Размер фбс блоков: что это и где можно использовать, технология монтажа

Содержание

Размеры фундаментных блоков фбс: технические характеристики и маркировка

 

Устройство надежного фундамента – необходимое условие при строительстве прочного и долговечного дома. В современном строительстве все более популярны сборные или комбинированные фундаментные конструкции. Оптимизировать затраты на сооружение фундамента с обеспечением его высокой прочности позволяют бетонные фундаментные блоки Ф, ФЛ, ФБС и другие, широкий ассортимент которых позволяет подобрать продукцию подходящих размеров.

Технические характеристики

По форме эта продукция представляет собой прямоугольный параллелепипед, материалы для изготовления: тяжелый, керамзитовый или силикатный бетон, плотность которого не менее 1800 кг/м3.

Класс прочности на сжатие и размеры этой продукции определяют:

  • прочность создаваемой конструкции;
  • технология укладки;
  • сроки проведения работ;
  • стоимость продукции.

Размеры фундаментных блоков регламентируются ГОСТом 13579-89, их выбор зависит от:

  • толщины стен;
  • характеристик грунта;
  • массы строения;
  • требуемой прочности основания;
  • площади фундамента.

Маркировка фундаментных блоков: Ф, ФЛ, ФБС, БФ, ФР, ФБП

Тип элементов нулевого цикла обозначается буквенно-цифровыми символами. Буквы означают:

  • Ф – изделия стаканного типа, устанавливаются под колонны, изготавливаются из тяжелого бетона или железобетона;
  • ФЛ – ж/б продукция, применяемая для устройства ленточных фундаментов;
  • ФБС – сплошные неармированные изделия, востребованные для сооружения фундаментов, стен подвалов и технических подполий;
  • ФБП – блоки фундаментные пустотные;
  • БФ – ж/б ленточные, используются при возведении стен объектов сельскохозяйственного и промышленного назначения;
  • ФР – ж/б элементы для трехшарнирных рам.

В маркировке после букв располагаются цифры, которые характеризуют размеры изделий, выраженные в дециметрах, округленных до целых чисел:

  • для ФЛ указывают ширину и длину блока;
  • для остальных – длину, ширину, высоту.

Как правильно выбрать элементы для нулевого цикла?

Советы по выбору размеров фундаментного блока:

  • Оптимально, чтобы на длину стены приходилось 4-5 штук.
  • Чем неустойчивей грунт, тем габаритнее должны быть блоки. Для глин и суглинков, оказывающих давление на элементы нулевого цикла, выбирают крупногабаритные полнотелые изделия ФБС 24.6.6. Для использования на сухих песчаных грунтах, не требующих глубокой закладки фундаментной ленты, подойдут ФБС 12.6.6.
  • Блок может выступать с одной стороны стены не более чем на 100 мм, с обеих сторон – не более чем по 60 мм.

Таблица размеров и других характеристик фундаментных блоков ФБС

Цифровое обозначение

Размеры, мм

Масса, кг

Длина

Ширина

Высота

24.3.6

2380

300

580

970

24.4.6

2380

400

580

1300

24. 5.6

2380

500

580

1630

24.6.6

2380

600

580

1960

12.2.6

1180

200

580

320

12.3.6

1180

300

580

485

12.4.6

1180

400

580

640

12.5.6

1180

500

580

790

12.6.6

1180

600

580

960

12.2.3

1180

200

280

160

12.3.3

1180

300

280

240

12. 4.3

1180

400

280

310

12.5.3

1180

500

280

380

12.6.3

1180

600

280

460

9.2.6

880

200

580

235

9.3.6

880

300

580

350

9.4.6

880

400

580

470

9.5.6

880

500

580

590

9.6.6

880

600

580

700

Для малоэтажных домов небольшой массы, построенных из дерева или пеноблоков, производители предлагают малогабаритные изделия, выпускаемые в соответствии с ТУ с размерами 400х200х200 мм.

Их можно укладывать самостоятельно, без использования тяжелой строительной техники. Также популярны нестандартные ФБС 6.6.6 из тяжелых бетонов, применяемые для сооружения:

  • стен подвалов;
  • фундаментов столбчатого типа для небольших строений сезонного проживания;
  • для создания комбинированных оснований – в сочетании с ленточными фундаментами.
Поделиться ссылкой:

Производим и предлагаем продукцию:

Читайте также:

Фундаментные блоки: маркировка по ГОСТ, размеры

Маркировка фундаментных блоков несет в себе информацию для покупателя о размерах изделия и материала, из которого оно изготавливалось.

Различают 3 основных типа фундаментных блоков:

  • ФБС – блоки фундаментные сплошные.
  • ФБВ – блоки с продольным вырезом, предусмотренным для прокладки коммуникаций.
  • ФБП – блоки с полостью прямоугольной формы.

Габариты изделий – длину, ширину и высоту – принято указывать в дециметрах, округляя до них значения в метрах. Типовые размеры блоков позволяют подобрать изделия нужных габаритов для любого фундамента, без дополнительной подгонки.

По ГОСТУ выделяют три вида типовых размеров блоков ФБС:

  • Блоки ФБС 2,38 м в длину. При этом высота составляет 0,58 м, а ширина – от 300 до 600 м.
  • Блоки 1,18 м в длину. Выпускаются с высотами 0,58 и 0,28 м, шириной значением 400 мм, 500 и 600 мм.
  • Блоки 0,88 м в длину. Высота составляет 0,58 м и выпускаются со значениями 300, 400, 500 и 600 мм по ширине.

При обозначении размера блока последовательно указываются: длина, ширина, высота. Например, блок 1,18 м в длину с шириной полметра и высотой 0,58 м будет иметь такое обозначение: 12-5-5.

Большинство блоков производят из бетона М-100 с известковым щебнем. Этот тип бетона имеет большую прочность на сжатие – самый важный параметр, учитывая область применения изделий. Чтобы обозначить материал, из которого сделан фундаментный блок, применяется буквенная маркировка.

Так, буква «Т» обозначает тяжелый бетон, «С» - силикатный, «П» - пористый, «Л» - легкий бетон.

Таким образом, ФБС 12-3-6т расшифровывается: фундаментный блок сплошной, с длиной 1,18 м, 0,3 м по ширине и 0,6 м в высоту, изготовленный из тяжелого бетона.

По ГОСТу, допустимы следующие отклонения в заявленных размерах фундаментных блоков:

  • до 13 мм по длине;
  • до 3 мм по линейности;
  • до 8 мм по высоте и ширине.

Расчет количества блоков для закладки основания постройки довольно прост: объем будущего фундамента следует разделить на объем типового блока, который планируется использовать. При этом блоки выдерживают такую огромную нагрузку, что могут служить основой для возведения здания до 12 этажей.

При монтаже блоков главное, что нужно учитывать – отсутствие монолитности подобного фундамента. Поэтому перед установкой ФБС заливается армированный бетонный пояс в случае, если сами блоки не оснащены арматурой. Идеальный грунт для фундаментных блоков – крупный песочный при водоносном горизонте на глубине.

Звоните +7 (863) 296-39-51 и наши менеджеры ответят на все Ваши вопросы.

Блоки ФБС размеры согласно ГОСТ 13579-78, База ЖБИ.

ФБС согласно ГОСТ 13579-78 расшифровывается как “Фундаментные блоки сплошные”. Блоки ФБС размеры которых приведены ниже, производятся на железобетонных комбинатах посредством формовочного литья. Их используют в качестве элементов сборного фундамента. Строительстве цокольных помещений, подвалов, стен промышленных зданий.

Читать далее…

Производитель ФБС в Москве

Основным преимуществом использования блоков ФБС является скорость строительства и прочность готового основания. Эти бетонные изделия не армируются, т.е. при их создании практически не используется арматура. Металл применяется только в качестве монтажных петель. Средний расход стали (для ФБС 24-4-6) полтора килограмма. Используемый бетон по ГОСТ – марки B-7.5 (М100) и B-15 (М200). Несмотря на низкое качество бетонной смеси, ФБС отлично держат статичные нагрузки на сжатие.

Они очень хрупкие, легко ломаются при ударе. В силу своей правильной геометрической формы, сборка фундамента происходит по принципу конструктора “Лего”. Проектировщик на стадии подготовки документации подбирает элементы фундаментного строительства по заданным размерам здания.

Сводная выдержка из таблиц ГОСТ 13579-78

Буквенные индексы означают:

  • Т – тяжелый бетон.
  • П – пористый бетон (керамзитобетон)
  • С – плотный бетон (силикатный)
ИЗДЕЛИЕМарка бетонаД (l) в мм.Ш (b) в мм.В (h) в мм.Вес тонн
ФБС 24-3-6 ТB 7,5 (M100)23803005800.97
ФБС 24-4-6 ТB 7,5 (M100)23804005801.3
ФБС 24-5-6 ТB 7,5 (M100)23805005801.63
ФБС 24-6-6 ТB 7,5 (M100)23806005801.
96
ФБС 24-3-6 ПB 7,5 (M100)23803005800.73
ФБС 24-4-6 ПB 7,5 (M100)23804005800.98
ФБС 24-5-6 ПB 7,5 (M100)23805005801.22
ФБС 24-6-6 ПB 7,5 (M100)23806005801.47
ФБС 24-3-6 СB 15 (М200)23803005800.81
ФБС 24-4-6 СB 15 (М200)23804005801.09
ФБС 24-5-6 СB 15 (М200)23805005801.36
ФБС 24-6-6 СB 15 (М200)23806005801.63

Размеры фундаментных блоков

В таблице ниже представлены все типовые размеры блоков фундаментного строительства.

Блоки ФБС размеры

Блоки ФБС размеры и цены

Наша компания является производителем фундаментных блоков в Московском регионе.

Мы предлагаем заказчикам бетонные изделия высокого качества. ФБС нашего производства это:

  • Бетон марки М 100 на гравийном щебне.
  • Идеальная геометрия фундаментного блока.
  • Большой складской запас самых ходовых позиций (ФБС 24-4-6, ФБС 24-6-6).
  • Своевременная доставка заказчику.
  • Индивидуальный подход к каждому клиенту в расчете на долговременное сотрудничество.



Кроме того мы готовы принять заказ на индивидуальные требования потребителя. Например изготовить фундаментные блоки на гранитном щебне или на марке бетона М-300. Мы открыты к диалогу и готовы рассмотреть условия сотрудничества.

Звоните – договоримся!

+7 (495) 640-61-66

Наша группа в ВК.

Размеры блоков ФБС

Фундаментные блоки ФБС: как правильно определить нужные размеры и рассчитать требуемое количество изделий для быстрого и безошибочного возведения надежного сборного фундамента для вашего дома

Хороший дом всегда начинается с надежного фундамента, и эта аксиома лежит в основе проектирования и технологий возведения прочных и долговечных зданий.

В современном строительстве все популярнее становятся сборные и комбинированные основания, что значительно удешевляет «нулевой» цикл возведения дома без потери прочности. Для этого используются блоки ФБС, размеры и прочность которых позволяют подобрать все элементы в полном соответствии с проектными параметрами.

Чтобы выбор фундаментных блоков был правильным, необходимо учитывать, что фундамент не только должен выдерживать вес здания, но и равномерно распределять его по грунту.

 

Технические свойства и особенности блоков ФБС

Изготовитель должен обеспечивать точное соответствие прочностных и геометрических характеристик блоков требованиям ГОСТ 13579-78, ведь любое отклонение может в последующем привести к быстрому разрушению здания. Блоки фундаментные ФБС представляют собой параллелепипед из тяжелого, керамзитового или силикатного бетона плотностью не менее 1800 кг/м³ без пустот, с технологической подформовкой для вертикального армирования кладки раствором. Класс прочности бетона предусматривается не ниже В 7,5.

Технология изготовления предусматривает уплотнение бетона на вибростолах, а специальные опоки обеспечивают заданные размеры и плотную, гладкую поверхность. Изделия с нарушением геометрии в последующем не позволят возвести ровную кладку, а толщина швов будет больше нормативных значений (2- 5 мм), что может нарушить гидроизоляцию всей конструкции. Качественная, плотная поверхность служит гарантией от преждевременного растрескивания и разрушения даже во влажной среде.

ГОСТ на блоки ФБС регламентирует изготовление изделий длиной 2380, 1180 и 880 мм. При этом ширина варьируется от 300 до 600 мм с интервалом 100 мм, высота может быть 280 и 580 мм. Изделия с высотой 280 мм практически не используются в современном строительстве фундаментов по причине низкой несущей нагрузки при практически одинаковой цене, поэтому многие производители не включают их в свой ассортимент.

Габаритные размеры в дециметрах заложены в маркировке с округлением до большего значения. Например, блок ФБС 24.4.6 имеет фактические размеры 2380х400х580 мм. Буква «С» в обозначении типа блока означает, что конструкция сплошная. Это самое большое изделие в предлагаемом сортаменте, позволяющее максимально ускорить возведение фундамента, но и имеющее максимальный вес при изготовлении из тяжелых марок бетона (М 100, М 200) — 1,96 т.

Так же необходимо учитывать, что вес блоков ФБС, даже самых маленьких, достигает 260 кг, что требует при работе с ними использования тяжелой спецтехники.

Некоторые производители предлагают эти виды изделий меньшей массы, несмотря на маркировку тяжелого бетона «Т». В таком случае они изготовлены либо из керамзитового бетона и должны быть промаркированы буквой «П», либо из силикатного «С», либо в процессе производства были недостаточно уплотнены и могут иметь пустоты и поры. Поэтому при покупке уточните марку и вес фундаментных блоков ФБС и убедитесь в наличии подтверждающего качество документа.

Крупногабаритные блоки ФБС применяются, помимо ленточных сборных фундаментов, для возведения подвальных этажей и неотапливаемых сооружений технического характера.

 

Выбор размеров фундаментных блоков

Габариты изделий наравне с видом бетона и его классом по прочности на сжатие определяют:

  • прочность возводимой конструкции,
  • технологический процесс сборки элементов,
  • сроки проведения работ «нулевого» цикла,
  • цену блоков.

Размеры ФБС блоков выбираются в зависимости от:

  • типа грунта, его прочности и устойчивости,
  • толщины стен и перекрытий,
  • веса строения, определяемого его габаритами и строительными материалами,
  • требуемой конструкционной прочности фундамента,
  • вида кладки,
  • площади фундамента.

При подборе размеров и расчете количества блоков оптимальным считается 4-5 штук на длину стены. Например, для стандартной 10-ти метровой стены дома предпочтительней будет 4 блока длиной 24 дм, чем 8 штук длиной 12 дм.

Чем более неустойчивый грунт, тем больше габариты несущих элементов. Например, для возведения фундамента на глинистых и суглинистых грунтах, которые и сами оказывают давление на конструкцию, должны использоваться крупногабаритные блоки ФБС 24. 6.6. А для песчаных сухих грунтов для закладки на глубину 60 — 70 см подойдут средние — ФБС 12.6.6-т. Такая же прямая зависимость размеров и с расчетной нагрузкой на основание.

Ошибочно считать, что ширина блоков всегда равна толщине стен. Допускается выступание стены с одной стороны до 10 см, а если выступание двухстороннее, то до 6 см с каждой стороны. Обычно используются блоки разных размеров для наиболее плотной укладки и оптимальной перевязки швов. Фундаментные блоки, изготовленные по  ГОСТ 13579-78, благодаря высокой точности размеров и прямолинейности, при правильной укладке способны свести к минимуму кривизну комбинированного фундамента и служат отличным направляющим ориентиром при последующей кладке стен.

 

Малогабаритные блоки ФБС

По отраслевым стандартам выпускаются изделия длиной 400 и 600 мм для негабаритных конструкций. Предлагаются даже блоки из тяжелого бетона по ТУ с размерами 400х200х200 мм для малоэтажных легких домов из дерева и пеноблоков. Они оптимально сочетают высокую прочность и малый вес (в среднем 31 кг). Такие изделия незаменимы при отсутствии спецтехники, для самостоятельной кладки основания на песчаных грунтах.

К нестандартным можно отнести фундаментные блоки ФБС 6.6.6, набирающие все большую популярность по причине универсальности применения для:

  • возведения стен погребов и подвалов,
  • оснований, в том числе и столбчатого типа, для дачных домиков и небольших коттеджей,
  • в комбинации с литыми ленточными фундаментами и в качестве основного элемента.

Они изготавливаются из тяжелых марок бетона, что обеспечивает высокую прочность и позволяет возводить из них стены любой высоты.

 

Для чего нужно знать массу блоков для фундамента

ГОСТ на блоки ФБС, помимо габаритных размеров и прочностных характеристик, предусматривает нормирование массы (в справочном формате). Это необходимо для экспресс-контроля качества, ведь нормативное значение плотности бетона невозможно определить в условиях строительной площадки.

Параметр потребуется и для правильного выбора спецтехники для укладки блоков, погрузочно-разгрузочных операций, а также для транспортировки материалов. Блоки ФБС, вес и размеры которых определяют норму погрузки изделий в автомобиль, перевозятся 10-ти и 20-ти тонными автомобилями. Имея в распоряжении такую информацию можно минимизировать свои расходы на транспортировку таких громоздких и тяжелых изделий. К тому же многие компании насчитывают немалые суммы за простой техники в случае возникновения непредвиденных ситуаций.

Остановив свой выбор на сборном фундаменте, необходимо ответственно отнестись к выбору его конструкционных элементов. Ведь качество блоков ФБС, корректный расчет их количества и размеров будут определять надежность дома и срок его службы.

Читайте также:

характеристики и размеры, расшифровка маркировки, цены

Фундамент принимает на себя нагрузку от стен, крыши, перекрытий и равномерно распределяет ее на землю. Выбор искусственного основания зависит от гидрологических и геологических условий, а также типа и массивности строения. Для участков с твердым грунтом и незначительной влажностью рекомендуется использовать фундаментные блоки строительные (ФБС). Что собой представляет такой базис, какие бывают размеры, вес и как дорого можно его приобрести? Чтобы ответить на все вопросы, подробно изучим особенности.

Оглавление:

  1. Технические параметры
  2. Маркировка и типовые размеры
  3. Плюсы и минусы
  4. Сфера применения и цены

Характеристики

Согласно ГОСТ 13579-78 в производстве используются тяжелые, керамзитные или плотные силикатные бетоны. Это сырье конструкционного типа, из которого получают литые изделия повышенной крепости и плотности. К соблюдению стандартных размеров и веса фундаментных блоков предъявляются самые строгие требования. От этого зависит прочность основания и долговечность всего строения.

Так как элементы испытывают нагрузку на сжатие, в них присутствует внутренняя арматура, предусмотрена закладка монтажных петель из гладкого горячекатаного прутка. Это необходимо для удобства перемещения и транспортировки плит ФБС.

Для придания строительному материалу соответствующей твердости применяют две технологии:

  • Просушка – схватывание бетона происходит естественным образом. Блоки располагают в крытом проветриваемом помещении и выдерживают в течение нескольких недель.
  • Пропарка – ускоренный способ обработки под воздействием высокого давления в условиях повышенной влажности. Достичь нормативной твердости в 70 % удается всего за сутки.

Качество изделий, полученных разными способами, совершенно одинаковое. Но из-за дорогой технологии цена пропаренных немного выше.

Условные обозначения

Аббревиатура ФБС дословно расшифровывается как фундаментные блоки строительные или сплошные. Под названием подразумевается цельная отливка с гладкими поверхностями. По форме она напоминает кирпич, только гораздо большего размера. В торцах имеются неглубокие вырезы, которые заполняют бетоном, соединяя элементы между собой во время монтажа.

Кроме типовых форм существуют другие виды, отличающиеся конфигурацией.

1. ФБВ – с отверстиями для прокладки инженерных коммуникаций и укладки перемычек.

2. ФБП – модули с пустотными камерами, открытыми вниз.

В нормативной документации предусмотрены такие типовые размеры блоков ФБС:

  • длина 600/900/1200/2400 мм;
  • ширина 300/400/500/600 мм;
  • высота 300/600 мм.

Вес изделий разных габаритов может колебаться от 0,25 до 2 тонн.

Маркировка включает в себя тип, размеры в дециметрах и вид бетона. Например, расшифровка ФБС12.3.6–Т выглядит так:

  • ФБС – фундаментные блоки сплошные;
  • 12 – длина 1180 мм;
  • 3 – ширина 300 мм;
  • 6 – высота 580 мм;
  • Т – тяжелый бетон.

Зная основные размеры, определяют, сколько всего штук нужно купить для строительства. Ориентируясь на вес, рассчитывают число модулей для перевозки в одной машине. Если в этих выкладках учесть актуальную стоимость, то нетрудно запланировать предварительную сумму расходов.

Преимущества и недостатки

Намечая строительство на основе ФБС, следует хорошо взвесить их сильные и слабые стороны. Это поможет утвердиться в целесообразности выбора основного материала.

Достоинства:

1. Высокая прочность. Бетонные блоки способны равномерно распределять и выдерживать значительные нагрузки.

2. Универсальность применения. Материал активно востребован в гражданском и промышленном строительстве.

3. Устойчивость к погодным условиям Независимость от времени года и атмосферных явлений позволяет проводить работы круглый год в любой климатической зоне.

4. Стандартные размеры. Типовые габариты позволяют делать точные расчеты стройматериала при закупке.

5. Сжатые сроки монтажа. При заказе готовой конструкции отпадает необходимость в трудоемком и длительном процессе изготовления монолитной плиты. Ускоренные темпы строительства снижают общую стоимость блочного объекта на 20-25%.

6. Простота укладки. Благодаря стальным петлям, закрепленным в бетоне, упрощается разгрузка краном и монтаж.

7. Конструктивность. Наличие пазов усиливает соединительные швы.

8. Долговечность. Расчетный срок службы построек из блоков составляет 40-50 лет.

Недостатки:

  • Необходимость привлечения бригады профессиональных строителей и специальной техники.
  • Большой риск проседания отдельных участков фундамента.

Где применяются ФБС?

Сплошные бетонные изделия предназначены для закладки фундаментов многоэтажных или массивных строений. Основания из блоков и монолитных плит находятся на одном качественном уровне. Однако использование первых значительно снижает стоимость и ускоряет строительство. Они активно применяются при сооружении цокольных этажей, погребов, подвальных, технических помещений, неотапливаемых объектов. Для кладки стен подходят пустотные модули ФБП, вес которых намного меньше.

Блоки, уже побывавшие в употреблении, продаются по стоимости, сниженной на 30-50 %. Поэтому их нередко применяют в качестве стационарного или временного ограждения различных объектов.

Маркировка изделийМасса, кгЦена, руб/шт
6-3-6240-250690-850
6-4-6300-310860-960
6-5-6350-3901010-1020
9-3-6350-370580-990
9-4-3220-240690-820
9-4-6470-490780-1230
9-5-3280-300750-970
9-5-6590-610980-1550
9-6-6700-7401230-1850
12-3-3240-270450-630
12-3-6460-510770-1280
12-4-3310-330530-1100
12-4-6640-6751060-1670
12-5-3360-380670-1360
12-5-6790-8001300-2070
12-6-3460-480810-1490
12-6-6940-9601580-2500
24-3-6970-10251520-2350
24-4-61300-13502000-3000
24-5-3790-12001700-2200
24-5-51560-15902690-3200
24-5-61630-16802500-3650
24-6-31000-10202040-3100
24-6-61960-19803000-3970

Блоки ФБС размеры | Фундамент для Дома

Фундаментные блоки стеновые являются наиболее востребованными в сфере современного строительства, ведь они доказали свою эффективность и надежность на практике. Поэтому, большинство профессионалов выбирают именно этот материал при возведении какой-либо постройки.

При этом специалисты стараются учитывать не только морозостойкость, вес, плотность материала, но и габариты блоков ФБС, которые прописываются в соответствующем государственном стандарте.

ГОСТ, определяющий размеры стеновых фундаментных блоков

Основным государственным стандартом, который регулирует размеры фундаментных блоков ФБС, является ГОСТ 13579-78. Он распространяет свое действие на материалы, изготавливаемые из плотного, легкого и силикатного бетона, с плотностью не менее  1800 кг/м3 и которые предназначаются для технических подвалов зданий и стен подвалов.

Согласно ему различают несколько типов блоков, от которых и зависит параметры материала (длина, высота, ширина).

В этом документе также представлены блоки ФБС размеры, которых имеют свои условные обозначения. А в зависимости от того, из какого типа бетона изготовлена железобетонная конструкция, блоку присваивается определенная маркировка. Она определяется также исходя из класса бетона по прочности, массы блока, расхода материалов и марки монтажной петли.

Но размеры фундаментных блоков ФБС – это еще не весь перечень того, что регулирует данный стандарт. Правила хранения, транспортировки блоков и присвоения маркировки также указываются в этом документе.

Размеры стеновых фундаментных блоков

Сортамент данного типа блоков состоит из 14 типоразмеров изделий.

При этом основной размерной характеристикой для таких железобетонных конструкций является их ширина, а второстепенными размерами блоков ФБС принято считать длину и высоту.

Согласно длине весь сортамент материалов подразделяется на 3 типоразмера:

  • 2300 мм;
  • 1180 мм;
  • 880 мм.

Размеры фундаментных блоков по ГОСТу также учитывают высоту изделий. Согласно этому параметру сортамент делится на 2 группы:

Блоки ФБС, размеры которых также включают ширину, подразделяются на изделия с параметрами:

Таким образом, выходит, что самый большой блок достигает параметров 2380х600х580 мм (длина, высота, ширина), а фундаментные блоки размеры, которых по ГОСТ самые маленькие укладываются в габариты 880х300х580 мм.

Как правильно подобрать размеры ФБС

Для того чтобы правильно определиться с параметрами фундаментных блоков, необходимо изначально грамотно рассчитать площадь основания, выяснить, какой будет кладка и учесть толщину перекрытий и возводимых стен. Фундаментные блоки, размеры которых вы уже определили для себя, имеют еще и особенную маркировку.

Она представляет собой защитный код, в котором содержится информация для покупателя. К примеру, ФБС 6-4-6 говорит о том, что железобетонная конструкция имеет высоту 600 мм, ее длина составляет 400 мм, а ширина – 600 мм.

Если размеры блоков ФБС указываются в маркировке в таком виде ФБС 24-6-6 т., это значит, что блок имеет длину 2400 мм, высоту и ширину – по 600 мм.

При этом буква «т» указывает на то, что конструкция изготовлена из тяжелого бетона.

Размеры фундаментных блоков также важно учитывать, исходя из характера грунта. Например, для глинистых и вздувающихся грунтов рекомендуется выбирать блоки типа ФБС 24-6-6 либо подобные им. На выбор параметров блоков также влияют:

  • Деформация почвы;
  • Нагрузка стен, трасс, колон;
  • Глубина их укладки.

Учитывая все факторы, можно построить хорошо отапливаемое подвальное помещение, что не всегда возможно сделать с другими типами фундамента. Выбрав блоки ФБС, размеры которых абсолютно соответствуют будущей постройке, а также, учитывая характеристики самого материала: его плотность, морозоустойчивость, долговечность, можно добиться возведения идеального здания, которое будет отличаться от других своей прочностью и безупречным внешним видом.

Размеры бетонных блоков ФБС прямым образом влияют и на вес конструкций. Этот фактор необходимо учитывать, ведь для транспортировки и укладки блоков обязательно понадобится грузоподъемный транспорт и техника.

На нашем сайте вы можете посмотреть возможные размеры фундаментных блоков, оценить внешний вид таких конструкций и решить для себя, какие параметры вам понадобятся. Ведь, прежде всего, необходимо предварительно продумать ход работ, определиться с типом изделий, учесть все нюансы строительства, а уже после этого выбирать конструкции исходя из их габаритов.

Фундаментные блоки ФБС - сортамент, вес, размеры

Сортамент ФБС (фундаментные блоки стеновые)

Марка фундаментного блока Вес, т Размер фундаментного блока, мм
ФБС 24-3-6т 0,975 2380x300x580
ФБС 24-4-6т 1,3 2380x400x580
ФБС 24-5-6т 1,63 2380x500x580
ФБС 24-6-6т 1,96 2380x600x580
ФБС 12-3-6т 0,49 1180x300x580
ФБС 12-4-6т 0,64 1180x400x580
ФБС 12-5-6т 0,814 1180x500x580
ФБС 12-6-6т 0,98 1180x600x580
ФБС 9-3-6т 0,326 880x300x580
ФБС 9-4-6т 0,468 880x400x580
ФБС 9-5-6т 0,51 880x500x580
ФБС 9-6-6т 0,7 880x600x580
ФБС 12-4-3т 0,31 1180x400x280
ФБС 12-5-3т 0,38 1180x500x280
ФБС 12-6-3т 0,46 1180x600x290

Монтаж фундаментных блоков

Фундаментные блоки монтируются на 3 вида основания.

  • Сборные плиты ленточного фундамента
    Эти плиты маркируются индексом ФЛ и вместе со стеновыми блоками являются элементами сборного фундамента. Плиты фундамента укладываются на ровное уплотненное основание с выполненной гидроизоляцией.
  • Монолитная подушка под фундамент
    По уплотненной поверхности грунта с втрамбованным песком или щебнем выполняется бетонная монолитная подушка толщиной не менее 300 мм. В случае армирования, она выполняет функцию пояся жесткости. Эта подушка может быть шире блоков ФБС и выполнять роль ленточного фундамента с уширением.
  • Щебеночно-песчаное основание
    Фундаментные блоки монтируются на уплотненный слой песка или щебня толщиной 8-10 см. Перед монтажом, уплотненная поверхность проливается битумом для устройства горизонтальной гидроизоляции блока.

ФБС укладываются на цементно-песчаный раствор или бетон. Вертикальные швы заполняются бетоном. Для более надежного замоноличивания стыков ФСок, их торцы выполнены с углублениями для устройства бетонных замков. Для монтажа ФБС необходим автокран и бригада из 5-ти человек. Это из практических соображений, возможно, по технологии процесса требуется больше рабочих. Дело в том, что для укладки фундаментного блока нужно выполнить объемную постель из раствора или бетона. Даже при незначительном удалении смеси от места монтажа, это тяжелая работа. Поэтому в то время как 2 человека и кран задействованы на монтаже, 3 и более рабочих выполняют слой раствора или бетона под очередной блок фундамента.

Швы между блоками выполняются шириной до 40 мм. Для обеспечения устройства швов, длина и высота блоков меньше проектной на 20 мм. После сборки стены фундамента и замоноличивания замков, выполняется вертикальная гидроизоляция фундамента из обмазочных или оклеечных материалов.

Кроме сортаментов материалов для строительства фундаментов загородных домов у нас есть сборные плиты перекрытия.

Фундаментные блоки (ФБС) от производителя

Фундаментные блоки используются при возведении стен подвалов и элементов ленточных фундаментов. Основное назначение фундаментных блоков - перераспределение всей нагрузки здания на фундамент.

Среди основных преимуществ фундаментных блоков:

  • Долговечный
  • Надежность
  • Высокое качество изделий

Фундаментные блоки сплошного сечения для стен подвала выполнены из тяжелого бетона марки В7,5 и морозостойкости F50.По дополнительному согласованию блоки могут изготавливаться из бетона другой марки.

ПРИМЕНЕНИЕ БЛОКОВ

Фундаментные блоки из бетона - разновидности железобетонных изделий, непосредственным назначением которых является закладка фундамента. Более того, их используют для строительства подвальных помещений, различных перегородок, навесов. Их используют в аграрном секторе, например, при строительстве комплексов. Блоки используются при возведении стен тоннелей. Есть еще несколько способов применения фундаментных блоков: защита дорог, ремонт дорог, рекультивация берегов в случае разрушительных наводнений. Военные используют блоки ФБС для возведения защитных сооружений, заграждений.

ПРЕИМУЩЕСТВА ФУНДАМЕНТОВ
  • Экономия времени, так как нет необходимости смешивать бетон и соблюдать пропорции. Установка очень быстрая;
  • Прочность конструкции. Некоторые типы могут иметь специальные врезки, укрепляющие конструкцию;
  • Блок устойчивы к морозам, кислым почвам подпитываются специальными средствами;
  • Специальные крючки позволяют облегчить установку основания.

НЕДОСТАТКИ
  • Это дорогой материал. Для его установки вам понадобится строительная техника.
  • Есть возможность просадки фундамента. Структура не цельная. Это означает, что каждый блок может вести себя по-разному.

ВИДЫ ФУНДАМЕНТОВ
  • бетон силикатный;
  • бетон керамзитовый;
  • армированный бетон.

При изготовлении силикатного бетона добавляется известь. Раствор будет умеренным по весу. Блоки маркируются буквой S . Вес продукта колеблется от 290 кг до 1,7 тонны. Согласно ДСТУ, данный тип нельзя использовать в условиях повышенной влажности, следовательно, нельзя использовать в качестве фундамента.

При изготовлении керамзитобетона в раствор добавляют керамзит (керамзит). Сам керамзит - это пористый материал. Поэтому эта пропорция самая легкая, вес блока от 250 кг до 1,5 тонны.Товар будет обозначен буквой L , то есть легкий. Низкая цена, высокое водопоглощение и низкая прочность - все это свойственно керамзитобетону. Его можно использовать для строительства легких построек.

Железобетонные блоки имеют большой вес за счет плотности материала. Вес колеблется от 250 кг до 2 тонн. Он отмечен буквой Т, что означает тяжелый. Он предназначен для многоэтажных домов.

Фундаментные блоки различают по форме, профилю, размерам.У них разная маркировка:

  • Прямоугольные блоки с ямками называются ФБС. Их используют при устройстве ленточного фундамента, устройстве малоэтажных стен.
  • Для монолитного фундамента используются пустотелые блоки. Они помечены как FBP. Блоки используются для строительства многоэтажных домов.
  • Могут быть как трапециевидной, так и прямоугольной формы. Они обозначены как BF.
  • Колонны цилиндрические для устройства изолированного фундамента и свайного фундамента.Они имеют маркировку F.
  • .
  • Блоки трапециевидной формы используются для ленточных и опорных фундаментов. Этот продукт отмечен знаком FO.

Цифры после блока - габаритные размеры в дециметрах. Первая цифра означает длину, вторая - ширину, а последняя - высоту.

Блок ФБС - незаменимый строительный материал

Применение блоков ФБС в нашей стране давно широко распространено при строительстве капитальных зданий и

построек.Столь широкое применение они получили благодаря прочности своей конструкции, простоте и невысокой стоимости монтажа по сравнению с ленточным фундаментом.

Преимущества агрегатов ФБС

Блок ФБС морозоустойчив и долговечен, выдерживает высокое давление вышележащих конструкций, поэтому применяется для возведения стен подвалов и фундаментов домов. Эти характеристики присущи только материалам, произведенным на заводе, так как блоки, изготовленные в ремесленных мастерских, не соответствуют заявленным параметрам.

Фундаментальные блоки имеют монолитную конструкцию из бетона М-100 и

М-200 в виде параллелепипеда с армированием внутри. По бокам блока ФБС есть специальные пазы, которые при установке заполняются раствором, что обеспечивает повышенную прочность конструкции в целом.

Типы блоков

FBS-блоки бывают нескольких видов в зависимости от размера и назначения и, соответственно, различаются по цене. Выпускаются блоки следующих типов: длиной 78 см, 118 см и 238 см, шириной 30, 40, 50 и 60 см.Одинаковая высота у всех - 58 см.

Все вышеперечисленные характеристики указаны в названии блоков. Так, например блок ФБС 3 - это блок, длина которого составляет 300 мм. Чаще всего настилают стены погребов в частной застройке. Вторая цифра показывает ширину изделия, третья указывает высоту. Например, фундаментные блоки 6-6-6 ФБС имеют ширину 60 см, высоту 60 см и длину 60 см соответственно.

Все ЖБИ изготавливаются по ГОСТ 1978 года.В последнее время некоторые производители, пытаясь улучшить и ускорить процесс изготовления блоков, вместо естественной сушки используют пропаривание. На качество продукции это практически не влияет, а вот на товарооборот положительно. Ведь если агрегат ФБС проходит естественную сушку, его можно использовать не ранее, чем через 3-4 недели, а после пропаривания это железобетонное изделие можно укладывать на 2-3 день.

Укладка блоков FBS

Укладка блоков начинается с подготовки почвы, в которую они будут укладываться.

Необходимо сделать подушку из песка толщиной не менее 15 см. В целом глубина блокировки зависит от типа почвы. Так, например, в песчаном грунте блок ФБС следует укладывать на глубину 40-70 см, а в основание с повышенным содержанием щебня - более 50 см. Особое внимание стоит обратить на глинистые и суглинистые почвы, так как глина имеет свойство набухать при промерзании.

Монтаж следует начинать с угловых блоков. Стоит отметить, что при использовании FBS 24 снижаются затраты на возведение фундамента.Затраты на кран значительно снижаются, так как уменьшается количество штабелируемых блоков. Количество раствора, расходуемого на заделку вертикальных швов, сводится к минимуму за счет уменьшения их количества.

На практике видно, что со временем использование фундаментных строительных блоков не теряет своей популярности.

Блокирование рецепторов Fc для проточной цитометрии

Хотя теоретически использование антител против рецепторов Fc (FcR) является лучшим способом устранения нежелательных сигналов, опосредованных связыванием FcR, вы не всегда можете иметь хорошо оптимизированный пул антител против FcR, сидя прямо перед вами для вашего эксперимента.Кроме того, такой блокировщик может быть неприменим, если у вас есть один из FcR, например CD16, CD32 или CD64, для измерения в вашем канале. В этом блоге мы рассказываем о «старой школе» способа блокирования с помощью сыворотки, которая обычно доступна в большинстве лабораторий.

Блокирующий раствор был просто приготовлен путем добавления сыворотки здорового человека к PBS до конечной концентрации 10%. Чтобы провести сравнение с другим обычно доступным материалом, а именно с фетальной бычьей сывороткой (FBS), мы также приготовили 10% раствор FBS в PBS.PBMC от здорового донора инкубировали 10 минут с любым из этих блокирующих растворов или PBS в качестве неблокирующего контроля с последующей 30-минутной инкубацией с антителами в инкубационном буфере (0,5% BSA в PBS) и тремя промывками промывочным буфером FACS ( 5 мМ ЭДТА в PBS).

Для анализа моноциты и лимфоциты регистрировали с использованием прямого и бокового рассеяния. Чтобы исключить дублеты, одиночные клетки были заблокированы с использованием высоты и ширины прямого рассеяния, а затем высоты и ширины бокового рассеяния (рис. 1 A).

В результате, в то время как ожидаемый высокий процент (16,7%) неспецифического CD3 dim CD11b bright сигнала, опосредованного FcR, был обнаружен в неблокированном образце (рис. 1 B слева), блокирование с 10% либо FBS, либо человеческой сыворотки значительно уменьшили нежелательные сигналы (рис. 1B в центре и справа). Для дальнейшего сравнения эффектов блокирования между FBS и сывороткой человека популяция CD11b bright была стробирована и проанализирована на наличие сигнала CD3 под гистограммой (рис.2). Слегка сдвиг сигнала CD3 вправо в образце, заблокированном FBS, указывает на то, что сыворотка человека имеет лучшую эффективность блокирования, чем FBS.

У вас возникли вопросы по окрашиванию тетрамером? Новое руководство MBL International по окрашиванию тетрамеров представляет собой набор протоколов и данных, которые помогут сделать ваши эксперименты успешными. Руководство содержит более 90 страниц информации и включает продукты и советы по окрашиванию тетрамерами.


Количественная оценка белков бычьего сывороточного альбумина для блокирующих применений

Реферат

Бычий сывороточный альбумин (БСА) - один из наиболее широко используемых белковых реагентов в научном сообществе, особенно для пассивации («блокирования») поверхностей в различные биотесты. На рынке имеется множество вариантов белка BSA, однако информации о том, какие из них предпочтительнее для блокирующих приложений, недостаточно. Здесь мы провели биофизические и биологические измерения для количественного сравнения конформационных, адсорбционных и блокирующих свойств белковых реагентов BSA, которые были получены с помощью шести методов очистки. В зависимости от метода наблюдались значительные различия в конформационных и адсорбционных свойствах белков BSA, в основном из-за присутствия стабилизаторов жирных кислот.В свою очередь, мы обнаружили, что белки BSA, не содержащие жирных кислот, обладают более высокой блокирующей способностью по сравнению с белками BSA, стабилизированными жирными кислотами, в биотестах на основе поверхности и наночастиц. Мы критически обсуждаем механистические факторы, лежащие в основе этих различий в производительности, и наши выводы предлагают практическую основу для выбора BSA для блокирующих приложений.

Общим элементом биоанализов является необходимость минимизировать неспецифическое связывание биомолекул, чтобы максимизировать специфичность и чувствительность анализа 1, 2 . Для достижения этой цели был разработан широкий спектр реагентов, от сырых материалов, таких как молочные белки, до синтетических наноматериалов, таких как тонко настроенные полимеры, для покрытия целевых поверхностей и минимизации событий неспецифического связывания - функция, которую обычно называют «Блокировка» 3-7 . Среди различных вариантов бычий сывороточный альбумин (БСА) является наиболее широко используемым белковым реагентом для блокирующих применений и имеет несколько практических преимуществ, таких как естественное изобилие, низкая стоимость, хорошо зарекомендовавшие себя методы очистки и широкая доступность.БСА считается золотым стандартом блокирующего реагента во многих биологических анализах, включая твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA) 8, 9 , блоты 10, 11 , иммуногистохимию 12, 13 , клеточную культуру 14 и биосенсоры 15, 16 . Он используется в качестве покрытия для повышения стабильности и биосовместимости наночастиц 17, 18 , а также обычно включается в буферные растворы для предотвращения потери ценных материалов, таких как нуклеиновые кислоты, пептиды и ферменты 19, 20 .

В рамках этой области часто упускается из виду аспект BSA как блокирующего реагента заключается в том, что существует много типов коммерчески доступного BSA, которые различаются по способу выделения белка из бычьей плазмы, которая является его основным естественным источником 21 . Эти различия в обработке связаны с выбором метода фракционирования и использованием химических стабилизаторов, и такие различия могут вызвать значительные различия в эффективности блокирования в биологических анализах, даже при сравнении реагентов BSA от одной и той же компании 22 .Тем не менее, в научной литературе практически нет обсуждения того, какие типы реагентов BSA целесообразно выбрать для блокирующих приложений, особенно с точки зрения механизма. Большинство исследований, связанных с блокированием, в которых изучаются детали механизма, оценивают только один тип BSA и сравнивают адсорбцию BSA и вызванные поверхностью конформационные изменения на разных поверхностях 23,24 или исследуют влияние ионной силы 25 или предварительной обработки BSA 26 . Тем не менее, сравнение белков BSA, полученных с помощью различных методов очистки, остается неизученным, несмотря на то, что это самый большой источник разнообразия вариантов реагентов BSA на рынке. Кроме того, в большинстве научных публикаций имеется ограниченная информация о типе реагента BSA; компания-поставщик иногда указывается, но каталожный номер реагента указывается редко. Таким образом, выбор реагента BSA для блокирующих приложений в значительной степени остается делом проб и ошибок и лабораторных прецедентов, и создание обоснованной практической основы для руководства выбором реагента BSA является острой необходимостью.

Целью нашего исследования было изучить конформационные, адсорбционные и блокирующие свойства коммерчески доступных реагентов BSA, которые были получены с помощью шести методов очистки, а также разработать практическую основу для выбора реагентов BSA для блокирующих применений. Наши результаты позволяют понять, почему определенные типы реагентов BSA предпочтительнее других вариантов, а также очерчивают ключевые функциональные критерии для разработки улучшенных версий BSA и других белковых реагентов для блокирующих приложений.

Результаты

Стратегия оценки

Реагенты BSA широко используются для покрытия целевых поверхностей с целью формирования поверхностных пассивирующих покрытий, которые минимизируют неспецифическое связывание мешающих биомолекул, которые могут повлиять на показания биологических анализов. Целевая поверхность может быть объемной поверхностью, такой как покровное стекло или полимерная мембрана, или наноструктурированной поверхностью, такой как неорганические наночастицы. На практике экспериментатор будет инкубировать поверхность мишени с водным раствором BSA, в результате чего молекулы белка нековалентно адсорбируются и претерпевают конформационные изменения («денатурацию») на поверхности с образованием тонкопленочного белкового покрытия ( Рис.1а ).

Рис. 1. Оценка белковых реагентов BSA для блокирующих приложений.

a , Обзор основных шагов в протоколах блокировки BSA. (i) Целевая поверхность идентифицируется для покрытия BSA для пассивирования поверхности («блокирования»). (ii) Белки BSA в водном растворе инкубируют с целевой поверхностью. (iii) Белки БСА адсорбируются и денатурируют на целевой поверхности. (iv) Выполняется стадия промывки для удаления слабосвязанных белковых молекул БСА. (v) На поверхности образуется прочно прикрепленный монослой адсорбированных белковых молекул БСА. b , Общая экспериментальная стратегия для анализа свойств реагента BSA. Отобрали серию белковых реагентов БСА, очищенных разными методами, и оценили их конформационные, адсорбционные и блокирующие свойства. Был использован ряд подходов к биофизическим измерениям, основанным на фазах раствора и поверхностно-чувствительных, наряду с поверхностными и основанными на наночастицах биоанализами. c , Схема способов очистки для выделения молекул белка BSA из бычьей плазмы.Белки BSA, содержащие жирные кислоты (называемые «жирными»), были получены (1) фракционированием холодного этанола, (2) фракционированием теплового шока и (3) фракционированием холодного этанола с последующим фракционированием тепловым шоком, и эти реагенты обозначены как BSA 1, 2, 3 соответственно. Также были приготовлены не содержащие жирных кислот варианты (называемые «обезжиренными») BSA 1, 2, 3, которые обозначены как BSA 4, 5, 6 соответственно.

Основываясь на этом процессе нанесения покрытия, наша стратегия оценки была сосредоточена на характеристике конформационных, адсорбционных и блокирующих свойств шести коммерческих реагентов BSA, очищенных различными методами ( Рис.1б ). Мы использовали широкий спектр инструментов для измерения фазы раствора и поверхностно-чувствительных биофизических измерений, чтобы охарактеризовать реагенты BSA, а также проводить прикладные испытания биопроб на основе поверхности и наночастиц. Этот подход позволил нам не только напрямую сравнить функциональные характеристики различных реагентов BSA в блокирующих приложениях, но также получить ключевые механистические представления о том, как тонкие различия в конформационных свойствах белков, на которые влияют процессы, задействованные в каждом методе очистки, влияют на адсорбция белка, денатурация, вызванная поверхностью, и результирующая блокирующая способность.

Мы выбрали шесть коммерческих реагентов BSA, которые были очищены с помощью трех различных маршрутов фракционирования, без или со стадией удаления жирных кислот ( Рис. 1c и Дополнительная таблица 1 ). Этап фракционирования необходим для отделения BSA от других компонентов сыворотки, и существует два основных варианта: фракционирование холодным этанолом и фракционирование тепловым шоком. Вкратце, фракционирование холодного этанола включает снижение температуры образца примерно до -5 ° C с последующим добавлением этанола и корректировкой pH раствора и ионной силы для выделения белка BSA 27-29 .Напротив, фракционирование тепловым шоком включает нагревание образца (обычно до ~ 60 ° C или немного выше) для выделения белка BSA и проводится в присутствии стабилизатора жирной кислоты (каприловая кислота) 30-32 . Эти два процесса фракционирования можно проводить по отдельности или последовательно (холодный этанол, затем тепловой шок).

После завершения стадии (стадий) фракционирования получают очищенные реагенты BSA. Примечательно, что на этой стадии все реагенты BSA все еще содержат жирные кислоты, которые либо были связаны естественным образом, либо были добавлены в качестве стабилизатора 33 .Мы протестировали реагенты BSA, содержащие жирные кислоты (называемые «жирными»), которые были приготовлены (1) фракционированием холодного этанола, (2) фракционированием теплового шока и (3) фракционированием холодного этанола с последующим фракционированием теплового шока, и эти реагенты обозначены как БСА 1, 2, 3 соответственно. Для удаления жирных кислот требуется дополнительная стадия обработки, которая включает добавление активированного угля с последующим регулированием pH раствора и температуры 34 . Мы также протестировали версии BSA 1, 2, 3 без жирных кислот (называемые «обезжиренными»), и они были обозначены как BSA 4, 5, 6 соответственно.Всего было протестировано шесть различных реагентов BSA, состоящих из трех версий, содержащих жирные кислоты (1-3) и трех версий, не содержащих жирные кислоты (4-6).

Термическая стабильность жирных и обезжиренных белков BSA

Как и другие глобулярные белки, BSA сворачивается в водном растворе, чтобы минимизировать его конформационную свободную энергию. Путь сворачивания продиктован чистым балансом стабилизирующих и дестабилизирующих сил, и результирующая складчатая структура обычно всего на несколько ккал / моль ниже по свободной энергии, чем развернутая аминокислотная цепь 35 .Таким образом, незначительные различия в методах очистки, таких как способ фракционирования, термическая предыстория и содержание жирных кислот, могут иметь важные последствия для конформационной свободной энергии молекул белка БСА. Такие эффекты могут проявляться, влияя на термическую стабильность белков в фазе раствора, а также модулируя профили адсорбции и поверхностной денатурации на целевой поверхности.

В качестве первого шага мы исследовали термическую стабильность различных реагентов BSA путем проведения экспериментов по спектроскопии динамического рассеяния света (DLS) и кругового дихроизма (CD) ( рис.). Эксперименты проводились в измерительных камерах с регулируемой температурой, начиная с 25 ° C, и температура постепенно повышалась с шагом 5 ° C. Метод DLS измеряет распределение белковых молекул по размеру в объеме раствора и может обнаруживать начало температурно-индуцированной олигомеризации белка, на что указывает заметное увеличение среднего гидродинамического диаметра. Увеличение размера происходит, когда термически денатурированные белковые мономеры повторно собираются в олигомерные структуры 36 .Более высокая начальная температура указывает на большую термическую стабильность и наоборот. С другой стороны, метод спектроскопии КД идентифицирует характеристики вторичной структуры белковых молекул в объеме раствора, и мы отслеживали уменьшение α-спирального характера с увеличением температуры из-за разворачивания белка.

Рис. 2. Температурный профиль конформационной стабильности BSA в растворе.

a , Схематическое изображение стратегий измерения спектроскопии DLS и CD.Эксперименты проводились в измерительных камерах с регулируемой температурой, и измерения регистрировались с шагом 5 ° C (в порядке возрастания). b , Гидродинамический диаметр белковых молекул BSA как функция температуры, измеренный в экспериментах DLS. Данные представлены как среднее значение ± стандартное отклонение (s.d.), где s.d. определяется как полная ширина на полувысоте (FWHM) / 2,355 [ n = 5 технических повторений, односторонний дисперсионный анализ (ANOVA) с тестом множественных сравнений Даннета (по сравнению с данными при 25 ° C)] .Точки представляют отдельные точки данных. c , Фракционный процент α-спиральности в молекулах белка BSA как функция температуры, как измерено в экспериментах по спектроскопии КД. Средние значения представлены в верхней части каждого столбца. Значения были рассчитаны на основе данных эллиптичности молярного остатка, и данные представлены как среднее ± стандартное отклонение. ( n = 3 технические копии). Точки представляют отдельные точки данных. Серая горизонтальная линия на каждом графике соответствует 50% спиральности.

В диапазоне температур от 25 до 55 ° C данные DLS показали, что все шесть белков BSA имеют диаметр ∼8 нм, что хорошо согласуется с ожидаемым размером мономеров BSA 25, 26, 37, 38 ( Инжир.2b и (дополнительный рисунок 1 ). При 60 ° C было обнаружено заметное увеличение размеров обезжиренных белков БСА (4-6) со средним диаметром около 20 нм, что указывало на начало олигомеризации белка. Напротив, размеры жирных белков БСА (1-3) оставались стабильными и не увеличивались при 60 ° C. При 65 ° C размеры обезжиренных белков БСА (4–6) увеличивались до диаметра примерно 45 нм, и начало олигомеризации белков происходило для одного из жирных белков БСА (1) со средним диаметром около 35 нм.Напротив, начальные температуры для других жирных белков БСА (2) и (3) составляли 70 и 75 ° C соответственно. Увеличив время инкубации до 2 часов и зафиксировав температуру на уровне 60 ° C, было подтверждено, что обезжиренные белки BSA склонны к более быстрой и обширной олигомеризации, в то время как жирные белки BSA более термостабильны (, дополнительный рисунок 2, ).

Термоиндуцированная олигомеризация молекул BSA запускается необратимыми конформационными изменениями в структуре белка, когда возникает критическая степень развертывания белка и соответствующая потеря α-спирального характера.Данные спектроскопии КД показали, что все шесть белков БСА проявляли около 60-63% α-спирального характера при 25 ° C, за которым следовало постепенное уменьшение α-спирального характера с повышением температуры 25, 26, 39, 40 ( Рис. 2c и (дополнительные рисунки 3 , 4 ). Как обратимые конформационные изменения (ниже начальной температуры олигомеризации), так и необратимые конформационные изменения (при и выше начальной температуры) способствуют развертыванию белка, поэтому мы сравнили данные спиральности при 65 ° C.Все три образца обезжиренных белков BSA (4-6) имели процент спиралей в среднем ниже 50%, в то время как все три образца белков BSA с жиром (1-3) имели процент спиралей в среднем выше 51% ( Дополнительная таблица 2 ). Более выраженные различия в спиральности наблюдались при 70 ° C, и, отражая данные DLS, результаты также подтверждают, что среди образцов BSA с жиром, белок BSA (1) имел самый низкий процент спиральности и, следовательно, самую низкую термостабильность. Относительно низкая термостабильность белка BSA (1) согласуется с его обработкой только фракционированием холодным этанолом, и, таким образом, связываются только природные жирные кислоты в отсутствие дополнительного стабилизатора жирных кислот (как используется при фракционировании тепловым шоком).В совокупности результаты DLS и CD-спектроскопии демонстрируют, что образцы BSA с жиром обладают большей термической стабильностью, чем образцы с обезжиренным BSA, подтверждая, что свободная конформационная энергия образцов BSA с жиром ниже, чем образцов с обезжиренным BSA.

Адсорбционное поведение жирных и обезжиренных белков BSA

Эти результаты привели нас к исследованию адсорбционных свойств белков BSA на гидрофильных поверхностях диоксида кремния ( Рис. 3a) . Когда белок с более высокой конформационной энергией адсорбируется на твердой поверхности, ожидается, что он подвергнется большему разворачиванию и распространению по поверхности из-за увеличения энтропии, в то время как другие факторы, такие как взаимодействия белок-поверхность и белок-белок, также влияют на результат 41, 42 .Мы провели эксперименты по микровесам-диссипации кристаллов кварца (QCM-D) для отслеживания кинетики адсорбции и соответствующих масс и вязкоупругих свойств адсорбированных белковых молекул БСА. Метод QCM-D измеряет в реальном времени изменения резонансной частоты (ΔF) и свойств рассеяния энергии (ΔD) поверхности датчика с кремнеземным покрытием в зависимости от времени, что дает представление о гидродинамически связанной массе и вязкоупругих свойствах адсорбированный белок БСА | ΔF max | смещают молекулы на поверхности кремнезема соответственно.Большее значение указывает на большую адсорбцию белка, а большее значение | ΔF / ΔD | сдвиг отражает большую жесткость (меньшую вязкоупругость) внутри адсорбированного белкового слоя.

Рис. 3. Мониторинг адсорбции белка BSA на поверхности кремнезема в реальном времени.

a , Обзор экспериментального протокола тестирования реагентов BSA. (i) Базовый сигнал устанавливается в водном буферном растворе (ii) добавляется 100 мкМ BSA в эквивалентном буферном растворе (начало при t = 5 мин). (iii) Адсорбция БСА продолжается до достижения насыщения.(iv) Выполняется стадия промывки буфера (начата при t = 35 мин и обозначена стрелкой на панелях b, d, f ), и (v) формируется слой адсорбированного белка BSA. b-e , QCM-D эксперименты были проведены для измерения частоты (ΔF) и диссипации энергии (ΔD) сигналов, связанных с процессом адсорбции белка. b , QCM-D ΔF сдвигов с временным разрешением и c , соответствующие | ΔF max | смещается при насыщении. d , QCM-D ΔD сдвиги с временным разрешением. e , | ΔF макс / ΔD макс | отношения, полученные из данных о насыщении на панелях b, и d. f-g , эксперименты LSPR были проведены для измерения сигналов Δλ max , связанных с процессом адсорбции белка. f , смещение длины волны LSPR с временным разрешением (Δλ) и g , соответствующее Δλ max сдвигов при насыщении. Данные в c, e, g представлены как среднее ± стандартное отклонение. ( n = 3 биологических повтора, однофакторный дисперсионный анализ с тестом множественных сравнений Тьюки).Значения P приведены для обезжиренных белков BSA (по сравнению с жирными белками BSA из того же метода фракционирования). Точки представляют отдельные точки данных.

Все шесть белков BSA, адсорбированных на поверхности диоксида кремния, и частотные сигналы QCM-D указывают на монотонную кинетику адсорбции ( Рис. 3b ). Наибольшее количество адсорбированных белковых молекул составляло | ΔF max | связывается необратимо, судя по этапу промывки буфера. В целом, для обезжиренных белков БСА наблюдались большие сдвиги примерно от 35 до 45 Гц (4-6), что указывает на большую адсорбцию ( рис.3c ). Напротив, была меньшая адсорбция жирных белков BSA (1-3), на что указывает | ΔF max | сдвигается от 15 до 35 Гц. Соответствующие сигналы диссипации энергии QCM-D также указывали на монотонную адсорбцию белка и некоторую степень вязкоупругого характера внутри адсорбированного белкового слоя (, фиг. 3d, ). Аппроксимация вязкоупругой модели показала, что адсорбенты белка имеют эффективную толщину порядка 3-6 нм, что соответствует одному слою адсорбированных молекул белка ( дополнительный рис.5 ). После стадии промывки буфером оставшиеся связанные белковые молекулы имели более жесткое расположение. Дальнейший анализ | ΔF max / ΔD max | соотношение показало, что слои адсорбированного белка из обезжиренных белков БСА (4-6) были более плотно связаны с поверхностью диоксида кремния, что согласуется с более низкой конформационной стабильностью (в растворе) и большей денатурацией, индуцированной поверхностью ( Рис. 3e и Дополнительные Рис.6 ). С другой стороны, жирные белки BSA (1-3) проявляли более вязкоупругий характер, что свидетельствует о меньшей денатурации, индуцированной поверхностью.

Чтобы подтвердить результаты QCM-D, мы также провели эксперименты с локализованным поверхностным плазмонным резонансом (LSPR) для измерения адсорбции белка BSA на поверхностях, покрытых диоксидом кремния. В то время как метод QCM-D чувствителен к массе адсорбированного белка и массе гидродинамически связанного растворителя, метод LSPR обнаруживает сдвиг длины волны (Δλ), который связан с изменениями локального показателя преломления вблизи поверхности сенсора, а сигнал измерения чувствителен только к адсорбированная белковая масса (несвязанный растворитель) 38 .В экспериментах LSPR смещение Δλ отслеживается как функция времени, при этом больший сдвиг Δλ указывает на большую адсорбцию белка. Для всех шести белков БСА произошел положительный сдвиг Δλ и наблюдалась монотонная кинетика адсорбции ( рис. 3f, ). После стадии промывки буфером большая часть белковых молекул оставалась связанной. Важно отметить, что сдвиги Δλ max показали, что обезжиренные белки БСА проявляли большее адсорбционное поглощение, чем жирные белки БСА (∼1,2 ± 0,2 нм против ∼0,6 ± 0.2 нм), что хорошо согласуется с данными QCM-D (, рис. 3g, ). Таким образом, обезжиренные белки БСА проявляли более высокое поглощение адсорбцией и более плотную упаковку адсорбционного слоя, тогда как жирные белки БСА имели более низкое поглощение адсорбцией и более слабую упаковку адсорбционного слоя.

Связанные с адсорбцией конформационные изменения белка

Для дальнейшего сравнения степени индуцированной поверхностью денатурации белка для каждого белка BSA мы проанализировали данные измерения LSPR, вычислив начальную скорость поглощения адсорбцией, которая обозначается как (dΔλ / dt) макс ( дополнительный рис.7 ). Метод LSPR представляет собой подход к измерениям с высокой чувствительностью к поверхности, и можно связать начальную скорость адсорбции с относительной степенью индуцированной поверхностью денатурации белка, при этом более высокая начальная скорость указывает на большую денатурацию 40, 43 . Следовательно, данные LSPR показали, что обезжиренные белки БСА претерпевают более обширную поверхностно-индуцированную денатурацию, на что указывают начальные скорости адсорбции около 0,6-0,7 нм мин -1 ( Рис. 4a ).С другой стороны, начальная скорость адсорбции жирных белков BSA составляла всего около 0,2-0,3 нм мин -1 , что указывает на меньшую денатурацию, индуцированную поверхностью.

Рисунок 4. Количественная оценка связанных с адсорбцией конформационных изменений в структуре белка БСА.

a , Максимальная скорость изменения сдвига длины волны LSPR (dΔλ / dt) max во время начальной стадии адсорбции. Значения рассчитываются по данным на рис. 3f. Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение. ( n = 3 биологических повтора, однофакторный дисперсионный анализ с тестом множественных сравнений Тьюки). b , фракционный процент α-спиральности в молекулах белка BSA в растворе и в адсорбированном состоянии, как определено в экспериментах по спектроскопии ATR-FTIR. Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение. ( n = 3 биологических повтора, двусторонний дисперсионный анализ с тестом множественных сравнений Тьюки). Значения P приведены для обезжиренных белков BSA (по сравнению с жирными белками BSA из того же метода фракционирования) в a и отдельно приведены для обезжиренных белков BSA в растворе (по сравнению с жирными белками BSA в растворе из того же метода фракционирования) и для обезжиренных белков БСА в адсорбированном состоянии (по сравнению с жирными белками БСА в адсорбированном состоянии из того же метода фракционирования) в b .Точки представляют отдельные точки данных.

Кроме того, были выполнены измерения инфракрасной спектроскопии с ослабленным полным отражением с преобразованием Фурье (ATR-FTIR) для измерения изменения в структуре белка BSA из-за связанных с адсорбцией конформационных изменений. Как правило, в фазе раствора жирные молекулы БСА имели α-спиральность около 63%, в то время как обезжиренные молекулы имели α-спиральность около 60%, что согласуется с литературными значениями 44, 45 ( Рис. 4b, Дополнительный Рис. 8 и Дополнительная таблица 3 ).После адсорбции жирные молекулы БСА претерпели денатурацию, вызванную поверхностью, и относительная спиральность уменьшилась примерно до 53%, что указывает на чистую спиральную потерю ~ 10%. Напротив, при адсорбции обезжиренные молекулы БСА претерпевают большую денатурацию, вызванную поверхностью, и результирующая фракционная спиральность составляет около 45%, что соответствует чистым спиральным потерям ~ 15%. Таким образом, многочисленные экспериментальные данные подтверждают, что обезжиренные молекулы БСА демонстрируют большую поверхностную денатурацию, чем жирные молекулы БСА.Это открытие согласуется с более низкой конформационной стабильностью, демонстрируемой обезжиренными молекулами BSA в растворе, и подтверждает, что пониженная конформационная стабильность белка в фазе раствора трансформируется в более выраженную денатурацию в адсорбированном состоянии.

Характеристики нанесения поверхностного покрытия

Поскольку многочисленные применения белковых молекул BSA связаны с их ролью в качестве поверхностных покрытий, мы затем исследовали эффективность нанесения шести образцов BSA в биотестах на основе поверхности и наночастиц.Сначала мы измерили блокирующую эффективность покрытий из адсорбированного БСА для подавления биообрастания сыворотки на поверхностях диоксида кремния ( Рис. 5a, и Дополнительный Рис. 9, ). Голую поверхность диоксида кремния сначала покрывали молекулами белка BSA перед инкубацией поверхности, покрытой BSA, в 100% фетальной бычьей сыворотке (FBS) в течение 30 минут с последующей стадией промывки. Полученное количество биообрастания сыворотки на поверхности двуокиси кремния, покрытой BSA, оценивали с помощью метода QCM-D. Эффективность блокирования BSA-покрытия рассчитывалась на основании степени подавления биообрастания сыворотки.Было определено, что обезжиренные белки BSA превосходят жирные белки BSA, а обезжиренные белки BSA (5) и (6) имеют эффективность блокирования около 90% ( Fig. 5b ). С другой стороны, жирные белки BSA (1) и (3) продемонстрировали эффективность блокирования менее 40%. Эти результаты согласуются с более высоким поглощением адсорбцией и более высокой плотностью упаковки адсорбированных обезжиренных белковых молекул БСА. Аналогичные результаты были также получены при тестировании жирных и обезжиренных белков БСА в экспериментах вестерн-блоттинга с участием поверхности нитроцеллюлозной мембраны ( дополнительных фиг.10-12 и (Дополнительное примечание 1 ).

Рис. 5. Блокирующая способность белковых реагентов BSA в биотестах на основе поверхности и наночастиц.

a , Схематическое изображение анализа биообрастания сыворотки на поверхности диоксида кремния. Поверхности из диоксида кремния, покрытые чистым и BSA, инкубировали в 100% -ной фетальной бычьей сыворотке (FBS) с последующей стадией промывки буфером, и количество биообрастания сыворотки на поверхностях определяли с помощью измерений QCM-D. Эффективность блокирования BSA-покрытий рассчитывалась относительно поверхности без покрытия. b , Эффективность блокирования покрытий BSA для подавления биообрастания сыворотки на поверхностях диоксида кремния ( n = 3 биологических повтора). c , Схематическое изображение анализа активации комплемента, запускаемого наночастицами. Наночастицы диоксида кремния, покрытые чистым и BSA, инкубировали в 100% нормальной сыворотке человека (NHS) с последующими измерениями ELISA для определения степени активации комплемента, запускаемой наночастицами, на что указывает величина продукции sC5b-9. Эффективность защиты покрытий BSA рассчитывалась относительно наночастиц без покрытия. d , Эффективность защиты покрытий BSA для ингибирования индуцированной наночастицами активации комплемента ( n = 5 биологических повторов). Данные в b и d представлены как среднее ± стандартное отклонение. (односторонний дисперсионный анализ с тестом множественных сравнений Тьюки). Значения P приведены для обезжиренных белков BSA (по сравнению с жирными белками BSA из того же метода фракционирования). Точки представляют отдельные точки данных.

Мы также протестировали блокирующую способность покрытий BSA на наночастицах диоксида кремния, чтобы ингибировать индуцированную наночастицами активацию комплемента, которая является острым иммунным ответом, который может возникать в сыворотке крови человека ( Рис.5c ) 46-49 . Используя твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA), мы измерили степень защиты, которую обеспечивают покрытия BSA против активации комплемента, индуцированной наночастицами, о чем судили по количеству биомаркера белка SC5b-9 в растворе ( Рис. Рис.13 ). Более высокие концентрации белка SC5b-9 указывают на более обширную активацию комплемента, и, наоборот, наночастицы с более защитным покрытием будут вызывать более низкие уровни концентрации белка SC5b-9 по сравнению с голыми наночастицами.Экспериментально было определено, что обезжиренные покрытия из БСА ингибируют более 60% образования SC5b-9, тогда как покрытия из жирного БСА проявляют 40% или менее эффективность защиты. Это открытие подтверждает, что обезжиренные покрытия из БСА превосходят покрытия из жирного БСА в плане защиты от активации комплемента, вызванной наночастицами. Таким образом, в анализах на основе поверхности и наночастиц обезжиренные белки БСА показали лучшие функциональные характеристики, чем жирные белки БСА.

Обсуждение

Наши экспериментальные данные демонстрируют, что обезжиренные белки БСА проявляют отличные конформационные и адсорбционные свойства от жирных белков БСА, и эти различия приводят к значительным вариациям в блокирующей способности.В целом, данные указывают на центральную роль молекул жирных кислот в влиянии на структуру и функцию BSA. Чтобы проверить эффект жирных кислот, мы также добавили в обезжиренный БСА каприловую кислоту, тем самым превратив обезжиренный белок в жирный белок. Добавление каприловой кислоты привело к заметно повышенной конформационной стабильности наряду со снижением адсорбционного поглощения и денатурации и, как следствие, более плохой блокирующей способностью ( дополнительные рисунки 14-23, дополнительные таблицы 4-5 и дополнительные примечания 2 ).С механической точки зрения повышенная конформационная стабильность белков BSA с жиром может быть понята посредством встраивания молекул каприловой кислоты (через гидрофобные хвосты) в гидрофобные карманы на молекулярной поверхности белков BSA, что оказывает общий стабилизирующий эффект на структуру белка 50, 51 .

Менее очевидное, но критически важное влияние каприловой кислоты на структуру BSA относится к самому процессу адсорбции белка ( Fig. 6 ). Когда белок адсорбируется на поверхности, белок обычно претерпевает индуцированную поверхностью денатурацию, и степень денатурации белка зависит от комбинации факторов, включая внутреннюю конформационную стабильность белка и величину взаимодействий белок-поверхность 42 .Большая денатурация вызывает большее распространение белка по поверхности, что означает, что площадь контактной поверхности на одну адсорбирующую молекулу белка больше. Таким образом, обычно понимается, что большее распространение отдельных белковых молекул приводит к меньшему общему количеству адсорбированных белковых молекул на целевой поверхности, независимо от того, вызвано ли большее распространение конформационной стабильностью (см. , например, , ссылка 52 ) или взаимодействия белок-поверхность (см. , например, , Ref.53). С этой точки зрения можно рационализировать, как изменение ионной силы влияет на адсорбцию и распространение белка BSA для одного типа BSA 25 .

Рис. 6. Влияние жирных кислот на конформационные и адсорбционные свойства BSA и последствия для блокирующих приложений.

a , Схематическое изображение жирных и обезжиренных молекул белка BSA в растворе. Наличие жирных кислот приводит к более высокой конформационной стабильности в растворе. b , Схематическое изображение жирных и обезжиренных белковых молекул БСА в адсорбированном состоянии.Более высокая конформационная стабильность жирного БСА приводит к меньшей денатурации, вызванной адсорбцией, большему отталкиванию белков и, следовательно, менее плотно упакованным белковым покрытиям. С другой стороны, более низкая конформационная стабильность обезжиренного БСА приводит к большей денатурации, вызванной адсорбцией, меньшему отталкиванию белок-белок и, следовательно, более плотно упакованным белковым покрытиям. В результате обезжиренные белки BSA образуют более эффективные пассивирующие покрытия поверхности, которые более полезны для блокирующих применений.

Однако ситуация становится более сложной при сравнении обезжиренных и жирных белков БСА, поскольку молекулы каприловой кислоты не только повышают конформационную стабильность, но и выступающие головные группы карбоновых кислот молекул каприловой кислоты также увеличивают характер отрицательного поверхностного заряда молекул белка БСА.Жирные белки БСА обладают большей конформационной стабильностью и, следовательно, в адсорбированном состоянии претерпевают меньшую поверхностную денатурацию. Тем не менее, хотя жирные белки БСА имеют меньшую площадь контактной поверхности на молекулу, максимальная поверхностная плотность адсорбированных белковых молекул в этом случае ограничена отталкивающими электростатическими взаимодействиями между ближайшими соседними белковыми молекулами.

С другой стороны, обезжиренные белки БСА имеют более низкую конформационную стабильность и в большей степени денатурируют в адсорбированном состоянии.Следовательно, обезжиренные белки BSA подвергаются большему растеканию и имеют большую площадь поверхности контакта на адсорбированную молекулу. Однако максимальная поверхностная плотность адсорбированных белков в случае с обезжиренным BSA все еще выше, чем в случае с BSA с жиром, потому что между адсорбированными обезжиренными молекулами BSA меньше отталкивающих белок-белковых взаимодействий. Следовательно, обезжиренные белки БСА полезны для образования пассивирующих покрытий по двум основным причинам. Во-первых, они обладают более низкой конформационной стабильностью, что способствует большей денатурации и растеканию в адсорбированном состоянии.Во-вторых, отсутствие молекул жирных кислот в обезжиренных белках БСА обеспечивает более благоприятные белок-белковые взаимодействия, которые поддерживают образование плотно упакованных адсорбированных белковых слоев на целевых поверхностях.

В совокупности наши результаты подтверждают, что предпочтительнее использовать белковые реагенты BSA, не содержащие жирных кислот, для блокирования приложений в биоанализах на основе поверхности и наночастиц. В целом, белки BSA, не содержащие жирных кислот, превосходят по эффективности белки BSA, стабилизированные жирными кислотами, в значительной степени независимо от способа фракционирования, который использовался на стадии очистки.Механически мы показываем, что обезжиренные белки БСА являются лучшими блокирующими реагентами, потому что они имеют более низкую конформационную стабильность в растворе, что приводит к большей адсорбции и поверхностной денатурации, а также к более плотной упаковке адсорбента, что в совокупности приводит к превосходным пассивирующим покрытиям. В зависимости от специфики анализа может потребоваться дополнительное рассмотрение уровня чистоты BSA (, т.е. , остаточные уровни одного или нескольких конкретных компонентов плазмы), в то время как статус отсутствия жирных кислот является основным критерием выбора для обеспечения оптимальных блокирующих свойств.Заглядывая в будущее, наш аналитический подход выделяет ряд важных функциональных свойств - конформационная стабильность в фазе раствора, поглощение адсорбцией, денатурация, вызванная поверхностью и упаковка молекул в белковой оболочке, - которые важно учитывать при оценке реагентов на основе белка для блокирующие приложения, а также может направлять разработку улучшенных версий BSA и других блокирующих реагентов на основе белков как отдельно, так и в составе многокомпонентных буферных растворов.

Вклад авторов

G.J.M, A.R.F, J.A.J. и N.-J.C. запланировал исследования. G.J.M. и A.R.F. проводил эксперименты. G.J.M., A.R.F., J.A.J. и N.-J.C. интерпретировал результаты. J.A.J. и N.-J.C. получено финансирование. G.J.M., A.R.F. и J.A.J. написал первый черновик рукописи. Все авторы просмотрели, отредактировали и одобрили статью.

Конкурирующие интересы

Авторы заявляют об отсутствии конкурирующих интересов.

Методы

Белки бычьего сывороточного альбумина

Шесть типов бычьего сывороточного альбумина (БСА), использованные в этом исследовании, были выбраны на основе трех различных методов фракционирования без или с этапом удаления жирных кислот, и были закуплены у Sigma-Aldrich ( Санкт-ПетербургЛуис, Миссури, США). Лиофилизированные порошки белков БСА, содержащих жирные кислоты, очищенные фракционированием холодным этанолом, фракционированием тепловым шоком или холодным этанолом с последующим фракционированием тепловым шоком, были отобраны и имеют каталожные номера. A2153, A3059 и A7638 соответственно. Эти три жирных белка BSA были обозначены как BSA 1, 2, 3 соответственно. Были также получены соответствующие версии без жирных кислот, имеющие каталожные номера. A6003, A7030 и A0281 соответственно. Эти три обезжиренных белка BSA были обозначены как BSA 4, 5, 6 соответственно.

Реагенты

Додецилсульфат натрия (SDS, каталожный номер L4390), хлорид натрия (NaCl, каталожный номер 746398), гидроксид натрия (каталожный номер S5881) и октановая кислота (каприловая кислота, каталожный номер C2875) также были приобретен у Sigma-Aldrich, в то время как трис (гидроксиметил) аминометан (Трис, номер по каталогу 0497) был приобретен у Amresco (Солон, Огайо, США). Этанол (95%) был приобретен у Aik Moh (Сингапур), соляная кислота (HCl, каталожный номер 100317) была куплена у Merck (Берлингтон, Массачусетс, США), а фетальная бычья сыворотка (FBS, каталожный номер.СВ30160.03, лот № RC35960) был приобретен в HyClone Laboratories (Логан, Юта, США) и хранился при -20 ° C до эксперимента. Нормальную человеческую сыворотку (каталожный номер NHS, лот № 38) получали от Complement Technology (Тайлер, Техас, США) и хранили при -80 ° C до эксперимента. 30% раствор акриламида / бис 29: 1 (номер по каталогу 1610156), персульфат аммония (номер по каталогу 1610700), тетраметилэтилендиамин (TEMED, номер по каталогу 1610800), 4-кратный буфер для образцов Лэммли (номер по каталогу 1610747), 2-меркаптоэтанол (каталожный №1610710), 10 × Трис-буферный солевой раствор (TBS, номер по каталогу 1706435), 10 × Трис / глициновый буфер (№ по каталогу 1610734), 10 × буфер Трис / глицин / SDS (№ по каталогу 1610732), Твин 20 (№ по каталогу 1706531), нитроцеллюлозные мембраны (каталожный номер 1620112), стандарты Precision Plus Protein Standards (каталожный номер 1610375), усиленный хемилюминесцентный (ECL) субстрат Clarity Max Western (каталожный номер 1705062) и козьи антибиотики, конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP). -мышиное антитело к иммуноглобулину G (IgG) (каталожный номер 1721011, серия №64109318) были приобретены в Bio-Rad Laboratories (Геркулес, Калифорния, США). Моноклональное антитело комплемента C3b (номер в каталоге MA1-40155, номер партии Sh3428445) было приобретено в Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA, USA). Метанол (номер по каталогу M / 4000/17) был получен от Fisher Scientific (Лафборо, Великобритания), а наночастицы диоксида кремния диаметром 100 нм (номер по каталогу SISN100) были получены от компании nanoComposix (Сан-Диего, Калифорния, США).

Подготовка образца

Водный буферный раствор 10 мМ Трис, 150 мМ NaCl и pH 7.5 готовили с водой, обработанной Milli-Q (удельное сопротивление> 18,2 МОм · см при 25 ° C), и фильтровали через мембранный фильтр из полиэфирсульфона (PES) 0,2 мкм (Thermo Fisher Scientific, номер по каталогу 595-4520). Растворы БСА получали растворением лиофилизированного порошка БСА в этом Трис-буфере и затем фильтрованием через шприц-фильтр 0,2 мкм (каталожный номер PN-4612; Pall Corporation, Порт Вашингтон, Нью-Йорк, США). Молярные концентрации белков BSA в водном буферном растворе определяли измерениями поглощения ультрафиолетового (УФ) света при 280 нм и со значением коэффициента молярной экстинкции 43 824 M -1 см -1 .Где это применимо, добавление каприловой кислоты к образцам BSA проводили, сначала растворяя каприловую кислоту и гидроксид натрия в Трис-буфере, чтобы получить 50 мМ раствор каприловой кислоты с pH 7,5. Затем раствор каприловой кислоты добавляли к соответствующим количествам раствора BSA, чтобы получить образец BSA с примесью каприловой кислоты с молярным соотношением каприловая кислота: BSA 10: 1. Кроме того, буфер для вестерн-блоттинга готовили путем разбавления 10-кратного трис / глицин / SDS-буфера водой до 1-кратной концентрации, а буфер для переноса получали разбавлением 10-кратного трис / глицинового буфера водой и метанолом до 1-кратной концентрации. и добавление 20% (об. / об.) метанола.Блокирующие растворы, содержащие BSA, для экспериментов вестерн-блоттинга готовили путем первого разбавления 10 × TBS водой с последующим добавлением Tween 20 для получения раствора 1 × TBS с 0,1% (об. / Об.) Tween 20 (TBST). Затем BSA растворяли в TBST с получением 3% (мас. / Об.) Блокирующего раствора BSA.

Динамическое рассеяние света

Динамическое рассеяние света (DLS) использовалось для измерения среднего гидродинамического диаметра и полидисперсности молекул белка BSA в растворе с использованием анализатора размера частиц (ZetaPALS, Brookhaven Instruments, Holtsville, NY, USA), который оснащен а 658.Монохроматический лазер 0 нм. Измерения проводились под углом рассеяния 90 °, и программное обеспечение BIC Particle Sizing (v5.27; Brookhaven Instruments) использовалось для анализа функции автокорреляции интенсивности с целью получения гауссова распределения размеров, взвешенного по интенсивности. Температуру в измерительной камере контролировали с помощью петли обратной связи, и измерения образца белка сначала регистрировали при 25 ° C, затем нагревали и повышали температуру с 50 ° C до 75 ° C с шагом 5 ° C.После каждого ступенчатого повышения температуры измерительную камеру уравновешивали в течение 5 мин перед выполнением измерения DLS. В некоторых зависящих от времени измерениях температура в измерительной камере сначала повышалась с 50 ° C до 55 ° C перед поддержанием постоянной температуры на уровне 60 ° C и измерением размера белка каждые 10 мин в течение 200 мин. Все заявленные значения были получены из 5 технических повторений.

Спектроскопия кругового дихроизма

Эксперименты по спектроскопии кругового дихроизма (CD) проводили с использованием спектрометра AVIV Model 420 CD с программным пакетом AVIV CDS (v3.36 MX) (AVIV Biomedical, Лейквуд, Нью-Джерси, США). Спектроскопические измерения КД проводили с использованием 400 мкл растворов 2,5 мкМ образцов БСА в кювете с длиной оптического пути 1 мм с пробкой из ПТФЭ (каталожный № 110-QS; Hellma, Müllheim, Germany). Измерения регистрировались со спектральной полосой пропускания 1 нм, шагом 0,5 нм и временем усреднения 0,1 с. Эксперименты при повышенных температурах проводились путем увеличения температуры в измерительной камере с шагом 5 ° C от 50 до 75 ° C и регистрации спектров в каждой температурной точке после 5-минутного времени уравновешивания.Все полученные спектры были обработаны путем вычитания фоновых спектров эквивалентных условий раствора без белка BSA, и данные были представлены в единицах средней молярной эллиптичности остатка ([θ]) на основе следующего уравнения: где n - количество аминокислотных остатков, c - молярная концентрация белка, а l - длина пути кюветы в см. Все спектры КД были сглажены с помощью функции сглаживания Savitzky-Golay 54 с окном сглаживания из 20 точек и полиномиальным порядком 2 в OriginPro 2019b (v9.6.5.169) (OriginLab, Нортгемптон, Массачусетс, США). Процент α-спирали каждого белка BSA был рассчитан из данных [θ] при 222 нм ([θ] 222 ) на основе следующего уравнения 55 :

Мониторинг микровесов-диссипации кварцевых кристаллов

Измерения микровесов-диссипации кварцевых кристаллов (QCM-D) проводили с использованием прибора QSense E4 (Biolin Scientific AB, Стокгольм, Швеция). Сенсорный кристалл кварцевого кристалла АТ-среза с покрытием из диоксида кремния с основной частотой 5 МГц (QSX 303, Biolin Scientific) использовали для характеристики адсорбции белка на поверхностях из диоксида кремния.Температуру устанавливали на 25 ° C для всех экспериментов, а операцию измерения контролировали с помощью программного пакета QSoft 401 (v2.5.13.664) (Biolin Scientific). Перед каждым экспериментом сенсорные чипы последовательно промывали 1% (масс. / Об.) Водным раствором SDS, водой и этанолом, а затем сушили в слабом потоке газообразного азота с последующей обработкой кислородной плазмой (PDC-002, Harrick Plasma, Итака, Нью-Йорк, США) на 3 мин. Перистальтический насос использовался для закачки жидких образцов в измерительную камеру с объемной скоростью потока 100 мкл мин -1 .Стабильный базовый сигнал был сначала установлен в буферном растворе Трис перед тем, как 100 мкМ белка BSA вводили в измерительную камеру на 30 мин, после чего следовала стадия промывки буфером. Сдвиги резонансной частоты (ΔF) и рассеяния энергии (ΔD) регистрировались в режиме реального времени с несколькими нечетными обертонами, как описано ранее 56 , и приводятся нормализованные данные для пятого обертона. Данные QCM-D также были проанализированы моделью Voigt-Voinova 57 с использованием QTools (v3.0.15.553) (Biolin Scientific), чтобы оценить эффективную толщину слоя адсорбированного белка, образовавшегося после промывки буфера. Для этого анализа предполагалось, что адсорбированный белковый слой представляет собой гомогенный однослойный слой белковых молекул с однородной толщиной и с равномерной эффективной плотностью 1300 кг м -3 . Плотность и вязкость основного водного буферного раствора были зафиксированы на уровне 1000 кг · м -3 и 0,001 Па · с -1 , соответственно.

Метод QCM-D также использовался для определения блокирующей способности покрытий BSA против биообрастания сыворотки.Для этих экспериментов 100 мкМ раствор BSA сначала добавляли к чистой поверхности диоксида кремния при непрерывном потоке в течение 60 минут, после чего следовала 40-минутная стадия промывки буфером. Затем вводили неразбавленную фетальную бычью сыворотку (FBS) при непрерывном потоке в течение 80 минут с последующей стадией заключительной промывки буфером в течение 30 минут. Процент эффективности блокировки был рассчитан путем сравнения абсолютной разницы между сдвигом частоты из-за адсорбции только BSA (после первого этапа промывки буфера) и последующим сдвигом частоты из-за биообрастания FBS (после второго этапа промывки буфером), которая обозначается как ΔF FBS-BSA .Контрольный эксперимент без покрытия BSA также был проведен для измерения абсолютного сдвига частоты из-за одного биообрастания FBS (после стадии промывки буфером), который обозначен как ΔF Control . Для каждого покрытия BSA процент эффективности блокировки рассчитывали по следующему уравнению:

Локализованный поверхностный плазмонный резонанс

Усредненный по ансамблю локализованный поверхностный плазмонный резонанс ( LSPR) были проведены в режиме оптического пропускания с использованием прибора Insplorion XNano (Insplorion AB, Гётеборг, Швеция), как описано ранее 58 .Луч белого света, освещающий круглую область размером ∼4 мм 2 , проходит через сенсорный чип с диоксидом кремния (Insplorion), состоящий из хорошо разделенных массивов золотых нанодисков (покрытие поверхности ∼8%), нанесенных методом коллоидной литографии с отверстиями-маской 59 на прозрачной стеклянной подложке. Нанодиски имели среднюю высоту и диаметр 20 и 120 нм. Соответственно, и поверхность сенсорного чипа была конформно покрыта пленкой кремнезема (толщиной ~ 10 нм). Затем свет проходил через окно из кварцевого стекла и собирался спектрофотометром.Перед каждым экспериментом сенсорный чип последовательно промывали 1% (масс. / Об.) Водным раствором SDS, водой и этанолом, затем сушили в слабом потоке газообразного азота. Затем чип обрабатывали кислородной плазмой в течение 2,5 мин. Затем сенсорный чип загружали в измерительную камеру, и жидкие образцы вводили перистальтическим насосом с объемной скоростью потока 100 мкл мин -1 . Стабильный базовый сигнал был установлен в буферном растворе Трис перед тем, как 100 мкМ БСА вводили в измерительную камеру при непрерывном потоке в течение 30 мин, после чего следовала стадия промывки буфером.Программный пакет Insplorer (Insplorion AB) использовался для записи спектров экстинкции LSPR с временным разрешением 1 Гц, а положение центра тяжести (пика) (λ) в спектре экстинкции в каждый момент времени рассчитывалось с использованием полинома высокого порядка. штуцер 60 . Таким образом, можно было определить смещение Δλ с временным разрешением из-за адсорбции белка, а график производной по времени сдвига Δλ также был рассчитан с помощью программного пакета OriginPro 2019b.

Инфракрасная спектроскопия с ослабленным полным отражением с преобразованием Фурье. Bruker, Баден-Вюртемберг, Германия), который был оснащен аксессуаром MIRacle ATR, содержащим кристалл ZnSe ATR с тремя отражениями (PIKE Technologies, Фитчбург, Висконсин, США).Аликвоту 30 мкл раствора BSA 100 мкМ пипеткой наносили на кристалл ATR для образования капли, и сразу же записывали спектр поглощения, чтобы охарактеризовать вторичную структуру белков BSA в фазе раствора. Затем BSA инкубировали с поверхностью кристалла ATR при комнатной температуре в течение 30 мин, после чего следовала серия из десяти этапов промывки буфером для удаления слабо адсорбированных белков. Во время каждой стадии промывки к капле образца добавляли 30 мкл дополнительного буферного раствора (без белка) с последующей аспирацией из капли общего объема 30 мкл.После завершения этапов промывки регистрировали второй спектр поглощения, чтобы охарактеризовать вторичную структуру белков БСА в адсорбированном состоянии. Во время измерений камера для образцов непрерывно продувалась азотом для минимизации влажности окружающей среды. Программный пакет OPUS 6.5 (Bruker) использовался для сбора спектров поглощения ATR-FTIR при разрешении 4 см

-1 и усреднения по 128 сканированным изображениям. Все записанные спектры были нормализованы путем вычитания фоновых спектров только из буфера и водяного пара, чтобы удалить артефакты поглощения воды и окружающего водяного пара, соответственно.

Относительный вклад различных элементов вторичной структуры был определен для всех образцов путем аппроксимации кривой амидных полос I спектров поглощения (1720-1580 см -1 ) гауссовым компонентам на основе пиков, идентифицированных на графике второй производной спектры поглощения и из литературных ссылок 44, 61-64 . Все анализы аппроксимации кривых проводились с использованием функции Peak Analyzer в программном пакете OriginPro 2019b. Предполагалось, что спектр поглощения, полученный в результате эксперимента, представляет собой линейную комбинацию нескольких составляющих гауссовых пиков, каждый из которых сосредоточен вокруг заданного значения волнового числа и представляет собой элемент вторичной структуры белка.Процентные значения вторичной структуры определяли путем вычисления площади под аппроксимированными кривой пиками, которые были присвоены каждому элементу вторичной структуры, в виде доли от общей площади под подобранной кривой. Пики с центрами 1682–1678 см –1 были отнесены к структурам β-витков, 1656–1654 см −1 к α-спирали, 1649–1648 см −1 к случайной катушке, 1639–1624 см - 1 для протяженных цепей и 1618-1612 см -1 для межмолекулярных β-листов.

Электрофорез в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия и вестерн-блоттинг.

Перед экспериментами были приготовлены 10% -ные полиакриламидные гели при pH 8,8 и 5% -ные гели при pH 6,8 с пятнадцатью лунками для загрузки образцов на гель. Для подготовки образцов нормальную человеческую сыворотку (NHS) размораживали, а затем сразу же разбавляли до 1% (об. / Об.) В Трис-буфере с последующей инкубацией при 37 ° C в течение 30 минут. Затем аликвоту разбавленного NHS объемом 180 мкл смешивали с 54 мкл 4-кратного буфера Лэммли и 6 мкл 2-меркаптоэтанола.Затем смесь образцов нагревали до 95 ° C в течение 5 минут для полной денатурации белков сыворотки, а затем снова охлаждали до комнатной температуры. Аликвоту стандартов белка 10 мкл загружали в первую дорожку полиакриламидного геля, а на следующие две дорожки загружали по 10 мкл смеси образцов; эту последовательность повторяли всего пять раз, чтобы заполнить все дорожки в геле. Затем проводили электрофорез в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS-PAGE) при 50 В в течение 15 минут, а затем при 100 В в течение 90 минут в рабочем буфере.

Полосы белка в геле затем переносили на нитроцеллюлозную мембрану при 300 мА в течение 2 ч в буфере для переноса, и использовали пакеты со льдом, чтобы буфер для переноса оставался холодным во время процесса переноса. После стадии переноса мембраны разрезали на полоски, каждая из которых содержала три дорожки стандартов белка (дорожка 1) и образцы сыворотки (дорожки 2-3). Блокирующие растворы готовили с использованием жирного или обезжиренного BSA [3% (вес / объем) BSA в TBST; BSA 1 или 5], и каждую полоску инкубировали с 5 мл соответствующего блокирующего раствора BSA при комнатной температуре в течение 1 часа.Затем мембраны инкубировали с моноклональным антителом комплемента C3b в качестве первичного антитела (разведение 1: 500 в блокирующем растворе) в течение ночи. Затем каждую мембрану промывали TBST в течение 10 мин. После трех стадий промывки мембраны инкубировали с HRP-конъюгированными вторичными антителами козы против IgG мыши (разведение 1: 2000 в блокирующем растворе) в течение 1 ч с последующими четырьмя последующими стадиями промывки TBST.

Затем мембраны инкубировали с субстратом Clarity Max Western ECL в течение 5 минут для усиления хемилюминесцентных свойств.Все этапы инкубации и промывки проводились на качающейся платформе. Полосы белка впоследствии были визуализированы с использованием прибора Amersham Imager 600 и прилагаемого к нему программного обеспечения (v0.9.8) (GE Healthcare, Чикаго, Иллинойс, США) с временем экспозиции 1 с. Затем был использован программный пакет Fiji / ImageJ 65 для количественной оценки интенсивности шумовых полос, расположенных около маркеров молекулярной массы 250, 75 и 50 кДа. Цифровое изображение пятен сначала было настроено на 8-битную шкалу серого, а затем был построен профиль интенсивности для каждой выбранной дорожки с использованием функции анализа гелей.Пики из неспецифических интересующих полос были идентифицированы, и базовая линия была создана, проведя прямую линию между двумя точками минимума по обе стороны от каждого интересующего пика. Затем инструмент Wand использовался для определения площади, ограниченной пиком и базовой линией. Эти значения были определены как значения интенсивности для каждой выбранной неспецифической полосы.

Иммуноферментный анализ

Набор для иммуноферментного анализа MicroVue SC5b-9 Plus (номер по каталогу A020; Quidel, Сан-Диего, Калифорния, США) использовали для экспериментов с иммуноферментным анализом (ELISA).Образцы наночастиц диоксида кремния, покрытые BSA, были приготовлены путем смешивания равных объемов соответствующего раствора 1 мг / мл -1 BSA с 2 мг / мл наночастиц диоксида кремния -1 в трис-буфере. Затем смеси инкубировали при 37 ° C в течение 2 часов с последующим центрифугированием при 16000 × g в течение 30 минут. Супернатанты удаляли, а наночастицы ресуспендировали в свежем Трис-буфере. Другой цикл центрифугирования и ресуспендирования был проведен с получением 1 мг / мл образцов наночастиц диоксида кремния, покрытых -1 BSA.Аликвоту 10 мкл каждого образца наночастиц диоксида кремния, покрытого BSA, затем смешивали с аликвотой 40 мкл свежеоттаявшей нормальной сыворотки человека (NHS). Аликвоту NHS объемом 50 мкл использовали в качестве отрицательного контроля (самый низкий уровень активации комплемента), а 10 мкл 1 мг / мл -1 наночастиц диоксида кремния без покрытия плюс 40 мкл NHS использовали в качестве положительного контроля (самый высокий уровень комплемента). активация). Все исследуемые образцы инкубировали при 37 ° C в течение 30 мин.

Затем анализ выполняли с использованием 96-луночных планшетов, которые были предоставлены в наборе для ELISA, в соответствии с инструкциями производителя.Все образцы сыворотки, включая контрольные, были разбавлены в 40 раз с использованием предоставленного раствора для разбавления образцов перед добавлением в лунки. Стандартные растворы добавляли без разбавления. Значения оптической плотности в каждой лунке определяли с помощью планшет-ридера Infinite Pro 200 (Tecan, Männedorf, Швейцария). Стандартные кривые рассчитывали путем сопоставления известных концентраций стандартных растворов с соответствующими значениями оптической плотности. Затем вычисляли концентрацию белка SC5b-9 в каждом образце.Степень защиты, обеспечиваемую каждым покрытием BSA, рассчитывали, рассматривая концентрации белка SC5b-9 из образцов отрицательного и положительного контроля как 100% и 0% защиты соответственно.

Статистический анализ

Статистический анализ проводили с использованием программного пакета GraphPad Prism (v8.0.1) от GraphPad Software (Ла-Холла, Калифорния, США). Односторонний или двусторонний дисперсионный анализ (ANOVA) с соответствующим тестом множественных сравнений и непарный t-тест использовали для вычисления статистической значимости экспериментальных данных, если это необходимо.Весь статистический анализ включал двусторонние тесты. Результаты непарных t-тестов представлены как значения P , тогда как результаты тестов множественных сравнений представлены как значения P с поправкой на множественность. P <0,05, P <0,01, P <0,001 и P <0,0001 указывают уровни статистической значимости. Дополнительную информацию можно найти в дополнительных таблицах 6-15.

Доступность данных

Все данные, подтверждающие выводы этого исследования, доступны в этой статье и файлах с дополнительной информацией, а также у соответствующих авторов по разумному запросу.

Благодарности

Авторы благодарят г-на Tun Naw Sut за техническую помощь в проведении экспериментов QCM-D. Эта работа была поддержана Национальным исследовательским фондом Сингапура через грант программы конкурентных исследований (NRF-CRP10-2012-07) и грант на подтверждение концепции (NRF2015NRF-POC0001-19), а также Программой открытия творческих материалов через Национальный исследовательский фонд Кореи (NRF), финансируемый Министерством науки, ИКТ и планирования будущего (NRF-2016M3D1A1024098).

Каталожные номера

  1. 54.↵
  2. 55.↵
  3. 56.↵
  4. 57.↵
  5. 58.↵
  6. 59.↵
  7. 60.↵
  8. 61.↵
  9. 62.
  10. 63.
  11. 64.↵

    Srour, B., Bruechert, S., Andrade, SL & Hellwig, P. в описании структуры и функций мембранного белка, 195–203 (Springer, 2017).

  12. 65.↵

NCAA College Football FBS Текущая индивидуальная статистика

FBS

Футбол

FBSFCSDIIDIII ИНДИВИДУАЛЬНАЯ СТАТИСТИКА

Выберите индивидуального StatisticAll PurposeBlocked KicksCombined удара ReturnsCompletion PercentageCompletions Per GameField Гол PercentageField голов за GameForced FumblesFumbles RecoveredInterceptions Per GameKickoff Вернуться TDsKickoff ReturnsPasses DefendedPassing EfficiencyPassing TDsPassing YardsPassing Yards Per GamePassing Yards за CompletionPoints ответственного ForPoints несет ответственность за Per GamePunt Вернуться TDsPunt ReturnsPuntingReceiving TDsReceiving YardsReceiving Yards Per GameReceptions Per GameRush Yards За выполнение Рашинг ТДСтроительные ярдыСкорые ярды за игруМешки Подсчет очковСоло отборыОтборы на поражениеОбщее количество перехватовОбщее нападениеОбщее количество набранных очковОбщее отборовОбщее количество приземлений Ярдов за попытку паса Восприятие ярдов

СТАТИСТИКА КОМАНДЫ

Выбор команды Statistic3rd вниз Преобразование Pct3rd вниз Преобразование Pct Defense4th вниз Преобразование Pct4th вниз Преобразование Pct DefenseBlocked KicksBlocked Kicks AllowedBlocked PuntsBlocked плоскодонки AllowedCompletion PercentageDefensive TDsFewest PenaltiesFewest Штрафные санкции в GameFewest Штраф YardsFewest Штраф Yards Per GameFirst Downs DefenseFirst Downs OffenseFumbles LostFumbles RecoveredKickoff Возвращение DefenseKickoff ReturnsNet PuntingPasses Если бы InterceptedPasses InterceptedPassing OffensePassing Разрешенные ярдыПроходные ярды за завершениеПроходная защитаВозврат пунтаЗащита красной зоныНапад в красной зонеСпешная защитаСпешное нападениеРазрешенные мешкиВ защите с подсчетом очковРасчетное нападениеРазрешены отборы при проигрышеЭффективность передачи командПроходная эффективность команды ЗащитаКомандные мешкиКомандные захваты на проигрышВремя владенияБоевое преимущество3Общее наступлениеОбновная оборона

Пунтинг

Последнее обновление 12 января 2021 г. - Через игры 11 января 2021 г.

Фундаментный блок в Харькове.Цены на блочный фундамент. Купить фбс в компании Бетонстрой.

(Цена действительна с 23.12.2019)

Фундаментный блок

Продукты

Размер

Объем / Вес

Стоимость грн за 1 шт.

ФБС 24-3-6 блок

2400x300x580

0.409/ 0,980

710

ФБС 24-4-6 блок

2400x400x580

0,544 / 1,304

900

ФБС 24-5-6 блок

2400x500x580

0,680 / 1,630

1120

ФБС 24-6-6 блок

2400x600x580

0.816/ 1,957

Блок ФБС-12-3-6

1180x300x580

0,205 / 0,490

400

Блок ФБС-12-4-6

1180x400x580

0,266 / 0,637

490

Блок ФБС-12-5-6

1180x500x580

0.332/ 0,795

585

ФБС-12-6-6 блок

1180x600x580

0,399 / 0,956

Блок ФБС-9-3-6

880x300x580

0,147 / 0,351

ФБС-9-4-6 блок

880x400x580

0.196/ 0,469

Блок ФБС-9-5-6

880x500x580

0,245 / 0,586

Блок ФБС-9-6-6

880x600x580

0,294 / 0,704

Стоимость доставка фундаментных блоков по Харькову:

  • Самосвал (10 тонн) - 900 грн
  • Самосвал (15 тонн) - 1000 грн
  • Самосвал (20 тонн) - 1500
  • грн.
  • Самосвал (25 тонн) - 1600
  • грн.
  • Бортовой грузовик (длина кузова - 6м, грузоподъемность - 11т) - 1000 грн.
  • Бортовой грузовик (длина кузова - 9м, грузоподъемность - 17т) - 1200 грн.
  • Бортовой грузовик (длина кузова - 12м, грузоподъемность - 20т) - 1500 грн.
  • Боковая тележка с прицепом (6м + 6м, грузоподъемность - 20т) - 1500 грн
  • Бортовой манипулятор (15т) - 1400 грн

Стоимость доставки по региону рассчитывается по пробегу

Фундаментные блоки - изделия прямоугольной формы из марок тяжелого бетона.Фундаментные блоки, которые производит «Бетон-Строй», очень часто используются при возведении неотапливаемых зданий, подвальных стен, при строительстве технических подземных сооружений и ленточных фундаментов. Эти изделия способны выдерживать значительные нагрузки и подходят для работ любой сложности.

Фундаментные блоки, производимые нашей компанией, отличаются высоким качеством и долговечностью, так как изготовлены с соблюдением новейших стандартов производства и имеют все необходимые сертификаты качества и паспорта соответствия.

Фундамент - это основа любого сооружения и постройки, поэтому о его будущем нужно позаботиться заранее! Использование бетонных блоков от компании «Бетон-Строй» при возведении фундаментов позволяет создать прочный и надежный «грунт» для любого здания!

Фундаментные блоки от компании «Бетонстрой» - гарантия отличного качества, высокой надежности и отличных технических характеристик!

Ознакомьтесь с правилом сокращения блоков американского футбола.Вот как узнать, что разрешено.

Правила, касающиеся блоков ниже пояса, являются одними из самых сложных в студенческом футболе.

Законность блока ниже пояса зависит от того, кто это делает и где на поле. Ставки высоки, потому что некоторые команды встраивают блоки в свои планы на игру. Плюс штраф за незаконный блок - 15 ярдов.

Во-первых, вот полное правило NCAA, касающееся блоков ниже пояса в результате нарушения:

Линейные игроки, находящиеся в исходном положении полностью внутри коробки для снастей, могут по закону блокировать ниже пояса внутри коробки для снастей, пока мяч не выйдет из бокса для снастей.Всем остальным игрокам команды А разрешается блокировать ниже пояса, только если сила первоначального контакта направлена ​​спереди. «Направлено спереди» определяется как внутри области циферблата между «10 часами и 2 часами» вперед от зоны концентрации блокируемого игрока.

Исключения:

-Игроки команды А не могут блокировать ниже пояса, когда блокировка происходит в пяти ярдах или более за нейтральной зоной.

- Игроки, находящиеся за пределами поля для захвата при щелчке, или в любое время после щелчка, или в движении при щелчке, не могут блокироваться ниже пояса в направлении исходного положения мяча при щелчке.

- После того, как мяч покинул бокс для захвата, игрок не может блокировать его ниже пояса по направлению к своей лицевой линии.

Подводя итог, для того, чтобы блок ниже пояса был законным, он должен:

  • Подойдите ближе пяти ярдов к линии схватки
  • Быть спереди, кроме линейного обходчика

Находится ли блок «ниже пояса», зависит от того, где происходит первоначальный контакт.

Определение NCAA:

Блок ниже талии - это блок, в котором сила начального контакта ниже пояса противника, который одной или обеими ногами стоит на земле.В случае сомнений контакт ниже пояса.

Важное уточнение:

Блокирующий, который вступает в контакт выше талии, а затем скользит ниже талии, не блокируется ниже талии.

Две части правила вырезания блоков являются новыми для 2018:

  • Если нападающий блокирует кого-либо ниже пояса более чем на пять ярдов за линией схватки, это незаконно.
  • Только внутренние линейные могут блокировать ниже талии сбоку.У всех остальных блоки ниже талии должны идти спереди. Раньше другим атакующим игрокам разрешалось низко блокировать сбоку, пока они находились внутри зоны для захвата - области в пяти ярдах в любом направлении от снэппера и до лицевой линии нападения.

Другое: нападающие не могут блокировать ниже пояса в направлении своей лицевой линии после того, как мяч покинул зону для захвата. Запрет на низкие блоки за пределами пяти ярдов должен позаботиться об этом в любом случае, если игрок не поворачивается очень быстро.

Вот пример законного обрезного блока.

Посмотрите на H-защитника Технологического института Джорджии, который a) остается в пределах пяти ярдов от линии схватки и b) ныряет на полузащитника из Теннесси спереди.

А вот пример того, что будет незаконным низким блоком в 2018 году:

Это слабое место, и оно идет сбоку:

В то время это было названо незаконным, что привело в ярость тогдашнего тренера штата Флорида Джимбо Фишера, который подумал, что это было с фронта.(Это между 10 и 2 часами.)

Младший блок - это не то же самое, что и блокирующий блок, который всегда недопустим.

Чоп-блок - это когда один игрок низко блокирует оппонента, который уже заблокирован высоко.