10 000 смоделированных адаптивных топографий
.
Путь . c57 . c58 . c59 . c60 . c61 . PYR .
0 → 8 → 9 33 47 100 - 12 -
0 → 8 - - - 9025 - -
0 → 4 → 12 → 8 → 9 13 32 - - - -
0 → 4 → 12 → 8 - - 29 - -
0 → 4 → 5 12 16 - 13 - -
→ 13 → 9 12 - - - - -
0 → 4 → 12 → 13 → 9 7 - - -- -
0 → 1 → 9 6 - - - - -
0 → 1 → 5 - - - 9025 -
0 → 1 → 9 → 8 - - - 5 - -
0 → 2 → 3 - - - - 6 -
0 → 2 → 3 → 7 - - - - 5 -
- - - - - 12
0 → 4 → 12 → 14 → 15 - - - - - -
0 → 2 → 6 → 14 → 15 - - - - - 11
0 → 2 → 10 → 14 → 15 - - - - - - 10
0 → 8 → 12 → 14 → 15 - - - - - 7
0 → 8 → 10 → 14 → 15 - - - - - - 6
Процентные пути с P 0.05 83 95 100 88 23 58
7 6256 14 → 4 → 4 15
. Процент среди 10 000 смоделированных адаптивных топографий
.
Путь . c57 . c58 . c59 . c60 . c61 . PYR .
0 → 8 → 9 33 47 100 - 12 -
0 → 8 - - - 9025 - -
0 → 4 → 12 → 8 → 9 13 32 - - - -
0 → 4 → 12 → 8 - - 29 - -
0 → 4 → 5 12 16 - 13 - -
→ 13 → 9 12 - - - - -
0 → 4 → 12 → 13 → 9 7 - - -- -
0 → 1 → 9 6 - - - - -
0 → 1 → 5 - - - 9025 -
0 → 1 → 9 → 8 - - - 5 - -
0 → 2 → 3 - - - - 6 -
0 → 2 → 3 → 7 - - - - 5 -
- - - - - 12
0 → 4 → 12 → 14 → 15 - - - - - -
0 → 2 → 6 → 14 → 15 - - - - - 11
0 → 2 → 10 → 14 → 15 - - - - - - 10
0 → 8 → 12 → 14 → 15 - - - - - 7
0 → 8 → 10 → 14 → 15 - - - - - - 6
Процентные пути с P 0.05 83 95 100 88 23 58

Эволюционные пути в таблице 1 относятся к ансамблю адаптивных топографий, которые учитывают неопределенность оценок уровней сопротивления. Моделирование также проводилось на основе объединенных уровней устойчивости, в которых единственными источниками вариаций являются те, которые связаны с предвзятой мутацией и вероятностью выживания новой предпочтительной мутации.Результаты показаны в дополнительной таблице S4, Дополнительные материалы онлайн. Они аналогичны приведенным в таблице 1 для c57-c60, а также для пириметамина, но существенно отличаются для c61. Моделирование эволюции c61 с использованием только средств приводит только к трем эволюционным путям (аллели 0–8–9 на 56%, аллели 0–2–3 на 37% и аллели 0–1–9 на 7%). Хотя пути для c61 более предсказуемы, используя однократную адаптивную топографию, основанную на средних значениях, тем не менее, только 63% результатов сходятся к аллелю с наивысшим уровнем или устойчивостью.

6"> Окончательная фиксация аллелей: оптимальные и субоптимальные пики физической подготовки

Для каждого из препаратов на рисунке 2 существует единственный аллель, обеспечивающий максимальный уровень устойчивости. Данные в таблице 2 показывают процент моделирования для каждого препарата, в котором эволюционный путь в конечном итоге сходится на максимально устойчивом аллеле (курсивный шрифт). За исключением c59, некоторые пути заканчиваются субмаксимальными аллелями, количество таких альтернативных путей варьируется от 1 (c57 и PYR) до 4 (c61), а общее процентное соотношение от 15.19 (PYR) до 57,35 (c61).

Таблица 2. Окончательный аллель

, зафиксированный в симуляциях (в процентах).

. Антифолат
.
. c57 . c58 . c59 . c60 . c61 . PYR .
Аллель максимальной пригодности 9 9 9 8 9 15
Аллель в состоянии равновесия - - - 1.7 12,18 -
5 18,5 18,12 - 22 10,63 -
7 -
8 - - - 75 - -
9 81.5 81,35 100 - 48,65 15,19
15 - 0,53 - 1 900

Окончательный аллель, зафиксированный в симуляциях (в процентах).

. Антифолат
.
. c57 . c58 . c59 . c60 . c61 . PYR .
Аллель максимальной пригодности 9 9 9 8 9 15
Аллель в состоянии равновесия - - - 1,7 12.18 -
5 18,5 18,12 - 22 10,63 -
7 - - - - - - - -
8 - - - 75 - -
9 81,5 81.35 100 - 48,65 15,19
15 - 0,53 - 1 14,69
. Антифолат
.
. c57 . c58 . c59 . c60 . c61 . PYR .
Аллель максимальной пригодности 9 9 9 8 9 15
Аллель в состоянии равновесия - - - 1.7 12,18 -
5 18,5 18,12 - 22 10,63 -
7 -
8 - - - 75 - -
9 81.5 81,35 100 - 48,65 15,19
15 - 0,53 - 1 900
. Антифолат
.
. c57 . c58 . c59 . c60 . c61 . PYR .
Аллель максимальной пригодности 9 9 9 8 9 15
Аллель в состоянии равновесия - - - 1,7 12.18 -
5 18,5 18,12 - 22 10,63 -
7 - - - - - - - -
8 - - - 75 - -
9 81,5 81.35 100 - 48,65 15,19
15 - 0,53 - 1 14,69 14,69

0 возникают такие субмаксимальные пути? Субмаксимальный пик пригодности существует, если есть хотя бы один путь к аллелю с субмаксимальной приспособленностью, но аллель не может быть смещен, потому что все мутационно доступные аллели имеют более низкую приспособленность.Эти ситуации возникают из-за определенных паттернов эпистаза более высокого порядка. В общем, эпистаз относится к ситуациям, в которых эффект мутации зависит от наличия или отсутствия других мутаций. Знаковый эпистаз возникает, когда положительный эффект мутации усиливается наличием другой вредной мутации. Крайним случаем эпистаза является эпистаз реципрокного знака, при котором две мутации, каждая из которых вредна сама по себе, полезны в сочетании (Poelwijk et al. 2007).В контексте множества сайтов в гене или геноме эпистаз реципрокных знаков может привести к развитию популяций до субоптимального пика приспособленности, что означает пик приспособленности, который является локальным максимумом, но не глобальным максимумом.

Результаты в таблице 2 показывают, что, за исключением c61, ансамбль адаптивных топографий дает картину эпистаза взаимных знаков, ведущую к субмаксимальному пику приспособленности с вероятностями, аналогичными тем, которые получены с использованием средних сопротивлений (дополнительная таблица S4, Дополнительные материалы онлайн).Препарат c61 сильно отличается в этом отношении, поскольку совокупность адаптивных ландшафтов может приводить к субмаксимальным пикам приспособленности с аллелями 5, 7 и 15, хотя они не наблюдаются на основе адаптивной топографии средних сопротивлений. Множество пиков субмаксимальной пригодности для c61 являются результатом множественных аллелей, сгруппированных в ячейках на рисунке 2, и паттернов мутационной доступности аллелей в ячейках.

1"> Основные эффекты и их парные взаимодействия и взаимодействия высших порядков

Дополнительное понимание паттернов резистентности на рис. 2 дает разделение фенотипов резистентности на основные эффекты отдельных мутаций и их попарные взаимодействия и взаимодействия более высокого порядка.Удобная структура для такого разделения использует преобразование Уолша, которое преобразует вектор W фенотипов в комбинаторно полном наборе данных аллелей в другой вектор E , элементы которого называются коэффициентами Уолша, которые измеряют основные и взаимодействующие эффекты отдельные мутации, составляющие аллели. Элементы W расположены в естественном порядке (0, 1, 2, 3,…). Преобразование имеет вид (1/2 n ) × Ψ × W = E , где W и E - это только что описанные векторы, n - количество мутации в аллелях, составляющих набор данных (в данном случае n = 4), и Ψ - это матрица Адамара, необходимая для оценки основных эффектов приспособленности и их эпистатических взаимодействий.Матрица Адамара представляет собой ортогональную матрицу 2 n × 2 n , состоящую из элементов +1 или -1. Впервые использованный при анализе эпистаза Weinreich et al. (2013) подход подробно описан в Weinreich et al. (2018).

С четырьмя двуаллельными сайтами существует четыре основных эффекта, шесть парных взаимодействий, четыре трехсторонних взаимодействия и одно четырехстороннее взаимодействие. Коэффициенты Уолша для этих компонентов и их доверительные интервалы 95% перечислены в таблице 3; они также показаны графически на дополнительном рисунке S1, Дополнительные материалы онлайн.Следуя Weinreich et al. (2006), мы сначала провели непараметрический тест Кендалла тау, чтобы определить, соответствуют ли абсолютные значения коэффициентов Уолша наивному ожиданию, что относительные величины коэффициентов должны соответствовать эпистатическому порядку: первый порядок - наибольший, второй - самый большой. второй по величине порядок и так далее. Для c57 – c61 и PYR значения P являются значимыми или почти значимыми ( P = 0,048, 0,026, 0,048, 0,075, 0,043 и 0.007 соответственно). Всего с 16 коэффициентами мощность теста слабая; однако комплексный тест, включающий все данные, дает P = 6 × 10 −8 .

Таблица 3. Коэффициенты Уолша

и их доверительные интервалы 95%.

−0,020 9025 ± 0,020 9025 ± 0,06 9025 .344 ± 0,035 0,094 ± 0,030 .264 ± 0,036
. Наркотики
.
Заказать . c57 . c58 . c59 . c60 . c61 . PYR .
1000 0,783 ± 0,012 0,825 ± 0,012 0,698 ± 0,015 0,784 ± 0,012 0,429 ± 0,020 0,378 ± 0,026
-0,720 ± 0,016 -0,651 ± 0,017 -0.646 ± 0,018 −0,268 ± 0,023 0,643 ± 0,016
0010 −0,858 ± 0,008 −0,929 ± 0,004 −0,845 ± 0,008 −0,838 ± 0,023 −0,838 ± 0,023 0,701 ± 0,015
0001 0,391 ± 0,034 0,361 ± 0,038 0,318 ± 0,034 -0,464 ± 0,030 0,464 ± 0,021 0,236 ± 0,029 684 ± 0,016 −0,858 ± 0,008 −0,647 ± 0,015 −0,744 ± 0,014 −0,375 ± 0,021 0,055 ± 0,029
1010 −0,711 ± 0,015 −0,711 ± 0,015 -0,682 ± 0,016 -0,759 ± 0,013 -0,393 ± 0,020 0,113 ± 0,028
1001 0,245 ± 0,037 0,223 ± 0,041 0,170 ± 0,037 9025,5029 0101 −0,150 ± 0,038 −0,214 ± 0,041 −0,217 ± 0,036 0,464 ± 0,030 −0,054 ± 0,026 0,044 ± 0,029
0011 −00257 -0,344 ± 0,039 -0,328 ± 0,034 0,469 ± 0,030 -0,071 ± 0,026 -0,037 ± 0,030
1110 0,779 ± 0,013 ± 0,013 0,798 ± 0,011 0,410 ± 0,020 0,143 ± 0,028
1101 -0,233 ± 0,037 -0,335 ± 0,039 -0,271 ± 0,035 0,4031 -0,161 ± 0,025 -0,065 ± 0,030
1011 -0,221 ± 0,037 -0,205 ± 0,041 -0,186 ± 0,036 0,508 ± 0,0256
0111 0,174 ± 0,038 0,223 ± 0,041 0,201 ± 0,036 -0,469 ± 0,030 0,018 ± 0,027 0,123 ± 0,029 0,357 ± 0,038 0,302 ± 0,035 -0,430 ± 0,031 0,125 ± 0,026 0,032 ± 0,029
−0,020 -0,06 9025 ± 0,034 ± 0,028 0110 9025
. Наркотики
.
Заказать . c57 . c58 . c59 . c60 . c61 . PYR .
1000 0,783 ± 0,012 0,825 ± 0,012 0,698 ± 0,015 0,784 ± 0,012 0,429 ± 0,020 0,378 ± 0,026
0,378 ± 0,026
9025 −0,720 ± 0,016 −0,651 ± 0,017 −0,646 ± 0,018 −0,268 ± 0,023 0,643 ± 0,016
0010 −0.858 ± 0,008 −0,929 ± 0,004 −0,845 ± 0,008 −0,838 ± 0,009 −0,250 ± 0,023 0,701 ± 0,015
0001 0,391 ± 0,0256 0,391 ± 0,025 −0,464 ± 0,030 0,464 ± 0,021 0,236 ± 0,029
1100 −0,684 ± 0,016 −0,858 ± 0,008 −0,647 ± 0,015 −0,744 0256 0256014 -0,375 ± 0,021 0,055 ± 0,029
1010 -0,711 ± 0,015 -0,777 ± 0,014 -0,682 ± 0,016 -0,759 ± 0,013 -0,759 ± 0,013
1001 0,245 ± 0,037 0,223 ± 0,041 0,170 ± 0,037 -0,523 ± 0,028 0,107 ± 0,026 0,160 ± 0,029
64 ± 0,000 0,768 ± 0,000 0,667 ± 0,000 0,720 ± 0,000 0,304 ± 0,022 0,700 ± 0,013
0101 -0,150 ± 0,038 4 −0,0257 −0,150 ± 0,038 4 ± 0,0257 −0256 0,036 0,464 ± 0,030 -0,054 ± 0,026 0,044 ± 0,029
0011 -0,344 ± 0,035 -0,344 ± 0,039 -0,328 ± 0,034 030 -0,071 ± 0,026 -0,037 ± 0,030
1110 0,779 ± 0,013 0,903 ± 0,006 0,736 ± 0,013 0,798 ± 0,011 0,47 0,023 0,410 ± 0,023
1101 -0,233 ± 0,037 -0,335 ± 0,039 -0,271 ± 0,035 0,444 ± 0,031 -0,161 ± 0,025 -0,065 ± 0,030
221 ± 0,037 -0,205 ± 0,041 -0,186 ± 0,036 0,508 ± 0,028 -0,143 ± 0,027 -0,094 ± 0,030
0111 0,125 ± 0,025 0,25 ± 0,036 -0,469 ± 0,030 0,018 ± 0,027 0,123 ± 0,029
1111 0,264 ± 0,036 0,357 ± 0,038 0,302 ± 0,035 -0,025,430125 ± 0,026 0,032 ± 0,029
Таблица 3. Коэффициенты Уолша

и их 95% доверительные интервалы.

−0,020 -0,06 9025 1001 9025 9025 0,030 ± 0,030
. Наркотики
.
Заказать . c57 . c58 . c59 . c60 . c61 . PYR .
1000 0,783 ± 0,012 0,825 ± 0,012 0,698 ± 0,015 0,784 ± 0,012 0,429 ± 0,020 0,378 ± 0,026
0,378 ± 0,026
9025 −0,720 ± 0,016 −0,651 ± 0,017 −0,646 ± 0,018 −0,268 ± 0,023 0,643 ± 0,016
0010 −0,858 ± 0,008 −0.929 ± 0,004 -0,845 ± 0,008 -0,838 ± 0,009 -0,250 ± 0,023 0,701 ± 0,015
0001 0,391 ± 0,034 0,361 ± 0,038 ± 0,030 0,464 ± 0,021 0,236 ± 0,029
1100 −0,684 ± 0,016 −0,858 ± 0,008 −0,647 ± 0,015 −0,744 ± 0,014 −0,375 ± 0257 21 0,055 ± 0,029
1010 −0,711 ± 0,015 −0,777 ± 0,014 −0,682 ± 0,016 −0,759 ± 0,013 −0,393 ± 0,0202 0,245 ± 0,037 0,223 ± 0,041 0,170 ± 0,037 -0,523 ± 0,028 0,107 ± 0,026 0,160 ± 0,029
0110 0,664 ± 0,000768 ± 0,000 0,667 ± 0,000 0,720 ± 0,000 0,304 ± 0,022 0,700 ± 0,013
0101 −0,150 ± 0,038 −0,214 ± 0,041 − -0,054 ± 0,026 0,044 ± 0,029
0011 -0,344 ± 0,035 -0,344 ± 0,039 -0,328 ± 0,034 0,469 ± 0,030 .026 −0,037 ± 0,030
1110 0,779 ± 0,013 0,903 ± 0,006 0,736 ± 0,013 0,798 ± 0,011 0,410 ± 0,020 0,125 0256 0,233 ± 0,037 -0,335 ± 0,039 -0,271 ± 0,035 0,444 ± 0,031 -0,161 ± 0,025 -0,065 ± 0,030
1011 -0,221 37 37 -0,221 ± 0,025205 ± 0,041 -0,186 ± 0,036 0,508 ± 0,028 -0,143 ± 0,027 -0,094 ± 0,030
0111 0,174 ± 0,038 0,223 ± 0,041 -0256 0,018 ± 0,027 0,123 ± 0,029
1111 0,264 ± 0,036 0,357 ± 0,038 0,302 ± 0,035 -0,430 ± 0,031 0,125 ± 0,01032 ± 0,029
11002 0,037 -0,037 0,025 -0,27 0,344 ± 0,035 006
. Наркотики
.
Заказать . c57 . c58 . c59 . c60 . c61 . PYR .
1000 0,783 ± 0,012 0,825 ± 0.012 0,698 ± 0,015 0,784 ± 0,012 0,429 ± 0,020 0,378 ± 0,026
0100 -0,593 ± 0,020 -0,720 ± 0,016 0,0176 -0,65 −0,268 ± 0,023 0,643 ± 0,016
0010 −0,858 ± 0,008 −0,929 ± 0,004 −0,845 ± 0,008 −0,838 ± 0,009 −0,845 ± 0,008 −0,838 ± 0,009 −0252 0,0256 0,0256701 ± 0,015
0001 0,391 ± 0,034 0,361 ± 0,038 0,318 ± 0,034 -0,464 ± 0,030 0,464 ± 0,021 0,236 ± 0,029
9025 −0,858 ± 0,008 −0,647 ± 0,015 −0,744 ± 0,014 −0,375 ± 0,021 0,055 ± 0,029
1010 −0,711 ± 0,015 −0,74 ± 0256.014 -0,682 ± 0,016 -0,759 ± 0,013 -0,393 ± 0,020 0,113 ± 0,028
1001 0,245 ± 0,037 0,223 ± 0,041 0,223 ± 0,041 0,125 0,107 ± 0,026 0,160 ± 0,029
0110 0,664 ± 0,000 0,768 ± 0,000 0,667 ± 0,000 0,720 ± 0,000 0,304 ± 0,022 0257.700 ± 0,013
0101 -0,150 ± 0,038 -0,214 ± 0,041 -0,217 ± 0,036 0,464 ± 0,030 -0,054 ± 0,026 0,044 ± 0,06 0,044 ± 0,025 -0,344 ± 0,039 -0,328 ± 0,034 0,469 ± 0,030 -0,071 ± 0,026 -0,037 ± 0,030
1110 0,779 ± 0,013 0,736 ± 0,013 0,798 ± 0,011 0,410 ± 0,020 0,143 ± 0,028
1101 -0,233 ± 0,037 -0,335 ± 0,039 0,0357 0,031 0,031 -0,161 ± 0,025 -0,065 ± 0,030
1011 -0,221 ± 0,037 -0,205 ± 0,041 -0,186 ± 0,036 0,508 ± 0,028 0,027 0,027 0,025094 ± 0,030
0111 0,174 ± 0,038 0,223 ± 0,041 0,201 ± 0,036 -0,469 ± 0,030 0,018 ± 0,027 0,123 ± 0,029 0,027
0,016 0,357 ± 0,038 0,302 ± 0,035 -0,430 ± 0,031 0,125 ± 0,026 0,032 ± 0,029

Хотя тесты Кендалла показывают, что абсолютные величины коэффициентов Уолша значительно отличаются от они имеют тенденцию уменьшаться в зависимости от эпистатического порядка.Значения P коэффициентов регрессии абсолютных величин против натуральных чисел 1–16 для c57 – c61 и PYR равны 0,013, 0,025, 0,016, 0,023, 0,020 и 0,051. Значение P для PYR несколько вводит в заблуждение, потому что, за исключением большого синергетического коэффициента Уолша, связанного с взаимодействием 0110, квадраты 2-кратных взаимодействий и взаимодействий более высокого порядка близки к 0 (таблица 3).

Квадраты коэффициентов Уолша представляют интерес, потому что квадрат величины коэффициентов монотонен по своему влиянию на топологию ландшафта (Weinreich et al.2006 г.). Для каждого из препаратов c57 – c61 и PYR в таблице 4 показана доля общих сумм квадратов всех коэффициентов Уолша 1–4 порядка, относящихся к каждому порядку эпистаза. Члены первого и второго порядка явно доминируют по всем направлениям. Этот результат подчеркивает вывод Weinreich et al. (2006), что эпистаз высшего порядка вносит незначительный вклад в топологию ландшафта.

Таблица 4. Эпистатический порядок коэффициентов Уолша

в зависимости от вклада в общую сумму квадратов.

. Наркотики
.
Заказать . c57 . c58 . c59 . c60 . c61 . PYR .
1 0,433 0,4 0,426 0,336 0.456 0,653
2 0,378 0,391 0,381 0,406 0,347 0,317
3 0,123 0,123 0,123 0,125
4 0,016 0,023 0,022 0,032 0,013 0,001
. Наркотики
.
Заказать . c57 . c58 . c59 . c60 . c61 . PYR .
1 0,433 0,4 0,426 0,336 0,456 0,653
2 0.378 0,391 0,381 0,406 0,347 0,317
3 0,173 0,186 0,171 0,226 0,022 0,032 0,013 0,001
Таблица 4. Эпистатический порядок коэффициентов Уолша

в зависимости от вклада в общую сумму квадратов.

. Наркотики
.
Заказать . c57 . c58 . c59 . c60 . c61 . PYR .
1 0,433 0,4 0,426 0,336 0.456 0,653
2 0,378 0,391 0,381 0,406 0,347 0,317
3 0,123 0,123 0,123 0,125
4 0,016 0,023 0,022 0,032 0,013 0,001
. Наркотики
.
Заказать . c57 . c58 . c59 . c60 . c61 . PYR .
1 0,433 0,4 0,426 0,336 0,456 0,653
2 0.378 0,391 0,381 0,406 0,347 0,317
3 0,173 0,186 0,171 0,226 0,022 0,032 0,013 0,001

Теперь мы рассмотрим степень, в которой паттерны эпистаза сохраняются при небольших химических возмущениях, примером которых являются антифолаты триазина.Для простоты интерпретации модели эпистаза показаны на тепловой карте на рисунке 3, где препараты перечислены вверху. Справа показаны один или несколько мутантных сайтов, на которые ссылается каждый коэффициент Уолша. На тепловой карте красный цвет указывает на повышенное сопротивление основного эффекта или синергетическое взаимодействие в эпистатическом эффекте, а синий цвет указывает на повышенную чувствительность основного эффекта или антагонистическое взаимодействие в эпистатическом эффекте. Для улучшения контраста для каждого лекарства коэффициенты Уолша на тепловой карте были нормализованы относительно абсолютного значения коэффициента с наибольшим абсолютным значением.

Рис. 3.

Тепловая карта основных эффектов и эпистатических взаимодействий аминокислотных замен для каждого из антифолатов. Красный цвет указывает на большее сопротивление или синергетическое взаимодействие, синий - на большую чувствительность или антагонистическое взаимодействие. Непрозрачность цвета масштабируется пропорционально относительному числовому значению.

Рис. 3.

Тепловая карта основных эффектов и эпистатических взаимодействий аминокислотных замен для каждого из антифолатов.Красный цвет указывает на большее сопротивление или синергетическое взаимодействие, синий - на большую чувствительность или антагонистическое взаимодействие. Непрозрачность цвета масштабируется пропорционально относительному числовому значению.

Прежде всего обратите внимание на характер эпистаза у антифолата аминопиримидина пириметамина. Все основные эффекты являются положительными, и практически отсутствует эпистаз второго или более высокого порядка, за исключением большого синергетического взаимодействия между C59R и S108N (0110).

Среди триазиновых антифолатов картина эпистаза количественно сохраняется у препаратов c57, c58 и c59.Паттерн сохраняется качественно, но не количественно в c61. Для c60 картина эпистаза не сохраняется. Существует разница в знаке между одним из основных эффектов (0001), тремя из двухсторонних взаимодействий (1001, 0101 и 1001), одним из трехсторонних эффектов (0111) и четырехсторонним взаимодействием ( 1111). Среди этого образца пяти модифицированных антифолатов триазина основные эффекты и эпистатические эффекты в значительной степени сохраняются у четырех (c57, c58, c59 и c61).

2"> Обсуждение

Трансгенные дрожжи, экспрессирующие Plasmodium DHFR, были моделью для исследований противомалярийных антифолатов более 20 лет (Wooden et al.1997; Сибли и Макриди 2001; Гастингс и Сибли 2002). Это подходящая модель, потому что DHFR играет одинаковую важную роль в метаболизме обоих организмов, Plasmodium DHFR может заменять эндогенный дрожжевой фермент, а ингибиторы Plasmodium DHFR, которые ухудшают рост паразита, также подавляют рост трансгенных дрожжи. Актуальность модели дрожжей подтверждается ее способностью воспроизводить ступенчатую эволюцию устойчивости к пириметамину, имевшую место в полевых условиях (Lozovsky et al.2009 г.).

Наше исследование было мотивировано вопросом о том, сохраняются ли основные эффекты мутаций и их паттерны попарного эпистаза и эпистаза более высокого порядка в наборе триазиновых антифолатов, различающихся только природой и положением определенных функциональных групп. Обычно, но не всегда. Мы обнаружили, что четыре производных триазина имеют очень похожие основные эффекты и паттерны эпистаза, но одно (c60) изменяет один из основных эффектов таким образом, что меняет знак многих эпистатических компонентов.Более того, мы обнаружили, что большинство соединений (исключение c59) имеют адаптивную топографию с 1-4 субоптимальными пиками приспособленности из-за эпистаза реципрокных знаков, и что популяции часто (20-50% моделирования) сходятся к субоптимальному пику.

Модель эволюции - это модель слабой мутации и сильного отбора в большой популяции, в которой фиксация или потеря каждой новой мутации разрешаются до того, как произойдет следующая мутация. Мы предполагаем постоянное давление лекарств для повышения устойчивости.Мутации, повышающие устойчивость, имеют конечную вероятность выживания, рассчитанную по формуле Фишера (1922), которая предполагает бесконечную популяцию и пуассоновское распределение числа потомков. Популяция всегда почти фиксирована для того или иного аллеля, и стойких полиморфизмов нет. Одним из ограничений является то, что анализ основан на фенотипе IC50, концентрации лекарственного средства, снижающей скорость роста вдвое; однако было показано, что на адаптивные ландшафты, включая оптимумы приспособленности, влияет концентрация лекарств (Mira et al.2015). Другое ограничение состоит в том, что модель не включает периодический отбор на устойчивость к лекарствам, компенсируемый различиями в скорости роста в отсутствие лекарства. Учет изменений в концентрации лекарства или периодического выбора открывает бесконечное множество моделей, различающихся по силе и пространственной или временной структуре давления лекарства. Ввиду множественности результатов даже в простейшей модели, вряд ли можно получить дополнительную информацию из моделей повышенной сложности.

Модель выбора предусматривает конкретную постоянную адаптивную топографию.Это было бы просто, если бы диапазон устойчивости для некоторых препаратов не был достаточно узким, чтобы оценка средней устойчивости для двух или более аллелей находилась в пределах экспериментальной ошибки. В таком случае истинное сопротивление неизвестно, и «связи» нужно как-то разрешить. Мы решаем их, выбирая для каждого аллеля значение сопротивления на основе случайной выборки из нормального распределения со стандартным отклонением, равным эмпирически определенному SEM. Каждое независимое разрешение связей приводит к немного отличающейся адаптивной топографии, поэтому, когда есть попытки, «» адаптивная топография на самом деле представляет собой совокупность адаптивных топографий, и именно этот ансамбль исследуется при моделировании.

При моделировании некоторые из препаратов приводят к большому количеству эволюционных путей, каждый из которых соответствует подмножеству ансамбля топографий. Например, моделирование c61 дает ~ 100 различных траекторий (дополнительная таблица S2, дополнительный материал онлайн). Большинство из них встречаются редко (каждый <5%), но в совокупности на них приходится почти три четверти результатов (таблица 1).

Тем не менее, большинство ансамблей путей в конце концов останавливаются на одном из относительно небольшого числа возможных состояний.Наиболее распространенные пути неизменно приводят к наиболее устойчивому аллелю, но есть также много неоптимальных пиков приспособленности (таблица 2).

Среди антифолатов триазина паттерны эпистаза в значительной степени сохранены, за исключением c60. По сравнению с другими эпистатические компоненты c60 показывают много изменений знака, включая 1/4 для основных эффектов и 7/11 для парных эффектов и эффектов более высокого порядка (таблица 3). Преобладающие пути эволюции c60 сходятся на аллеле 1000 (таблица 1), который отличается от максимально устойчивого аллеля 1001 для других триазинов.Различия между c60 и другими триазинами должны каким-то образом быть связаны с различными взаимодействиями c60 с активным сайтом DHFR; однако этот вопрос выходит за рамки настоящего исследования.

Для всех протестированных препаратов эпистатические взаимодействия третьего порядка и выше, по-видимому, незначительно, если вообще вносят вклад в общую адаптивную топографию (таблица 4). Этот вывод согласуется с результатами Weinreich et al. (2018), которые проанализировали 16 опубликованных адаптивных ландшафтов для фитнеса.

По сравнению с триазиновыми антифолатами, пириметамин проявляет очень небольшой эпистаз 2-кратного или более высокого порядка, за исключением взаимодействия между C59R и S108N (0110). Это, вероятно, отражает тот факт, что все четыре замены аминокислот произошли в природе при отборе на устойчивость к пириметамину. Более того, природные популяции могут быть полиморфными для различных комбинаций замен (Лозовский и др., 2009), что означает, что они должны были хорошо работать вместе в комбинациях.При такой совместной эволюции замены вряд ли произойдут вместе, если бы они имели большие антагонистические взаимодействия. В этом контексте следует отметить, что один большой эпистатический термин (0110) является синергическим.

В отличие от пириметамина эти же аминокислотные замены не эволюционировали совместно в присутствии антифолатов триазина. С триазинами некоторые из основных эффектов вредны для устойчивости, а также существует множество крупных антагонистических взаимодействий (таблица 3, 3). Этот контраст имеет отношение к интерпретации экспериментов, изучающих эпистаз среди нуклеотидных или аминокислотных полиморфизмов, присутствующих в различных клонах или среди лабораторных мутаций.Поскольку эти полиморфизмы или мутации не эволюционировали совместно, их взаимодействия могут быть гораздо более масштабными и антагонистическими, чем можно было бы обнаружить среди совместно эволюционирующих полиморфизмов, сегрегированных в одной и той же популяции. Такие эксперименты могут рассказать о том, что может происходить в природе, но не обязательно, что происходит.

Хотя тема не совсем уместна, мы должны подчеркнуть, что обсуждаемый нами эпистаз - это физиологический эпистаз, в отличие от статистического эпистаза (Sackton and Hartl, 2016).Последнее относится к эффектам взаимодействий на изменение частоты аллелей в полиморфных популяциях и зависит от частот аллелей, скоростей рекомбинации, а в диплоидах также от степени доминирования в гетерозиготных сайтах. Насколько нам известно, статистический эпистаз с точки зрения коэффициентов Уолша не анализировался, но здесь достаточно сказать, что величина статистического эпистаза обычно меньше и, как правило, намного меньше, чем величина физиологического эпистаза (Hill et al.2008; Мяки-Танила и Хилл 2014; Sackton and Hartl, 2016).

4"> Выводы

Таким образом, все протестированные триазиновые антифолаты дают сходные адаптивные топографии с одинаковыми или близкородственными аллелями, фиксируемыми при компьютерном моделировании ступенчатой ​​эволюции. Все топографии, кроме одной, имеют по крайней мере один неоптимальный пик пригодности. Что касается эпистаза среди аминокислотных замен, наши данные согласуются с более ранними результатами, показывающими, что эпистатические взаимодействия третьего и более высокого порядка, по-видимому, незначительно, если вообще вносят вклад в общую адаптивную топографию (Weinreich et al.2018). Кроме того, мы обнаружили, что эпистатические взаимодействия между родственными препаратами в значительной степени сохранены, за исключением c60. В той степени, в которой наши результаты в отношении триазиновых антифолатов будут распространяться на другие классы лекарств, они предполагают, что взаимодействия более высокого порядка не будут иметь большого значения в качестве консультативного инструмента при выборе ведущих соединений.

6"> Материалы и методы

7"> Конструкция дрожжевого штамма

Используя набор QuikChange Site-Directed Mutagenesis Kit (Stratagene, Cedar Creek, TX), мы сконструировали все 16 возможных комбинаций точечных мутаций в четырех сайтах кодирования аминокислот (N51I, C59R, S108N, I164L) в P.falciparum dhfr ген в дрожжевом челночном векторе GR7. Локус dhfr на каждой мутагенизированной плазмиде секвенировали для проверки наличия сконструированных мутаций (Brown et al. 2010). GR7 является производным от челночного вектора pRS314 (Sikorski and Hieter 1989; Wooden et al. 1997) и был щедро предоставлен Кэрол Сибли из Вашингтонского университета. GR7 содержит аллель P. falciparum dhfr дикого типа, регулируемый 600 парами оснований выше промоторной области S.cerevisiae DFR1 и ниже 400 пар оснований 3 ' DFR1 терминаторов транскрипции и трансляции. DFR1 является дрожжевым ортологом гена dhfr в P. falciparum . GR7 также включает дрожжевой биосинтетический маркер TRP1, и последовательность центромеры дрожжей, которая поддерживает плазмиду в количестве примерно одной копии на клетку (Hunt et al. 2005).

Штамм S. cerevisiae TH5 ( MATa leu2-3,112 trp1 ura3-52 dfr1 :: URA3 tup1 , также предоставленный Кэрол Сибли) был использован для анализа уровня устойчивости каждого из 16 аллелей DHFR к пять химически родственных антифолатов 1,3,5-триазина (Hunt et al.2005). В TH5 отсутствует функциональный DFR1 , дрожжевой ортолог гена dhfr . Если штамм не трансформирован функциональным ортологом DFR1 , для роста требуется среда с добавлением 100 мкг / мл дезокситимидинмонофосфата (dTMP; Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури). Мутация tup1 увеличивает клеточную проницаемость для dTMP (Wooden et al. 1997). Мы трансформировали TH5 каждым из 16 аллелей с помощью набора для трансформации дрожжей EZ (Zymo, Orange, CA), отбирая по присутствию вектора GR7 на среде для выпадения триптофана (SC trp -) с добавлением 100 мкг / мл dTMP ( Brown et al.2010).

0"> Измерения темпов роста

Пять химически родственных антифолатов 1,3,5-триазина (таблица 1) были протестированы против штаммов дрожжей, экспрессирующих 16 аллелей dhfr из P. falciparum. Для каждого штамма мы взяли от двух до пяти колоний с планшета с твердой средой и инокулировали подходящую культуру жидкой среды нашими трансформированными штаммами дрожжей. После роста в течение ночи культуры разбавляли до OD600 0,01 (или ∼6 × 10 90 · 10 5 4 90 · 108 клеток / мл) в серии концентраций каждого соединения в минимальной среде, а затем разливали в планшеты для микротитрования.Эти планшеты переносили на микробиологическую рабочую станцию ​​Bioscreen C (Thermo Labsystems), которая регистрировала показания OD600 каждые 15 мин в течение 2 дней. Штаммы культивировали при 30 ° C. Скорость роста рассчитывалась с помощью линейной регрессии логарифма поглощения от времени методом наименьших квадратов для трехчасового скользящего окна по длине кривой роста (Джозеф и Холл, 2004; Браун и др., 2010). Темпы роста представляют собой максимальный коэффициент регрессии среди всех скользящих окон.

2"> Расчеты IC50

Мы рассчитали устойчивость каждого штамма, используя измерения ингибирующей концентрации 50 (IC50), которые представляют концентрацию соединения, при которой скорость роста снижается на 50% по сравнению с ростом в отсутствие соединения.Расчет значений IC50 проводился, как описано в другом месте (Brown et al. 2010).

4"> Аналитические методы

Аналитические методы и моделирование были выполнены, как описано в результатах, с использованием пользовательских скриптов, написанных в системе Mathematica. Нулевое распределение рангов по всем соединениям триазина было получено с использованием функции RandomSample, а дисперсия рангов по всем соединениям вычислена и сравнена с наблюдаемой дисперсией рангов.

6"> Дополнительные материалы

Дополнительные данные доступны на сайте Molecular Biology and Evolution онлайн.

8" data-legacy-id="ack1"> Благодарности

Мы благодарим Даниэля М. Вайнрайха за предоставленную информацию для оценки коэффициентов Уолша. Это исследование было поддержано грантом Национального института здравоохранения (№ R01AI099105) Дайану Ф. Вирту и Д.Л.Х.

0" data-legacy-id="ref1"> Список литературы

Берштейн

S

,

Серохийос

AW

,

Бхаттачарья

S

,

Манхарт

M

,

Чой

JM

,

му

Вт

,

Чжоу

Дж

,

Шахнович

Э.И.

2015

.

Гомеостаз белка создает барьер для функциональной интеграции горизонтально переносимых генов в бактериях

.

PLoS Genet

.

11

(

10

):

e1005612

.

Коричневый

KM

,

Костанцо

M

,

Xu

Вт

,

Рой

SW

,

Лозовский

ER

,

Hartl

DL.

2010

.

Компенсаторные мутации восстанавливают приспособленность в процессе эволюции дигидрофолатредуктазы

.

Мол Биол Эвол

.

27

(

12

):

2682

-

2690

.

Чанг

H-H

,

Парк

DJ

,

Галинский

кДж

,

Шаффнер

SF

,

Ndiaye

D

,

Ndir

O

,

Мбит / с

S

,

Виганд

RC

,

Volkman

SK

,

Сабети

PC

, и другие.

2012

.

Геномное секвенирование малярийных паразитов P. falciparum из Сенегала раскрывает демографическую историю населения

.

Мол Биол Эвол

.

29

(

11

):

3427

-

3439

.

Костанцо

MS

,

Hartl

DL.

2011

.

Эволюционный ландшафт устойчивости к антифолатам у Plasmodium falciparum

.

Дж. Генет

.

90

(

2

):

187

-

190

.

Crona

К

,

Грин

DC

,

Барлоу

М.

2013

.

Вершины и геометрия фитнес-ландшафтов

.

Дж. Теор Биол

.

317

:

1

-

10

.

Fisher

RA.

1922

.

По коэффициенту доминирования

.

Proc R Soc Edinb

.

42

:

321

-

341

.

Хартл

DL.

2014

.

Чему мы можем научиться из фитнес-ландшафтов?

Curr Opin Microbiol

.

21

:

51

-

57

.

Гастингс

MD

,

Сибли

СН.

2002

.

Пириметамин и WR99210 оказывают противоположный отбор на дигидрофолатредуктазу из Plasmodium vivax

.

Proc Natl Acad Sci USA

.

99

(

20

):

13137

-

13141

.

Холм

WG

,

Годдард

ME

,

Visscher

PM.

2008

.

Данные и теория указывают в основном на аддитивную генетическую изменчивость сложных признаков

.

PLoS Genet

.

4

(

2

):

e1000008

.

Охота

SY

,

Детеринг

С

,

Варани

G

,

Якобус

DP

,

Schiehser

GA

,

Shieh

HM

,

Невчас

И

,

Терпинский

J

,

Сибли

СН.

2005

.

Определение оптимального антифолата третьего поколения против P. falciparum и P. vivax

.

Мол Биохим Паразитол

.

144

(

2

):

198

-

205

.

Джозеф

SB

,

Зал

DW.

2004

.

Спонтанные мутации в диплоиде Saccharomyces cerevisiae : более выгодно, чем ожидалось

.

Генетика

168

(

4

):

1817

-

1825

.

Кряжимский

S

,

Рис

DP

,

Джерисон

ER

,

Десаи

ММ.

2014

.

Глобальный эпистаз делает адаптацию предсказуемой, несмотря на стохастичность на уровне последовательности

.

Наука

344

(

6191

):

1519

-

1522

.

Лозовский

ЕР

,

Chookajorn

T

,

Коричневый

KM

,

Имвонг

M

,

Шоу

PJ

,

Kamchonwongpaisan

S

,

Neafsey

DE

,

Weinreich

DM

,

Hartl

DL.

2009

.

Поэтапное приобретение устойчивости к пириметамину у малярийных паразитов

.

Proc Natl Acad Sci USA

.

106

(

29

):

12025

-

12030

.

Мяки-Танила

А

,

Hill

WG.

2014

.

Влияние взаимодействия генов на вариацию сложных признаков с помощью мультилокусных моделей

.

Генетика

198

(

1

):

355

-

367

.

Мацуи

Т

,

Ehrenreich

IM.

2016

.

Взаимодействия ген-окружающая среда в ответ на стресс вносят дополнительный вклад во взаимодействие генотип-окружающая среда

.

PLoS Genet

.

12

(

7

):

e1006158

.

Мира

ПМ

,

Meza

JC

,

Нандипати

A

,

Барлоу

М.

2015

.

Адаптивные ландшафты генов устойчивости изменяются при изменении концентрации антибиотиков

.

Мол Биол Эвол

.

32

(

10

):

2707

-

2715

.

Палмер

AC

,

Топрак

E

,

Байм

М

,

Ким

S

,

Верес

А

,

Берштейн

S

,

Кишоны

р.

2015

.

Отсроченная приверженность эволюционной судьбе в ландшафтах приспособленности к антибиотикам

.

Нац Коммуна

.

6

(

1

):

7385

.

Poelwijk

FJ

,

Кивьет

DJ

,

Weinreich

DM

,

Тан

SJ.

2007

.

Пейзажи эмпирической пригодности показывают доступные эволюционные пути

.

Природа

445

(

7126

):

383

-

386

.

Родригес

СП

,

Берштейн

S

,

Ли

А

,

Лозовский

ER

,

Hartl

DL

,

Шахнович

Э.И.

2016

.

Биофизические принципы предсказывают адаптационные ландшафты лекарственной устойчивости

.

Proc Natl Acad Sci USA

.

113

(

11

):

E1470

-

1478

.

Родригес

СП

,

Огбунуга для

CB

,

Hartl

DL

,

Шахнович

Э.И.

2019

.

Химерные дигидрофолатредуктазы проявляют свойства модульности и биофизического разнообразия

.

Protein Sci

.

28

(

7

):

1359

-

1367

.

Sackton

ТБ

,

Hartl

DL.

2016

.

Генотипический контекст и эпистаз у отдельных лиц и популяций

.

Ячейка

166

(

2

):

279

-

287

.

Сибли

СН

,

Macreadie

IG.

2001

.

Новые подходы к борьбе с лекарственной устойчивостью от малярии с использованием дрожжей

.

ИУБМБ Лайф

.

52

(

6

):

285

-

289

.

Sikorski

RS

,

Hieter

P.

1989

.

Система челночных векторов и штаммов-хозяев дрожжей, разработанная для эффективного манипулирования ДНК в Saccharomyces cerevisiae

.

Генетика

122

:

19

-

27

.

Топрак

E

,

Верес

А

,

Мишель

JB

,

Чайт

Р

,

Hartl

DL

,

Кишоны

р.

2012

.

Эволюционные пути к устойчивости к антибиотикам при динамически поддерживаемом выборе лекарств

.

Нат Генет

.

44

(

1

):

101

-

105

.

Ван

H

,

Zhang

F

,

Цзэн

Дж

,

Wu

Y

,

Кемпер

KE

,

Сюэ

A

,

Чжан

М

,

Пауэлл

JE

,

Годдард

ME

,

Рэй

NR

, и другие.

2019

.

Взаимодействие между генотипом и средой, выведенное из генетического воздействия на фенотипическую изменчивость в Великобритании

.

Научный руководитель

.

5

(

8

):

eaaw3538

.

Ван

П

,

Ли

C-S

,

Байуми

R

,

Джимде

А

,

Думбо

ОК

,

Сведберг

G

,

Дао

LD

,

Мшинда

H

,

Таннер

M

,

Уоткинс

WM

, и другие.

1997

.

Устойчивость к антифолатам в Plasmodium falciparum контролируется анализом последовательности аллелей дигидроптероатсинтетазы и дигидрофолатредуктазы в большом количестве полевых образцов различного происхождения

.

Мол Биохим Паразитол

.

89

(

2

):

161

-

177

.

Weinreich

DM

,

Делейни

NF

,

DePristo

MA

,

Hartl

DL.

2006

.

Дарвиновская эволюция может идти лишь по очень немногим мутационным путям к более приспособленным белкам

.

Наука

312

(

5770

):

111

-

114

.

Weinreich

DM

,

Лан

Y

,

Яффе

Дж

,

Heckendorn

РБ.

2018

.

Влияние эпистаза высшего порядка на рельеф ландшафта биологической пригодности

.

J Stat Phys

.

172

(

1

):

208

-

225

.

Weinreich

DM

,

Лан

Y

,

Уайли

CS

,

Heckendorn

РБ.

2013

.

Следует ли эволюционным генетикам беспокоиться об эпистазе более высокого порядка?

Curr Opin Genet Dev

.

23

(

6

):

700

-

707

.

Деревянный

JM

,

Hartwell

LH

,

Васкес

B

,

Сибли

СН.

1997

.

Анализ дрожжей противомалярийных препаратов, нацеленных на дигидрофолатредуктазу Plasmodium falciparum

.

Мол Биохим Паразитол

.

85

(

1

):

25

-

40

.

© Автор (ы) 2020.Опубликовано Oxford University Press от имени Общества молекулярной биологии и эволюции.

Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями некоммерческой лицензии Creative Commons Attribution (http://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/), которая разрешает некоммерческое повторное использование, распространение, и воспроизведение на любом носителе при условии правильного цитирования оригинала. По вопросам коммерческого повторного использования обращайтесь по адресу [email protected]

Гичи Мировой Порядок | Сопротивление

Диктор: Эй, просто предупреждение перед тем, как мы начнем.Этот эпизод «Сопротивления » посвящен тяжелым темам и содержит резкие выражения. Мы приступим к работе сразу после этого короткого перерыва.

***

Saidu Tejan Thomas Jr .: Итак, несколько лет назад я услышал об этой группе чернокожих, живущих в Южной Каролине, в так называемой низинной стране. Семьи, которые живут здесь в основном со времен рабства. И хотя их привезли сюда в неволе, они смогли создать и поддерживать свою культуру, свой язык и, во многих случаях, даже свою землю.Что огромно. Их называют Гулла Гичи, дурацкое имя. Но главная причина, по которой я так заинтересовался Гуллой Гичи, состоит в том, что у них есть родовые связи со Сьерра-Леоне, откуда я родом, Салоне.

Saidu: Я вообще никогда не ступал в низину, я мало что знаю об этом. Но когда я услышал о них, я начал фантазировать о том, каково это быть Галлой Гичи. Я думал, что люди Гуллы, вероятно, просто живут там в мире и согласии, они живут за счет своей земли и, знаете, просто вибрируют?

Saidu: Но потом наш продюсер Мак начал рассказывать мне, каково это на самом деле.Мак - это Гулла. Прямо сейчас он живет в районе Южной Каролины. И он говорит для него, что быть Гуллой Гичи в наши дни означает одно: сражаться. Вот Мак.

Уоллес Мак: Позвольте мне рассказать вам, каково это, где я родом. Я вырос через дорогу от хлопкоочистительной машины и бесконечных хлопковых полей. Мой отец какое-то время работал в джин, когда я учился в старшей школе. Я ненавидел это. Помню, я мечтал сжечь это дерьмо.

Mack: Когда заходит солнце, здесь темнеет.Уличные фонари не так много, поэтому звезды всегда устраивают шоу. Тем не менее, весенние приливы действительно крутые, потому что они чертовски приближают луну. Это может быть полночь, но она такая яркая, что можно поклясться, что солнце выглянуло из-за занавески или чего-то подобного. Здесь было бы почти тихо, если бы не звуки сверчков, лягушек и цикад, соревнующихся друг с другом, чтобы увидеть, кто станет следующим американским кумиром на расстоянии.

Mack: Перед дождем здесь можно почувствовать соль в воздухе.А когда идет дождь, это наводнение. Большинство наших домов - это трейлеры, которые стоят на штабелях шлакоблоков. А если идет слишком сильный дождь, приготовьтесь застрять в доме на весь день, потому что двор настолько мокрый, что вы можете увязнуть, пытаясь уйти. Мы называем здесь комаров «птицами». Клянусь, вы никогда не видели более крупных комаров. И когда температура действительно падает - что случается нечасто - это не просто «на улице холодно», мы говорим: «Ee col outchea!»

Mack: В старшей школе нужно было иметь свежую пару сил, чтобы каждую пятницу вечером после футбольного матча.Если вы пришли танцевать с девушкой, вы не танцевали, мы называем это «зажиганием». И если группа людей появлялась, хорошо проводила время, на парковке производилось несколько выстрелов, но никто не погибал, она не была «зажжена», это дерьмо было «Джек, да?»

Mack: Здесь мы ловим рыбу для еды. Это то, чему нас научила бабушка, когда мы были очень, очень молоды. Ее задний двор - это земля, где болото встречается с ручьем. Ничего особенного в том, чтобы просто выйти на улицу, поймать что-нибудь, а затем вернуться, почистить и приготовить это.Я и мои старшие кузены хватали рыболовные катушки и ведра и направлялись туда при любой возможности. И еда для нас не еда без риса. Красный рис, белый рис, рис перлу, это не имеет значения.

Mack: Люди сплетничают о дамах-хулиганах и корнеплодах, а также о бутлегерах, которые делают лучший кукурузный ликер, который у вас когда-либо был - похмелье не гарантировано.

Mack: Вниз по улице от дома моей бабушки есть полуразрушенное каменное здание. Это кораллово-зеленая квартира с красной дверью, красной крышей и красными буквами, обозначающими ее название, написанное вручную краской.«Клуб африканской гордости». Когда мой папа рос здесь, люди приходили сюда тусоваться. Он и его братья и сестры были в бейсбольной команде African Pride, и по воскресеньям все люди собирались посмотреть, как они играют. Они никогда не знали имени человека, который владел клубом, они просто звали его Африканцем.

Mack: Я довольно долго рос в темноте и не знал, откуда пришли эти способы существования. Например, если бы вы подошли к моим родителям и спросили бы их о том, что они Гичи, они, вероятно, не стали бы долго поддерживать разговор.Только после этой единственной программы сборки в средней школе все начало складываться. Моя школа пригласила этого докладчика. Ее звали Королева Квет, вождь и глава государства Гулла Гичи. Она заняла центральное место и сказала нам, что была здесь с миссией, чтобы напомнить нам, кто мы такие. Помню, она много говорила о рисе и индиго. Она говорила о наших акцентах. Она сказала нам, что с ними все в порядке. Она использовала фразу «Мы - Гулла Гичи». Она сказала нам запомнить это.Мы Гулла Гичи. Этот момент был для меня огромным. Это был первый раз, когда я слышал такое подтверждение.

Mack: Когда я закончил школу, я ушел из дома и переехал. Но в прошлом году я вернулся. И то, что я видел с тех пор, как я здесь, - это люди, вовлеченные в драку. Это борьба за то, чтобы сохранить это место и контролировать его судьбу, даже если оно вырывается из-под нас.

Mack: Я Mack, а это Resistance , шоу об отказе принимать вещи такими, какие они есть.Отказываясь позволить украсть вашу землю и стереть вашу историю, потому что вы даже не сможете добраться туда, куда идете, если вы не знаете, откуда вы пришли.

Mack: Я неофициально переехал обратно в низину девять месяцев назад. Я говорю неофициально, потому что я этого не планировал. Я должен был быть здесь всего две недели. Но между Роной и семьей попытаться уехать отсюда было не так просто, как добраться сюда. Я принял решение остаться навсегда около месяца назад.За последние несколько месяцев я смог восстановить связь со старыми друзьями и завести новых. Новые друзья, такие как мой мальчик Джош. Джош примерно того же возраста, что и я. Он вырос, проводя лето со своей семьей на земле, которая им принадлежит, в местечке под названием Сол Легар.

Джош: Я всегда рос, приходя в Сол Легар в детстве. Я бы приехал сюда, и это как будто почти вернуться в прошлое, потому что наша община - это старая деревня, сельское хозяйство, рыболовство, фермерство. Так что в нем есть эстетика.Это прекрасно.

Mack: Сол Лагар - болотный остров примерно в часе езды к югу от того места, где я вырос, недалеко от материковой части города Чарльстон. Практически с любой точки обзора вы можете стоять и смотреть на бесконечное заболоченное место, которое так или иначе касается неба. Остров усеян крошечными домиками.

Джош: Итак, я всегда помню, знаете ли, старые дома, маленькие домики, очень похожие почти - не жилища рабов, потому что они были построены после рабства, но они походили на них, некоторые из них, потому что они ' так вот - они маленькие и построены в ту эпоху сразу после рабства.Сразу после рабства. Я имею в виду, что я не знал истории, в частности, в том возрасте, но я все еще чувствовал историю. Я просто почувствовал - ты что-то почувствовал. Мол, я не знала, что это было. Я подумал… это кажется… это просто… всякий раз, когда я… вы знаете, я просто чувствую что-то в воздухе. Я не знаю, предки это или духи, я не знаю, что это такое. Но с самого детства я всегда что-то чувствовал. Это было почти очаровано.

Mack: Джош не может избавиться от ощущения, что дух его предков все еще находится в этом месте, потому что многие из них были здесь.Около 40 процентов всех порабощенных африканцев, привезенных в Америку в разгар трансатлантической работорговли, были доставлены сюда через порт Чарльстона. А здесь, в Чарльстоне - и по всей низменности - был спрос на людей, привезенных из очень специфических мест: Анголы, Сенегамбии и Сьерра-Леоне. Потому что у них была возможность обрабатывать эту землю, которая была очень похожа на землю, из которой они были украдены.

Джош: Здесь проживало большинство чернокожих, потому что именно здесь большинство черных было порабощено.

Mack: Нас буквально привели сюда за наше мастерство.

Джош: Нас привели сюда, потому что мы знали, как выращивать рис. Это дерьмо непросто. Пришлось строить ирригационные системы. Вы должны были понять прилив, вы должны были все это спроектировать. Рис - это не шутка. Белые люди не знали, как сажать рис. Они не ели рис.

Mack: Племенные истории, языки, религии и культуры всех людей, которые были привезены сюда, слились воедино в народ, который стал известен как Гулла Гичи.После освобождения многие из этих африканских людей, которые были порабощены в этом районе, поселились на таких островах, как Сол Легар, где они построили общины и жили в своем собственном мире.

Джош: Соль-Леджер - одно из немногих сохранившихся сельскохозяйственных поселений гулл. По сути, мы - одно из немногих мест, которые все еще выглядят так, как если бы здесь жили ваши бабушка и дедушка или ваши прадедушка и бабушка.

Mack: Семья Джоша уже несколько поколений живет на Сол Легаре.Он может проследить это до своего прапрапрапрапрадеда Харрисона Уайлдера, который был порабощен в этой местности.

Джош: После освобождения он присоединился к армии Союза. Он пережил войну, переехал на остров Сол Легар и купил здесь землю примерно в 1870-х годах. И земля, которую он купил, - это земля, на которой наша семья жила в течение следующих - каких - пяти или шести поколений. Это то, что мы называем собственностью наследников, что означает, что, когда мой предок изначально купил землю, не было ни документа, ни завещания, поэтому земля оказалась в коллективной собственности всех его наследников.

Mack: С собственностью наследников, если у кого-то есть пятеро детей, и у этих пятерых наследников пятеро детей, то к тому времени, когда первые пять наследников умрут, останется 25 владельцев земли. Со временем это число продолжает увеличиваться, создавая ситуации, когда иногда встречаются сотни владельцев одного участка земли.

Mack: Семьи Гуллы Гичи, подобные семье Джоша, жили на земле, которую долгое время не хотели белые люди. По разным причинам: отсутствие дорог, постоянно растущие приливы и те комары Big Bird, о которых я вам рассказывал.Поселенцы не были созданы для такого дерьма. Но Гулла Гичи были. Они не просто сделали все возможное из этих условий, они устроили там дом. Но заколдованная земля, которую белые люди не хотели тогда - они хотят сейчас. Многие люди, которые до сих пор живут на Сол Легаре, стареют, и единственный реальный способ защитить его от жаждущих разработчиков - оставить его в семье - в собственности наследников.

Джош: Это подарок и проклятие, потому что собственность наследников по одну сторону меча, исторически трудно продать ее, трудно поддерживать ее в каком-то смысле, потому что она находятся в коллективной собственности, и ни у кого нет своих отдельных титулов, документов и тому подобного.Это хорошо, потому что это как бы вынуждает семьи сохранять землю, строить на ней и жить на ней. Но плохая сторона также в том, что это подвержено - вы знаете, повышению налогов, дезорганизации, мошенникам и тому подобному. Так что это подарок и проклятие. И, к счастью, это послужило нам подарком. Знаете, он у нас все еще есть, и мы все еще боремся за его сохранение.

Mack: Для семьи Джоша на Сол Легаре это в основном было благословением. Но не всем так везло.Порабощенные африканцы в Чарльстоне работали не только на плантациях. Люди были порабощены внутри города. Джош напомнил мне, что когда был построен Чарльстон, почти каждый кирпич в городе закладывал порабощенный африканец. После рабства все эти люди не отправились на острова. Некоторые предпочли остаться в городе и поработать, чтобы купить там землю. Так что собственность наследников - это не просто вещь на островах. В городе тоже было чернокожее владение землей. Но по мере того как Чарльстон превратился в крупный прибрежный город, застройщики стали дьявольски забрать эту землю обратно.

Mack: Если вы сели в машину и проехали по городу Чарльстон, вам не понадобится много времени, чтобы понять, что это место похоже на место, которое не понимает своей идентичности. У вас есть плантации, которые еще стоят. Плантации, на которые белые люди идут, чтобы жениться, что психологически и духовно чертовски странно.

Mack: Вы можете оказаться в центре города, где-нибудь вроде Ист-Бэй-стрит, где до сих пор сохранилась печально известная архитектура Чарльстона. У вас есть все эти дома в пастельных тонах, плотно сложенные рядом друг с другом в месте, которое называется Радужный ряд.Рэйнбоу Роу когда-то был многоквартирным домом для чернокожих, некоторые из которых приехали с островов. Теперь это любимец застройщиков Чарльстона.

Mack: У вас также есть области, которые выглядят так, будто кто-то только что сбросил их сюда из космоса. Блестящие жилые комплексы, построенные для массового притока трансплантатов в город: студенты MUSC и белые люди с богатством поколений, которое позволяет им переезжать в города, из которых они не родом, и начинать тупой бизнес, например, магазины оливкового масла CBD .И, конечно же, магазины Apple, Whole Foods и все остальное, что нужно белым людям, когда они куда-то переезжают.

Mack: И затем есть несколько оставшихся мест, где чернокожие жители города были вынуждены: либо Ист-Сайд, либо проекты, либо уменьшающиеся участки земли собственности наследников в городе. Там живет мой мальчик Фес. Участок земли, который из поколения в поколение принадлежал его семье.

Mack: В принципе, просто представьтесь.

Фес: Хорошо. Меня зовут Фес Джейкобс. 27 лет. Чарльстон, Южная Каролина. Гичи. [смеется]

Mack: Расскажите нам немного о том, где мы находимся, и немного об истории этого.

Фес: Хорошо. Итак, мы в моем… в настоящее время доме, в котором я сейчас живу. Моя мама выросла в этом доме, и моя бабушка построила этот дом около 60 лет назад. Итак, да, вся моя семья переехала в этот дом.Но на этом конкретном участке дороги, Сэвидж-роуд, моя бабушка выросла на этой дороге, и моя прабабушка была на этой дороге. Так что все те же люди здесь, в том числе моя семья, уже около ста лет.

Mack: Итак, что это значит для вас?

Фес: У нас много истории, верно, йоу. Также видишь, как он исчезает. Многие старики, которые уже умерли, потому что я знаю мою тетю Пипи, которая была в дороге, она умерла несколько лет назад.А еще есть Дейзи. Она умерла недавно. Так что да, остались только старейшины, которым около 80 лет, прямо передо мной, а затем моя бабушка.

Mack: Фес знает, что значит видеть землю, вырванную из-под вас. По сравнению с количеством земли, которое семья Джоша смогла сохранить, то, что удалось удержать Фесу, намного меньше. Там, где семья Джоша все еще может бродить по акрам на акрах нетронутой земли, вы можете посмотреть в шести футах от крыльца Феса, чтобы увидеть землю, которая раньше принадлежала его семье, но больше не принадлежит.Хотя это еще что-то. Больше, чем удалось сохранить многим.

Mack: Как вы думаете, вы все способны сопротивляться разработчикам и держаться за свое дерьмо?

Фес: У нас нет. Мол, в этом районе раньше было - здесь было намного больше людей.

Мак: Ага.

Fez: Мол, это как остатки того, чем раньше было сообщество.Типа, многие люди вытесняются, типа, в этом районе.

Mack: Многие люди, с которыми вырос Фес, не смогли остаться в городе Чарльстон, точка. Данные показывают, что в 2016 году в Чарльстоне было в среднем 10 выселений в день. Это делает его городом номер один в стране по количеству выселений. Ни Нью-Йорк, ни залив. Чарльстон. И не помогает то, что у землевладельцев есть новое видение Чарльстона, в которое не входят такие люди, как мы.

Fez: Мол, эти застройщики будут преследовать вас, пока вы не продадите. Я знаю дорогу с этим Walgreens, я знаю, что церковь не продавалась. Итак, есть церковь, которая просто стоит на стоянке Walgreens.

Mack: Они просто такие: «К черту! Мы просто построим вокруг тебя».

Фес: Именно так. Мол, они будут строить вокруг тебя и усложнять тебе жизнь, потому что у меня есть кузены, которые жили прямо там, где был этот Уолгринс.Но да, или, типа, когда у вас будет собственность наследников, они в конечном итоге перебросят, типа, члена семьи, и они в конечном итоге продадут его из-под, ну, вся семья. Или именитый домен. Например, с расширением некоторых из этих межштатных автомагистралей и тому подобного, они будут строить его прямо через ваш район. Вывести всех. Да, так что, даже если у тебя есть дерьмо, тебе не принадлежит дерьмо. Они придут и заберут его, несмотря ни на что. Вы можете подумать, что он принадлежит вам, но нет. Это владеют сильные мира сего.Мол, вы в значительной степени просто на этом, пока они не решат, что они хотят это снова. Ага. Мм-хм.

Mack: Этот вид джентрификации связан не только с привлечением новых людей, но и с вытеснением людей, которые всегда были там. И это жестоко.

Фес: Многие люди бездомны, и многим людям некуда идти. Потому что я знаю, что многое из этого похоже на то, что у Гичи отнимают много земли. Да, вроде, это тоже большое дело.Но многие люди даже этого не понимают, потому что люди говорят о том, да, о земле Гуллы Гичи и обо всем этом, но также в проекте участвует Гулла Гичи, Гулла Гичи в проекте. капот. Гулла Гичи - это Раздел 8. Например, Гулла Гичи - это талоны на питание, социальное обеспечение и все такое дерьмо.

Mack: И Гулле Гичи тоже приходится иметь дело со стигмой, связанной с этими вещами. Но из всех моих друзей я определенно думаю, что Фес больше всех гордится тем, что он Гичи.Настолько, что уже много лет он в сети носит прозвище Geechee Identity Extremist. И мне это нравится, потому что в детстве Гичи не всегда использовался положительно.

Fez: Когда мы были моложе, это было что-то вроде оскорбления. Типа, называя кого-то "Гичи", ниггеры привыкли к этому относиться.

Mack: Боевые слова.

Фес: Они дрались словами.Особенно с людьми старшего возраста, потому что я помню своего дядю, моего дядю Бена из Кентукки, я помню, как он приходил сюда и говорил: «Да, вы, мальчик, сейчас не хотите, чтобы его называли Гичи». Типа, да, да. Так что, я знаю, что пожилые люди, которые похожи… это будет лучше с Гуллой. Но я знаю, что мы, молодые люди, стали более комфортно общаться с Geechee и начали принимать все это. Мм-хм.

Mack: Повзрослев, я это почувствовал. Я думаю, это то, что заставляет так много людей в моей семье и людей, которых я знаю, не хотят идентифицировать себя как Гичи.В детстве мы узнали от взрослых, что быть Гичи - нехорошо. Я помню, как в школе мы ездили на экскурсии, и каждый раз мы произносили одну и ту же речь. Прямо перед тем, как мы вышли из автобуса, они лежали. «Не ходи сюда и плохо говоришь!» Вот как они это выразились: «плохо говорить». «Не заходите сюда, говоря плохо, громко и ведите себя как вы все из леса!» То, что они называют «плохими разговорами», на самом деле является тем, что люди Гуллы называют «трещать зубами», что на самом деле означает «говорить». Это просто способ разговора.Но эти настроения против гичи связаны с антиафриканскими настроениями. Это связано со стереотипами об отсталости, лени и неразумности. И это отношение к Гичи не только в небрежных комментариях о школьном автобусе, это в учебной программе.

Fez: Черт, большинство из нас в конечном итоге переходит в речевые классы и классы ресурсов. Я знаю, что сделал. Это сделал мой младший брат. Мои кузены сделали. Как будто мы чертовски близко к ESOL с детьми, которые не знали, как говорить по-английски.Ага. Они классифицировали меня как немного умного или типа того. Но даже тогда меня по-прежнему отправляли на дополнительные занятия, такие как речь и ресурсы, особенно для того, чтобы они, как бы, научили меня правильно говорить. Что бы ни значило «правильно» - да, воздушная цитата «правильно». Так что да, я даже не знал, зачем я был там. Я даже не думаю, что мои родители знали, зачем я был там. Учителя просто сказали, что мне нужно заниматься речью. Итак, мы были на уроке речи. Так что да, это обычное дело для многих детей.Например, скажем, для чтения, дети будут знать, что они читают, но они будут говорить это, например, с нашим акцентом, на нашем диалекте, на нашем типе языка.

Mack: И как это было для вас?

Фес: Ага. Итак, мы будем знать, что читаем, но говорим так, как говорим. Но учитель этого не замечает. Так что… так что оценки ниже. Так что тут много недопонимания.Итак, я знаю, что школьный совет хотел привлечь, например, преданных делу учителей ESOL только для детей-гичи. Ага.

Мак: В Чарльстоне.

Фес: В Чарльстоне. Мм-хм. Так продолжалось до тех пор, пока мы не стали - пока я не стал старше, они были просто такими, о, они действительно активно пытались научить нашу культуру из нас.

Mack: Я не рос среди большого количества людей с такой гордостью, как у Феса.Но в последние несколько лет я наблюдал, как растет гордость Гичи. Они пытались научить нас культуре, но, видимо, это не сработало. После перерыва Имма познакомит вас с новым символом возникшей борьбы - флагом. А рядом с флагом новое поколение людей Гичи, пытающихся вернуть свою историю, чтобы построить нацию, и поколение, которое дало нам план.

Mack: С тех пор, как я вернулся в Южную Каролину, я переехал сюда с группой, которая называется Lowcountry Action Committee.И часть того, что мы делаем, пытаемся построить отношения с другими группами, сосредоточенными на едином черном фронте в Чарльстоне и по всей стране. Здесь есть самые разные группы, от групп взаимопомощи, возглавляемых общинами, до «Нации ислама» и до «Чарльстонские черные жизни имеют значение». Все эти разные люди пытаются бороться за право нашего народа на существование здесь. И одна из этих групп - дуэт, известный как The Geechee Experience. Но для людей в Чарльстоне они всего лишь Крис и Акуа. Их основная цель - распространять культуру и давать людям знать, что мы все еще здесь.

Mack: Недавно показали флаг. Они говорят, что флаг предназначен для обозначения всех людей Гичи, где бы они ни находились. Итак, позвольте мне описать вам этот флаг. Это флаг с тремя горизонтальными полосами. Первый - черный, символизирующий людей. Тот, что посередине, синий, для защиты и воды. Тот, что внизу, зеленый, для земли. Посередине синей полосы изображен крабовый панцирь - для самосохранения, нашего права защищать себя и свое культурное наследие.

Mack: Крис и Акуа сказали мне, что на самом деле люди выращивают крабов только для того, чтобы делать эту старую усталую задницу «крабы в бочке». Никто никогда не задумывается о том, как крабы работают вместе, особенно в неестественной среде, такой как бочка. В середине панциря краба проходит копье, олицетворяющее историю войн Галлах, войн, которые мы вели вместе с коренными народами этой земли. По обеим сторонам панциря и копья изгибается посевной урожай общего вида, напоминающий о том, зачем нас сюда привели: о наших навыках и наших знаниях.

Mack: Что вы думаете о наличии такого флага, со всем процессом, в который он вошел, и мыслью, которая в него вошла, как, по вашему мнению, это повлияло бы на вас по-разному в детстве?

Fez: Это дало бы нам что-то, что можно было бы предположить, чтобы тяготеть вокруг, как источник, как вы знаете, культурной гордости и всего такого дерьма. Что-то вроде того, что учителя не могут цитировать без цитирования, "обучают" нас.

Мак: Мм-хм.

Fez: Мм-хм.

Mack: Этот флаг есть. Неважно, о чем ты говоришь.

Фес: Мы получили наш флаг. Мол, у нас есть символ того, кто мы есть как люди.

Mack: Прямо в центре флага есть черный перевернутый треугольник, переходящий от черной полосы к синей и зеленой.Это функция, которая обращается к нашему прошлому и провозглашает будущее. Это особенность, которая дает мне и Фесу настоящую шумиху.

Fez: Это дерьмо было тяжело. Это было тяжело. Я бы никогда не подумал о таком.

Mack: Этот треугольник представляет идею, о которой много говорят в черном сообществе, но которая не была мейнстримом в течение десятилетий: самоопределение.

Mack: Но я понимаю, что у всех разные определения самоопределения, верно? И когда вы видите самоопределение на этом флаге, что вам приходит в голову?

Фес: Ах, черт.Ну, я коммунист, так что ...

Mack: Word. Что есть, то есть.

Фес: Да, самоопределение. Капиталистическое отношение к земле - нам нужно это перевернуть, потому что наш народ в целом был общинным. Так что даже земля, на которой мы были, была коммунальной. Мол, раньше наши люди помогали друг другу строить дома. Мы привыкли заниматься сельским хозяйством и кормить друг друга. Мол, это было присуще нашим предкам.Но борьба за самоопределение все еще продолжается. Нельзя рассматривать это как то, что делали наши предки в прошлом. Это непрекращающаяся борьба за освобождение от этой эксплуататорской системы.

Мак: Правый.

Fez: Мм-хм.

Mack: Когда я слышу слово «самоопределение», я думаю о нашем праве управлять своей судьбой. И я не верю, что мы когда-нибудь сможем стать свободными людьми, пока мы в долгу перед США.Итак, мы должны построить нашу собственную нацию прямо здесь, на этой земле. А что дает нация, так это право на самоуправление. Право создавать собственную экономику и свободно торговать с остальным миром. И право создавать наши собственные политические и социальные структуры, которые существуют независимо от капиталистических и империалистических целей Соединенных Штатов. В конце концов, мы не просили быть здесь. Самоопределение касается права на автономию.

Mack: Как народ, у нас есть много разных представлений о том, как на самом деле выглядит этот путь к самоопределению, и многие люди уже борются за перемены лучшим способом, который мы умеем.Как и в Lowcountry Action Committee, я в группе с Джошем.

Mack: Мы сосредоточены на использовании взаимопомощи для построения сообщества с нашими людьми и побудить людей задуматься о том, что может сделать народный бюджет в городе Чарльстон. Мы выступаем за концепцию, называемую общественным контролем, которая включает общественный контроль над полицией. Эта идея была предложена партией «Черные пантеры» в 1969 году, и ее не следует путать с полицейскими контрольными комиссиями или тем, что мы знаем как «общественная полиция».«Нас не интересуют новые черные полицейские или телохранители. Мы пытаемся полностью отнять власть у таких учреждений.

Джош: Один из наших лучших путей вперед - попытаться демократизировать все этих институтов и дать людям власть для внесения изменений, которые они хотят внести на самом низовом уровне. Вы знаете, чтобы люди имели такую ​​власть. Вот почему мы делаем упор на общественный контроль, общественный контроль над полицией, общественный контроль над бюджетом. , общественный контроль над землей.Для нас это шаг к разрешению большинства наших самых больших противоречий.

Mack: У Джоша такое ясное видение этого, потому что там, где он родился, эта идея прочно пустила корни. И он взял меня посмотреть на это сам. Сол Легар, это очаровательное место, где его семья жила на протяжении многих поколений. По дороге мы свернули на маленькую улочку Москито-Бич-роуд. В начале дороги есть табличка с надписью: «Народ галлах приветствует вас.«Вы идете по этой кривой, и небо начинает открываться.

Mack: Хорошо. Итак, это называется Mosquito Beach.

Hosie: Это Mosquito Beach. Мы использовали чтобы все приезжали сюда. К ним со всех сторон приезжали машины. С той стороны у нас был променад.

Эрнест: Павильон.

Хози: A павильон с той стороны.А потом большая площадка. Все танцевали, и это было похоже на дом на воде.

Эрнест: Да, лорд.

Mack: Это дяди Джоша, Эрнест и Хози, и их химия бесспорна. Хози - старший брат примерно на 10 лет, но у Эрнеста такое впечатление, что их роли поменялись местами. Это как если бы Марлон был старше Шона в «Братьях Уэйанс». Они оба здесь выросли.В подростковом возрасте и в возрасте от 20 до 20 лет они могли взглянуть на болото и увидеть пляжный городок под названием Фолли-Бич. Но они не могли туда пойти, потому что Фолли-Бич был только для белых. Но им было все равно, потому что прямо здесь, где мы стоим, у них была своя вещь, Москито-Бич. Москито-Бич технически не является пляжем в традиционном смысле этого слова. Вы должны заменить песок на болота и просо. Но Москито-Бич был в 10 раз популярнее, чем когда-либо мог быть Фолли-Бич.

Эрнест: И мальчик, они тоже обычно веселились.Мальчик, эта вечеринка рушится!

Mack: Они сказали, что у вас был Джеймс - они сказали, что у вас здесь был Джеймс Браун.

Эрнест: У нас было Fats Domino. Они спускаются сюда.

Hosie: Это был Черный Кони-Айленд.

Эрнест: Да, именно так. Вы можете так сказать.

Hosie: Ну, возможно, вы тоже ничего не знаете о Кони-Айленде.

Mack: Нет, я только что переехал из Нью-Йорка.

Эрнест: Он бы тогда знал Кони-Айленд, если бы поехал… если бы он в Нью-Йорке.

Hosie: Какая часть Нью-Йорка?

Мак: Я был в Бруклине.

Хостел: Бруклин! Вот дерьмо, если ты не знаешь, где находится Кони-Айленд, тебе нужно вернуться.Если ты не знаешь, где находится Кони-Айленд, черт возьми!

Mack: Если на Москито-Бич началась драка, они ее разогнали. Если вы были слишком пьяны, чтобы вернуться домой, вас забирал кто-то из местных жителей. Они расчистили землю, заложили фундамент, построили здания и играли роль охраны по ночам, когда дела выходили из-под контроля. Общественный контроль.

Mack: Недалеко от Москито-Бич находится Приморский фермерский домик. Это был центр жизни на острове.Лодж - это огромное двухэтажное здание белого цвета с пастельно-зелеными ставнями. В нем есть круглая веранда и флигель сзади. Жители Сол Легара построили его своими руками в 1915 году.

Mack: Раньше на верхнем этаже Ложи ее члены вели дела. Дверь все время оставалась закрытой, но в верхней части двери есть небольшой круглый глазок, через который жители общины могли сбрасывать деньги. И эти деньги пошли в горшок, доступный для всех в сообществе.

Эрнест: Ну, мы были на свои деньги. Мы были собственным банком.

Мак: Понятно.

Эрнест: Ложа давала членам общины все, что они хотели, но вы должны были платить свои взносы. Никель, десять центов, пенни, четверть, доллар. Пять долларов? Вы богаты, если бы у вас было пять долларов. Да, ты был богат.

Мак: Разное время.

Эрнест: Ага, разное время, дружище. Ты знаешь? Так вот, если бы у вас были такие деньги, заходите. И они росли, и они давали вам семена, давали вам деньги на уплату налогов, все девять ярдов.

Mack: Экономика Сол Легара была основана на сельском хозяйстве, а сельское хозяйство означает сельское хозяйство, а это значит, что вам нужна страховка для ваших урожаев. Но страховые компании не вели дела с чернокожими на острове. Итак, они сделали это для себя.

Эрнест: Домик был всем. Домик был церковью, домик был школой, домик был домом для вечеринок. Хижина была местом захоронения - где семьи оставались после смерти с мертвыми телами. В какой-то момент, Уоллес, вы могли спуститься сюда, на Сол Легар, и это было автономно. Тебе не нужно было уезжать. У вас была церковь, мы ее называли часовней красоты. У нас были морепродукты, у нас был магазин Bubba Wallace - магазин Bubba Richardson. У нас был магазин Буббы Пинкни, у нас был Москито-Бич для развлечений, у нас была школа.

Мак: Угу. Это был самоокупаемый ...

Эрнест: Самостоятельный. Вот о чем это. Самодостаточность. Вот что представлял собой домик. У нас нет миллиона долларов, чтобы ссудить кому-нибудь на строительство дома, но у нас было то, что было, чтобы помочь вам построить свой дом. И у нас были свои собственные пятаки, наши собственные копейки, наши собственные копейки, свое собственное жилище, наши собственные доллары. У нас сами были эти вещи, и мы отдадим их вам, мы одолжим вам.Но убедитесь, что вы платите взносы сейчас.

Mack: Они создали свой мир, свою экономику. Народный бюджет. Домик - это священная реликвия тех времен, когда люди Гичи имели хоть какой-то контроль над образом своей жизни. Как они ели, как говорили, как учили свою молодежь, как справлялись с конфликтами и спорами. Не было никакого полицейского управления Соль-Легара. Сообщество было организовано, чтобы защитить себя и своих людей. Они жили за счет земли. Все, что вы ели, вы или кто-то из ваших знакомых вырастили, поймали или убили.Это был общинный образ жизни, изолированный от множества проявлений расистского насилия, происходящего во внешнем мире. Черт, до 60-х только у нескольких человек на острове были телефоны.

Эрнест: И это в значительной степени чрезмерно защищало нас. Это чрезмерно защищало нас.

Mack: Что вы имеете в виду?

Эрнест: То есть, нас, так сказать, отняли от внешнего мира.Кое-что из того, что происходило с сегрегацией и ненавистью к неграм, и тому подобное, это не было частью нас. Этого не было в нас.

Mack: Потому что вы все были здесь одни.

Эрнест: Мы были здесь одни.

Мак: Ага.

Эрнест: Вы знаете, мы были здесь одни. Так что мы не знали, на что это было похоже, пока вы не вышли во внешний мир, чтобы посмотреть, что происходит.Ну что случилось? Вы все вышли и начали веселиться. Вы уезжаете в Нью-Йорк, и вы идете в колледж, и получаете образование, и возвращаетесь, и медленно угасаете. Миграция черных с юга на север испортила нас.

Mack: Один-два удара Великой миграции, а затем интеграция позволили черным детям на островах попасть в школы для белых на материке. Эрнест сказал мне, что ненавидит эти школы. Более того, Эрнест сказал мне, что ненавидит то, что даже это маленькое окошко сделало с духом сообщества.

Эрнест: И через некоторое время здание пришло в отчаяние. У нас этого не было - у нас больше не было силы со стороны молодежи, и старшее поколение стало умирать. А потом разразились штормы, и здание пришло в упадок. Общество было не таким сильным, как было.

Mack: Я не собираюсь врать, я определенно поймал там бродячих. Я поступил в колледж, получил образование, а затем поехал в Нью-Йорк. И я не пытаюсь защищаться, но есть причина, по которой это все еще происходит.И это из-за отсутствия возможности. Это то, что вы делаете в глуши. Если повезет, уходи. Но я решил вернуться.

Mack: Недавно я принял решение переехать домой, потому что после отъезда я понял, что такого места нет. Низкая страна - это место, где я хочу создать семью. Здесь я хочу создать сообщество. Это в моих костях, и никакие бега не могли удержать меня от этого. Находясь здесь, я вижу, как многое меняется, и я хочу участвовать в борьбе за сохранение волшебства, которое наши люди создали здесь.

Mack: Многое из того, что люди Gullah Geechee сделали к этому моменту, было связано с самодостаточностью. Но новое поколение гичи, мы пытаемся сделать еще один шаг к самоопределению. Наши старейшины могут не использовать такие слова, как «антикапитализм» или «суверенитет», но не язык имеет значение. Когда они говорят с нами о том, что нужно делать, общая идея одна: они хотят, чтобы мы сражались.

Эрнест: Наша борьба прямо сейчас, Уоллес, наша борьба прямо сейчас - сохранить это сообщество Гуллы Гичи.

Мак: Правый.

Эрнест: Это борьба прямо сейчас.

Mack: Сражайтесь за землю.

Эрнест: Сражайтесь за землю, потому что они приближаются волнами и захватывают ее. Так что, если мы не защитим его и не овладеем им, прямо сейчас, эта культура, эта маленькая культура, она уйдет, но это последний бастион квартала Гулла Гичи.

Mack: Sol Legare - это чудо. Чтобы увидеть это сообщество, созданное руками людей, которые не просили быть здесь, но максимально использовали карты, которые им были розданы, вам просто нужно увидеть это своими глазами, чтобы понять, почему мы » Я никогда не откажусь от этого. Вдалеке вы увидите огромные белые дубы, покрытые испанским мхом, свисающие вниз, как ветви деревьев, раскачивающие цепь. Вам нужно выглянуть из палубы мистера Эрнеста и увидеть эту дорогу посреди болота, которую начал строить один из предков Джоша.

Mack: Представьте себе черного человека, который пробирается через воду, черпает грязь и кладет ее себе под ноги. Буквально строит дорогу на своем пути. Он так и не закончил, это все еще работа над проектом. Вам придется прогуляться по заднему двору мистера Хози. Двор, простирающийся на акры и акры в никуда. А затем подумайте об этих акрах в контексте других 12 000 квадратных миль, составляющих коридор Гуллы Гичи. Прямо сейчас у нас есть флаг. Я не могу дождаться того дня, когда мы наконец сможем его посадить.

Mack: Спасибо за внимание. Я хочу посвятить этот эпизод Сопротивления жизни и наследию Мухийидина Д'Баха, известного чарльстонского активиста, убитого в 2018 году. Улицы не забывают тебя, братан.

Саиду: Это был Мак. Resistance производят Уоллес Мэк, Бетел Хабте и Аарон Рэндл, а хозяином является я, Саиду Теджан Томас младший.

Саиду: Наш помощник по производству - Навани Отеро.Наш продюсер-супервайзер - Сара Маквей. Нас редактировали Линн Леви, Лидия Полгрин, Брендан Клинкенберг и Эшли Лоуренс-Сандерс. Это вам так нравится.

Saidu: Смешивание, подсчет очков и магия Кэтрин Андерсон. Дополнительное озвучивание и тема Бобби Лорда. Наш музыкальный руководитель - Лиз Фултон. Оригинальные композиции Drea the Vibe Dealer и Tah-jee Mack.

Saidu: Проверка фактов проведена Изабель Кристо. Большое вам спасибо за все, что вы сделали, Изабель.Мы очень ценим вас.

Saidu: Наше выставочное искусство - Дариен Биркс из The Stuyvesants. Кредитная музыка - "Ack a Donkey" Ogee. Мак сказал мне, что это национальный гимн Geechee, и я понимаю, почему он используется. Особая благодарность Крису и Акуа из Geechee Experience.

Saidu: Если вам понравился этот эпизод, расскажите об этом другу. Вы можете найти меня в Твиттере по адресу @saiduttj. Вы можете подписаться на нас на IG @resistancepodcast.

Saidu: Resistance - оригинальный подкаст Spotify и продукция Gimlet.Хорошо, увидимся через 2 недели.

Инструкции для заказа | Банк изолятов устойчивости к противомикробным препаратам | Устойчивость к антибиотикам / противомикробным препаратам

На этой странице объясняется, как пользователи могут просматривать этот общедоступный веб-сайт и заказывать тщательно отобранные изоляционные панели.

Клиенты могут бесплатно создать учетную запись и заказать изолирующие панели. Все учетные записи и заказы будут проверены на утверждение перед отправкой.


Зарегистрируйтесь, чтобы создать учетную запись

Перейдите на страницу регистрации и введите необходимую информацию.Используйте адрес электронной почты и стационарный телефон вашего учреждения, личные адреса электронной почты и мобильные телефоны не принимаются.
После регистрации ваша учетная запись перейдет в статус «Ожидает одобрения». Новые аккаунты будут одобрены или отклонены в течение 2 рабочих дней.

Примечание: Центры по контролю и профилактике заболеваний прямо или косвенно не поддерживают какое-либо учреждение, утверждая учетную запись или заказ.


Оформить заказ

1.Перейдите в раздел «Все изолированные панели» или «Поиск изоляции» и добавьте панель (и) в корзину, нажав кнопку «Добавить панель в корзину» в правом верхнем углу страницы. После добавления веб-сайт предложит вам либо продолжить просмотр сайта, либо оформить заказ, выберите подходящий вариант.

2. Чтобы проверить , сначала просмотрите содержимое корзины и ответьте на ряд вопросов о том, как будут использоваться запрошенные панели. Если вы заказывали ранее, ваши ответы будут автоматически заполнены ответами из вашего последнего заказа.

3. Предоставьте информацию о компании и отгрузке (обратите внимание, что мы не отправляем товар по почтовым ящикам) . Любые изменения в адресной информации будут сохранены в вашем профиле.

4. Щелкните, чтобы отправить, откроется страница подтверждения. На странице подтверждения указан номер заказа, сводка и ссылки на формы, необходимые для утверждения заказа.

5. Вам нужно будет распечатать, заполнить, подписать и отправить по электронной почте формы хранителям AR Isolate Bank по адресу ARbank @ cdc.губ. Пожалуйста, используйте номер заказа в теме письма.
Начало страницы


Обработка заказов

CDC отправляет уведомления по электронной почте о статусе вашего заказа. Ниже перечислены различные статусы заказа:


  • Необходимые документы в ожидании: Заказ был отправлен, но CDC еще не получил ваши формы, необходимые для обработки заказа.
  • Проверенные документы: CDC получил и подтвердил, что все необходимые документы заполнены и подписаны.
  • Заказ проверен: Информация в формах соответствует запросу заказа.
  • Допущено к отгрузке: Заказ отправлен в лабораторию для выполнения.
  • Отправлено: Заказ отправлен, номер для отслеживания будет добавлен к информации о заказе под вашей учетной записью.
  • Доставлено: Курьер отметил этот заказ как доставленный.

К началу страницы

Время обработки и оборачиваемости

Заказы будут отправлены в течение 10 рабочих дней с момента утверждения *. Чтобы избежать задержек с вашим заказом, следуйте инструкциям, изложенным в меню «Необходимые формы», и проверьте страницу «Вопросы и ответы» для получения дополнительной информации.

* доставка зависит от наличия на складе или может быть отложена, если будет высокий спрос

Примечание:

  • Эти панели являются собственностью CDC и доступны в сотрудничестве с FDA.
  • Материалы не должны использоваться повторно для оценки или разработки других методов тестирования.
  • Распространение материалов запрещено.
  • Плата за панели не взимается, но отправители запроса должны оплатить стоимость доставки.

К началу страницы

Поиск доступных панелей

Вы можете просматривать все панели изоляции или искать изоляты по определенным критериям.

Страница поиска изоляции возвращает отдельные записи изоляции, при выборе которых вся панель добавляется в корзину. Данная панель может быть добавлена ​​в корзину только один раз за заказ. Изолированный поиск предназначен для выявления записей, соответствующих всем указанным критериям.Если результатов не найдено, вам нужно будет расширить область поиска, уменьшив количество указанных критериев.

В банке изолятов AR есть одна уникальная панель под названием «Изоляты с новой или новой устойчивостью к антибиотикам». Эта панель используется для предоставления новых индивидуальных изолятов. Выбор этой панели позволит вам выбрать и добавить в корзину отдельные изоляты внутри панели.


Начало страницы

Южный манифест и «Массовое сопротивление» Брауну v.Совет

«Если мы сможем организовать Южные штаты для массового сопротивления этому порядку, я думаю, что со временем остальная часть страны поймет, что расовая интеграция на Юге неприемлема». Сенатор Гарри Флад Берд, 1954 г.

Почти сразу после того, как председатель Верховного суда Эрл Уоррен закончил зачитывать единогласное мнение Верховного суда по делу Браун против Совета по образованию рано утром 17 мая 1954 года, белые политические лидеры Юга осудили это решение и поклялся бросить вызов этому.

Джеймс Истленд, влиятельный сенатор от Миссисипи, заявил, что «Юг не будет подчиняться и подчиняться этому законодательному решению политического органа».

Сенатор Гарри Берд из Вирджинии охарактеризовал это заключение как «самый серьезный удар, который когда-либо наносился по правам штатов в вопросе, жизненно затрагивающем их авторитет и благосостояние». В то время сенатор Берд возглавлял «Машину Берда», самую могущественную политическую организацию Вирджинии. Он стал ведущим архитектором жесткой сегрегационной кампании Вирджинии.

В августе 1954 года губернатор Вирджинии Томас Бансон Стэнли создал комиссию для заговора, чтобы бросить вызов Brown . Комиссия Грея, названная в честь сенатора штата Гарланд Грея, постановила, что посещение школы не должно быть обязательным; деньги должны быть выделены родителям в качестве пособия на обучение, если они выступают против интеграции; а уполномоченные местные школьные советы сами распределяли учащихся в школы.

К 1956 году сенатор Берд создал коалицию из почти 100 южных политиков, чтобы подписать его «Южный манифест» - соглашение о противодействии реализации Brown .

25 февраля 1956 года сенатор Берд выступил с призывом к «массовому сопротивлению» - сборнику законов, принятых в ответ на решение Brown , которое агрессивно пыталось предотвратить и предотвратить интеграцию школ. Например, доктрина массового сопротивления включала в себя закон, который наказывал любую государственную школу, которая объединилась, путем отмены государственных средств и, в конечном итоге, закрытия школы.

В дополнение к юридическому и законодательному сопротивлению, белое население юга Соединенных Штатов Америки в массовом порядке мобилизовалось, чтобы отменить постановление Верховного суда.В штатах по всему Югу белые открывают частные академии для обучения своих детей, сначала используя государственные средства для поддержки посещения их детьми в этих раздельных учреждениях, пока использование государственных средств не было успешно оспорено в суде. В других случаях сегрегационисты пытались запугать чернокожие семьи угрозами насилия и экономической репрессалией против истцов в местных делах. Тургуд Маршалл описал ситуацию в Миссисипи региональному секретарю NAACP в сентябре 1954 года так:

Все кредиты были отозваны у президента нового отделения, кладовщика в Лелзони.Стрингера в Колумбусе размазывают через Американский Легион …… Его кредит был отозван в Колумбусе несколько месяцев назад… Один из наших членов, подписавший петицию в округе Уолтхолл, не получил продления своего контракта на управление школьным автобусом…. Доктор Бэттл, один из наших ключевых людей в Индианоле, говорит, что многие его пациенты на близлежащих плантациях теперь являются бывшими пациентами.

Самые вопиющие нарушители просто закрыли государственные школы. В ответ на приказ от 1 мая 1959 года об интеграции школ власти округа Принс-Эдуард, штат Вирджиния, вместо этого закрыли всю систему государственных школ.Вся система государственных школ оставалась закрытой в течение следующих пяти лет.

В сентябре 1958 года, когда школы в Норфолке, Шарлоттсвилле и округе Уоррен были на грани интеграции по решению суда, они были закрыты государственными чиновниками. Хотя Верховный суд Вирджинии отменил закон о закрытии школ, Генеральная Ассамблея сделала посещение школы необязательным.

Тем временем Центральная средняя школа в Литл-Роке, штат Арканзас, стала плацдармом для тревожной картины заблудшей демократии.Реакция на присутствие Little Rock 9 была настолько резкой, что президент Эйзенхауэр почувствовал необходимость вызвать Национальную гвардию. Дело Little Rock 9 привело к решению Верховного суда Cooper v. Aaron (1958), знаменательному постановлению, в котором Верховный суд подтвердил свое решение в деле Brown и обязанность штатов следовать мандату Верховного суда США. десегрегировать школы.

Перед лицом этого яростного и непрекращающегося сопротивления LDF подала в суд на сотни школьных округов по всей стране, чтобы подтвердить обещание Brown .Лишь после более поздней победы LDF в деле Грин против школьного совета графства (1968), и Суон против Шарлотты-Мекленбург, (1971) Верховный суд издал распоряжения о ликвидации сегрегации «по корню». В этих постановлениях Суд обозначил конкретные факторы, которые необходимо учитывать для устранения последствий сегрегации, и обеспечил, чтобы федеральные окружные суды могли более решительно осуществлять свои полномочия.

Inslee сталкивается с растущим сопротивлением распоряжениям о домохозяйствах, говорит, что изменения будут зависеть от данных

Gov.Inslee обращается к соблюдению приказа "оставаться дома".

Губернатор Inslee обращается к соблюдению порядка "оставайтесь дома"

ОЛИМПИЯ, Вашингтон. - Губернатор Вашингтона Джей Инсли заявил в среду, что приказ о "не выходите из дома" работает, чтобы замедлить распространение коронавируса в штате, отметив, что, хотя некоторые могут не согласиться с его решениями, любые изменения будут основаны «на данных и науке».

Инсли комментирует это после того, как шериф третьего по величине округа штата Вашингтон заявил, что не будет обеспечивать соблюдение приказа, заявив, что он нарушает конституционные права людей, и после голосования во вторник совет уполномоченных в округе Франклин для возобновления деятельности в округе .Один из членов комиссии сказал в среду, что сожалеет о своем голосовании, и на четверг было запланировано собрание, на котором будет рассмотрен вопрос об отмене их резолюции об отклонении приказа о сохранении дома.

«Наш офис не будет руководствоваться иррациональными силами, которые действительно могут сыграть на нашем здоровье», - сказал Инсли. «Если бы мы сделали эту ставку и проиграли, мы бы отказались от с трудом завоеванных успехов, которых мы уже добились благодаря приверженности вашингтонцев этому приказу».

Шериф округа Снохомиш Адам Фортни объявил о своей позиции в Facebook во вторник вечером после обращения Инсли по всему штату, в котором губернатор сказал, что штат не сможет отменить многие ограничения на пребывание дома, введенные для борьбы с коронавирусом, к маю 4.Это дата, до которой в настоящее время действует текущая директива, но Инсли надеется, что моделирование состояния здоровья в ближайшие дни позволит возобновить некоторые действия.

«Мы не можем позволить отдельным сотрудникам правоохранительных органов произвольно решать, какие законы они собираются применять, а какие нет», - сказал Инсли в среду. «Если у людей есть несогласие с законом, это может быть решено в суде».

Шериф округа Снохомиш заявляет, что не будет обеспечивать выполнение приказа Инсли об убежище

Шериф округа Снохомиш заявляет, что не будет обеспечивать выполнение приказа Инсли об убежище

Генеральный прокурор Боб Фергюсон в среду написал в Твиттере, что он обратится прямо в Фортни.А после того, как главный юрисконсульт Инсли направил в среду письмо администратору округа Франклин, в котором говорилось, что голосование там нарушает закон штата, комиссар округа Франклин Брэд Пек сказал, хотя, по его мнению, губернатор превысил свои полномочия, его голосование во вторник было ошибкой.

«На окружных комиссарах лежит реальная ответственность делать эти вещи разумно», - сказал Пек.

Также в среду кандидат в губернаторы от республиканской партии Джошуа Фрид подал на Инсли в федеральный суд, оспаривая действующий запрет на религиозные собрания в соответствии с приказом о сохранении дома.В жалобе утверждается, что запрет является нарушением прав Первой поправки, касающихся свободы вероисповедания, свободы слова и собраний, хотя Инсли сказал в среду, что ничто в его приказе не запрещает людям совершать религиозные обряды и что многие религиозные учреждения создали системы, позволяющие людям собираться в электронном виде.

Подан иск о запрете религиозных собраний

Подан иск о запрете религиозных собраний

Инсли сказал, что возвращение к общественной жизни потребует ряда шагов и что до тех пор, пока не будут выполнены несколько критериев, включая адекватное тестирование и вакцину, предотвращение увеличение числа новых дел - главный приоритет.А во вторник вечером он объявил, что ко второй неделе мая около 1500 сотрудников будут сосредоточены исключительно на отслеживании контактов.

Инсли сказал, что государственный санитарный врач считает, что распространение COVID-19, вероятно, снижается в штате Вашингтон, основываясь на данных о госпитализациях, подтвержденных случаях и смертях, но он все же призвал к осторожности.

Инсли сказал, что подавляющее большинство штата соблюдает приказ о домохозяйстве, и сказал, что он хочет, чтобы «вашингтонцы продолжали заботиться о себе и своих соседях.

«Послушайте, это работает, - сказал он. «Это спасает жизни. Сегодня есть люди, живущие благодаря совместной работе, которую мы проделали в штате Вашингтон. Сейчас не время сдаваться ».

Более 12 280 человек в штате Вашингтон дали положительный результат на вирус, и по меньшей мере 682 человека скончались. Вирус вызывает симптомы от легкой до умеренной у большинства пациентов, и подавляющее большинство выздоравливает. Но он очень заразен и может передаваться теми, кто выглядит здоровым, и может вызвать тяжелые заболевания и смерть у некоторых пациентов, особенно у пожилых людей и людей с сопутствующими заболеваниями.

Дом республиканского лидера Дж. Т. Уилкокс сказал, что считает вирус серьезным, но предупредил, что терпение общественности достигнет критической точки, если в ближайшее время не произойдет снятие ограничений. В среду он сказал, что существуют несоответствия с тем, какие предприятия считаются важными и второстепенными, отметив, что, хотя общественное строительство разрешено, частное строительство по-прежнему запрещено. Инсли сказал, что частное строительство может снова начаться в ближайшее время, но не назвал сроков, заявив, что он надеется на дополнительное моделирование в четверг, чтобы обосновать свое решение.

«Я не утверждаю, что мы должны быть менее безопасными. Я утверждаю, что тот факт, что он теряет легитимность, делает нас менее безопасными, - сказал Уилкокс об Инсли. «И это от того, кто приложил немало усилий, чтобы поддержать его».

Уилкокс сказал, что он надеется, что губернатор вскоре изложит общественности точные показатели и цели для возобновления экономики, а также конкретные шаги, которые предприятия могут предпринять, чтобы снова открыть свои двери, даже если это происходит поэтапно.

«Люди просто хотят знать, - сказал Уилкокс.

Некоторые группы все чаще обращаются к Inslee с просьбой ослабить порядок пребывания дома в штате, а в ходе акции протеста на выходных в Олимпию приехало около 2500 человек.

Тем не менее, новый опрос показывает, что американцы в подавляющем большинстве по-прежнему поддерживают приказы о домохозяйствах и другие усилия по замедлению распространения коронавируса. Большинство считает, что в ближайшее время снятие таких ограничений небезопасно.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

[an error occurred while processing the directive]