Грунтовка для обработки паркета

Во время работ по укладке паркета грунтовку производят дважды. Это делается с целью достижения максимального качества укладки и создания покрытия, которое обладает надлежащим качеством, эстетично, функционально, хорошо переносит ежедневную уборку и прослужит многие годы.

Этапы грунтовки

Первый раз грунтовка осуществляется перед укладкой паркета – на снование под клей. Благодаря этой процедуре обеспечивается надежность клеевого соединения плашек с основанием и дополнительная их защита от повреждающих факторов со стороны перекрытия.
Второй раз паркет грунтуют перед нанесением лака. Это позволяет лаковому покрытию создать качественную защитную пленку, прочно удерживаться на поверхности дерева и обеспечивать ему максимальную защиту. Кроме того, нанесение грунтовки уменьшает вероятность растрескивания лака.

Обработка основы перед укладкой паркета

Покрытие грунтом основы под паркет обеспечивает ее прочность. В процессе работ используют валики и кисти или же краскопульт. Благодаря обработке верхний слой основы защищается от разрушения и связывается пыль на его поверхности. Работы производят непосредственно перед укладкой паркета, чтоб избежать покрытия основы свежей пылью.
Грунтовку под паркет выбирают исходя из качества и типа покрытия и вида используемого клея. Правильный подбор грунта под паркет обеспечивает длительную и беспроблемную эксплуатацию паркетного покрытия.

Грунтовка паркета под нанесение лака

Нанесенный на уложенный паркет грунт способствует выравниванию поверхности и предотвращает разрушение древесины и лакового слоя со временем. Грунтовка подчеркивает текстуру древесины и сокращает расход лака.

Использование шпателя или специальных шлифовочных позволяет достичь идеальной ровной поверхности пола.

По функциям паркетные грунтовки делят на:
• реставраторы;
• грунтовки для выравнивания;
• клеи для зазоров между плашками;
• фактурные грунтовки;
• противогрибковые;
• универсальные грунтовки.

При выборе грунтовки под лак учитывают как свойства паркета, так и тип будущего лакового покрытия. Имеет также значение дизайнерское решение – то, какой вид должен приобрести пол по окончании работ. Также стоит учитывать риске грибковых поражений, зависящий от влажности.

Все, что нужно знать о грунтовке: виды, свойства, состав и назначение

Грунтовка представляет собой один из обязательных материалов при проведении различных ремонтных работ. Она обладает массой функций и назначений, основным из которых является укрепление поверхности. После нанесения грунтов перечень материалов, которые могут быть использованы для отделки поверхности, значительно возрастает. Грунтовку используют для обработки поверхностей перед нанесением шпатлевки, штукатурки, краски и поклейки обоев. Качественная грунтовка имеет отличное сцепление с материалом основания, гарантируя длительный срок службы отделочных материалов.

Аквамарин-ЛКМ предлагает купить грунтовку как для внутренних, так и для внешних работ. Широкий ассортимент видов продукции позволит подобрать оптимальный вариант в зависимости от назначения.

Назначение и особенности использования грунтовки

Основное назначение грунтовки заключается в укреплении пористых поверхностей и оснований, оптимизации их впитывающих свойств. Грунтовка наносится перед покраской стен и других оснований, чтобы обеспечить равномерное распределение и минимальный расход краски. Если пористую поверхность не загрунтовать, краска будет отслаиваться и осыпаться. Цель использования зависит и от того, что входит в состав грунтовки. Существуют универсальные и специальные смеси.

Основное назначения и функции грунтовки:

• повышение адгезии слоев отделки, улучшая качество покраски, поклейки обоев, штукатурки и нанесения других материалов;
• снижение расхода краски и клея;
• повышение прочности основания, что особенно важно для рыхлых и пористых оснований;
• при наличии в составе фунгицидных добавок обеспечиваются противогрибковые свойства грунтовки, что особенно важно для помещений с высоким уровнем влажности и наружных работ;
• специальные белые грунтовки обеспечивают идеальное основание для нанесения красок любых оттенков.

А с учетом того, что грунтовка стоит относительно недорого, ее применение приносит ощутимый экономический эффект.

Аквамарин-ЛКМ является официальным дилером заводов «Квил», «Elcon», «ВИТ» и«BSAQUA». Вся продукция востребована потребителями и занимает лидирующие позиции на отечественном рынке.

Виды грунтовки

Существуют различные виды грунтовок, которые выпускаются в виде сухих смесей, жидких и пастообразных составов. Выпускаются грунтовки для ручного, машинного и универсального нанесения. Применяются они для обработки поверхностей из различных материалов. По назначению грунтовки делятся на такие виды:

• Универсальная
  Может использоваться для любых ремонтных работ. Отличается хорошей адгезией с различными материалами. Однако чаще всего характеристики универсальной грунтовки уступают специальным составом, разработанных с учетом особенностей определенного материала. К универсальным относится акриловая грунтовка. Также для покрытия различных видов оснований может использоваться и алкидная грунтовка.
• Для дерева
  Грунтовка для дерева применяется для его защиты от грибка, вредителей и влажности. Придает материалу гладкость и позволяет снижать расход материала при покраске.
• Для металла
  Грунтовка чаще всего используется для покрытия черных металлов и никелированных сплавов на основе железа. Ее применения облегчает процесс покраски и придает металлу антикоррозийные свойства.
• Для минеральных оснований
  Применяется для укрепления пористых поверхностей, например, для штукатурки или бетонного основания. Такая грунта обладает отличными проникающими свойствами, снижает расход отделочных материалов. В состав минеральной грунтовки может входить антигрибковое вещество, которое предотвращает образование плесени.

Помимо основных видов грунтовки классифицируются и по типу:

• Антигрибковая
  Используется во влажных помещениях с недостаточной вентиляцией, чтобы предотвратить развития плесени.
• Антикоррозийная
  Применяется для обработки металлических поверхностей для их защиты от коррозии.
• Глубокопроникающая
  Это тип грунтовки используется для отделки старых и пористых поверхностей с целью повышения их прочности. Используется для обработки шпатлевки, гипсокартона, штукатурки. Могут включать в состав компоненты для предотвращения развития грибка
• Изоляционная
  Изоляционная грунтовка используется для борьбы с высоким уровнем влажности. Применяется для наружных и внутренних работ. Рекомендуется использовать для пористы поверхностей, которые под воздействием штукатурки приобретают прочность и долговечность.
• Грунт-краска
  Универсальная грунтовка, используемая для пористых и гладких поверхностей. используется в тепло- и гидроизоляционных, отделочных и других ремонтных работах. Способствует защите от излишнего влагопоглощения.
• Грунт-лак
  Состав одновременно обладает свойствами грунтовки и лака. Используется для обработки деревянных оснований. Может использоваться перед нанесением краски или в качестве финишной отделки. Применяется только для внутренних отделочных работ.

Использование различных видов грунтовок позволяет повысить прочность основания, снизить расход материала, защитить от повышенной влажности, грибка и плесени.

Компания «Аквамарин-ЛКМ» занимается поставками лакокрасочных материалов более 15 лет. Осуществляем прямые поставки с ведущих заводов производителей. Являясь официальными представителями крупных заводов, можем предложить широкий ассортимент продукции по выгодным ценам.

Грунтование. Как правильно выбрать грунтовку

Ленинградская область

Санкт-Петербург

Бокситогорск

Васкелово

Волосово

Волхов

Всеволожск

Выборг

Выра

Вырица

Гатчина

Грузино

Дранишники

Заполье

Зеленогорск

Кингисепп

Кириши

Кировск

Колпино

Колтуши

Коммунар

Лодейное поле

Ломоносов

Лосево

Луга

Мичуринское

Мурино

Ново-Токсово

Отрадное

Павлово

Песочный

Пикалево

Приозерск

Псков

Романовка

Ропша

Рощино

Сестрорецк

Сиверский

Сланцы

Сосново

Сосновый Бор

Тихвин

Токсово

Тосно

Ульяновка

Черемыкино

Москва и Московская область

Москва

Алтуфьево

Видное

Владимир

Дмитров

Дубино

Дубна

Егорьевск

Зеленоград

Иваново

Истра

Климовск

Клин

Коломна

Кострома

Красногорск

Кубинка

Лосино-Петровский

Люберцы

Меличкино

Можайск

Мытищи

Ногинск

Одинцово

Орехово-Зуево

п. Соболиха

Павловский Посад

пгт. Белоозерский

Подольск

Пушкино

Раменское

Сергиев Посад

Серпухов

Сокольники

Старая Купавна

Тарасовка

Химки

Хотьково

Шолохово

Шуя

Щелково

Электросталь

Юдино

Ям

Ярославль

Алтайский край

Барнаул

Амурская область

Благовещенск

Архангельская область

Архангельск

Новодвинск

Северодвинск

Брянская область

Брянск

Волгоградская область

Волгоград

Волжский

Вологодская область

Белозерск

Великий Устюг

Вологда

Воронеж

п. Кадуй

п. Шексна

Тотьма

Череповец

Воронежская область

Воронеж

Забайкальский край

Чита

Ивановская область

Иваново

Шуя

Иркутская область

Ангарск

Иркутск

Шелехов

Кабардино-Балкаарская Республика

Баксан

Нальчик

Калининградская область

Калининград

Калужская область

Кемеровская область

Кемерово

Новокузнецк

Кировская область

Киров

Кирово-Чепецк

Костромская область

Кострома

Краснодарский край

Адлер

Адыгея

Краснодар

Курганинск

Сочи

Красноярский край

Красноярск

Курганская область

Курган

Шадринск

Курская область

Курск

Мурманская область

Апатиты

Кандалакша

Мурманск

Нижегородская область

Нижний Новгород

Новгородская область

Боровичи

Великий Новгород

Старая Русса

Новосибирская область

Новосибирск

Омская область

Омск

Оренбургская область

Бузулук

Новотроицк

Оренбург

Орск

Пензенская область

Пенза

Пермский край

Пермь

Приморский край

Артем

Владивосток

Находка

Псковская область

Великие Луки

Псков

Республика Башкортостан

Бирск

Красноусольский

Кумертау

Нефтекамск

Октябрьский

Салават

Стерлитамак

Уфа

Республика Беларусь

Минск

Республика Бурятия

Улан-Удэ

Республика Дагестан

Махачкала

Республика Казахстан

Астана

Республика Карелия

Костомукша

Петрозаводск

Сегежа

Сортавала

Республика Коми

Сыктывкар

Республика Крым

Севастополь

Симферополь

Республика Мордовия

Саранск

Республика Татарстан

Казань

Набережные Челны

Республика Чувашия

Чебоксары

Ростовская область

Аксай

Батайск

г. Каменск-Шахтинский

Новочеркасск

Ростов-на-Дону

Рязанская область

Рязань

Самарская область

Кинель

п. Волжский (Царевщина)

п. Стройкерамика

Похвистнево

Самара

Тольятти

Ульяновск

Саратовская область

Саратов

Сахалинская область

Южно-Сахалинск

Свердловская область

Екатеринбург

Нижний Тагил

Ставропольский край

Михайловск

Невинномысск

Ставрополь

Тверская область

Тверь

Тульская область

Тула

Тюменская область

Тобольск

Тюмень

Ялуторовск

Ульяновская область

Ульяновск

Хабаровский край

Хабаровск

Ханты-Мансийский АО (Югра)

Лангепас

Мегион

Нефтеюганск

Нижневартовск

Сургут

Челябинская область

Челябинск

Читинская область

Чита

Ярославская область

Ярославль

Противогрибковые средства для обработки потолка

Успешная борьба с плесенью в жилых помещениях зависит не только от эффективного средства обработки, но и от того, как правильно будет оно применяться. Стены, потолок и пол, зараженные грибком и плесенью, удастся очистить когда будут правильно применяться все противогрибковые средства.

Блок: 1/22 | Кол-во символов: 286
Источник: https://nadezhnostroj.ru/stroymaterialyi/otdelochnyie-materialyi/antigribkovoe-sredstvo-dlya-obrabotki-sten-i-potolkov-kakoe-vybrat.html

Причины возникновения плесени

Стоит отметить, что простой влажной или сухой тряпкой удалить плесень нельзя. Также никакие моющие или чистящие средства вам не помогут. Нужно, во-первых, четко понимать, откуда она взялась, а во-вторых, подобрать наиболее сильное специализированное средство, которое предназначено как раз для борьбы с такими микроорганизмами. Причинами появления может быть:

• плохая вентиляция помещения
• недостаточное отопление
• стены отделаны пористыми материалами, где легко могут образоваться колонии 
• неисправная сантехника, дающая течь, конденсат и др.

Блок: 2/5 | Кол-во символов: 571
Источник: https://dezplan.ru/article/top-5-sredstv-ot-pleseni-na-stenah

Избавляемся от проблемы

Вы можете избавляться от плесени несколькими способами: механическим решением непосредственной причины появления грибка или, применяя интенсивные антисептические вещества, которые предназначены для избавления от нее.

• Первый способ, механическое решение корня проблемы, поможет уничтожить проблему навсегда. Речь скорее об обустройстве теплоизоляционных материалов, если дом или стена в квартире плохо утеплена, а также о монтаже или исправлении вентиляционной системы.
• Второй спооб – это применение конкретных средств, разработанных специально для борьбы с плесенью.

Блок: 3/5 | Кол-во символов: 592
Источник: https://dezplan.ru/article/top-5-sredstv-ot-pleseni-na-stenah

План действий

Если на потолке был обнаружен грибок, действовать нужно безотлагательно. Что и как следует делать:

• если на потолке или стенах есть обои или какое-либо другое покрытие, его нужно удалить;
• следующий этап – определить, насколько глубоко поражена поверхность;
• смочить потолок/стену водой. Это поможет предотвратить попадание спор в окружающий воздух, а затем в легкие.

Подготавливаем поверхность

• используя шпатель, снять часть штукатурки с грибком и плесенью;
• зачистить пораженные места наждачной бумагой;
• хорошо высушить поверхность. Если есть возможность, можно воспользоваться тепловентилятором.

Очищаем пораженные места шпатылем

• нанести противогрибковое средство одним слоем;
• примерно через 5 часов провести обработку повторно;
• для достижения максимального эффекта рекомендуется наносить 4-5 слоев.

Обрабатываем поверхность спецсредствами

• покрыть потолок/стену грунтовкой-антисептиком;
• заштукатурить раствором, в составе которого есть антисептическое средство;
• если потолок/стена будут вновь оклеены обоями, в клей необходимо тоже добавить антисептик.

Получаем результат

Блок: 5/6 | Кол-во символов: 1083
Источник: https://ZnatokPotolka.ru/chistka-i-uhod/protivogribkovye-sredstva.html

Профессиональное уничтожение плесени генератором тумана:

Блок: 5/5 | Кол-во символов: 60
Источник: https://dezplan.ru/article/top-5-sredstv-ot-pleseni-na-stenah

Противогрибковые средства по дереву

Древесина – наиболее восприимчивый к плесени материал. Ее следует в обязательном порядке обработать инсектицидами. Дерево, поврежденное грибком, очень быстро разрушается. Поэтому обработку поверхности надо проводить ежегодно в плановом порядке.

#1: Dufa-Holzlasur – лазурь для дерева

Dufa-Holzlasur – тонкослойная, декоративная глазурь для реставрации старых и защиты новых деревянных поверхностей. Влагорегулирующее и водоотталкивающее покрытие предохраняет дерево от негативного воздействия атмосферных осадков.

Dufa-Holzlasur уничтожает появившиеся споры плесени и предупреждает образование грибка, синевы и гниения. Состав проникает вглубь дерева, придавая текстуре выбранный оттенок

Характеристики Dufa-Holzlasur:

• связующее вещество – алкидная смола;
• сфера применения – наружная обработка деревянных поверхностей;
• расход и количество слоев зависят от желаемого результата окрашивания;
• широкая палитра тонировочных оттенков;
• время высыхания – 4 часа.

Антисептик Holzveredlung – это аналог грунтовки Holzlasur. Единственное отличие – глазурь Dufa-Holzveredlung образует глянцевое покрытие.

#2: Барамон С30 – устойчивая пропитка

Барамон С30 – фунгицид для обработки дерева. После нанесения на поверхность препарат в течение двух дней кристаллизуется и впоследствии не вымывается. Средство защищает дерево от грибков, плесени, бактерий, водорослей и мелких насекомых.

Пропитка подходит для уничтожения уже появившейся грибковой плесени. Биоцид нового поколения, содержащийся в Барамон С30, повышает биологическую стойкость древесины

Рекомендации по использованию фунгицида:

• концентрат разводится водой в соотношении 1:6 соответственно;
• расход эмульсии: 0,2 л/кв.м при обработке дерева внутри дома, 0,3 л/кв.м – для уличных конструкций;
• в течение двух-трех дней после нанесения средства поверхность материала необходимо защищать от попадания воды;
• Барамон С30 не подходит для пород деревьев, которые не поддаются пропитке, например, дуба.

Недопустим контакт обработанных фунгицидом элементов с продуктами питания. Концентрат не повышает степень возгораемости древесины.

#3: Pinotex Base – обработка наружных стен

Pinotex Base – грунтовка-антисептик на алкидной основе. Применяется при наружных работах для обработки деревянных фасадов, ограждений, окон и дверей перед покраской. Активные вещества создают «барьер» от плесени, гнили и синевы.

Сфера использования: очищенные до чистоты и новые деревянные поверхности. Pinotex Base применим для строганной и пиленой древесины. Однако средство не эффективно на покрытиях, уже зараженных грибками и вредителями

Свойства и особенности нанесения Pinotex Base:

• средство проникает глубоко в структуру древесины;
• повышает адгезию финишной отделки с поверхностью;
• препятствует грибковым заражениям;
• во время обработки древесина должна быть высушенной – максимально допустимая влажность 20%;
• пропитка не требует разбавления с водой;
• расход раствора для пиленого дерева – 4-8 л/кв.м, для строганного – 6-10 л/кв.м;
• время высыхания – 12-24 часа.

Работы нежелательно выполнять в ветряную или жаркую погоду – активное испарение растворителя препятствует нормальному впитыванию грунтовки. Pinotex Base – огнеопасен, поэтому вблизи проведения обработки запрещено пользоваться открытым огнем и курить.

Блок: 5/8 | Кол-во символов: 3269
Источник: http://sovet-ingenera. com/vent/montazh/antigribkovoe-sredstvo-dlya-sten.html

Меры безопасности

Многие средства против грибка содержат в своем составе ядовитые вещества, поэтому не стоит забывать о технике безопасности при работе с ними:

• органы дыхания обязательно должны быть защищены респиратором;
• на руки лучше надеть перчатки;
• важно обеспечить в помещении хорошее проветривание;
• заходить в помещение лучше через день после того, как была произведена обработка;
• живые цветы на время работы необходимо вынести, а мебель накрыть пленкой.

Если точно придерживаться всех этих правил, обработка потолка, пораженного грибком, пройдет без каких-либо проблем.

Итак, что делать, если на потолке, стенах или какой-либо другой поверхности обнаружился грибок или плесень? Обработать пораженный участок специальным антигрибковым составом. Его можно приобрести в специализированном магазине, а можно приготовить самостоятельно из подручных средств, например, соды.

Похожие публикации

Блок: 6/6 | Кол-во символов: 945
Источник: https://ZnatokPotolka.ru/chistka-i-uhod/protivogribkovye-sredstva.html

Выполнение антигрибковой грунтовки

Антигрибковая грунтовка наносится на очищенное основание. Это делается механическим или химическим способом. Принято сбивать пораженный слой, если это невозможно или нежелательно делать, то проводится обработка поверхности, например, чистой «Белизной». Промыть механически очищенную поверхность можно также 30% водным раствором хлорки, это поможет избавиться от оставшихся в растворе или кирпиче спор.

Антигрибковая грунтовка для стен кроме фунгицидных свойств, обеспечивающих профилактику плесени, должна обеспечивать свои основные функции – улучшение адгезии материалов. Далее наносится краска или декоративная штукатурка. Преимуществом средства ФОНГИФЛЮИД считается отсутствие пятен или разводов после нанесения.

Антигрибковая грунтовка наносится на очищенное основание

Блок: 8/12 | Кол-во символов: 804
Источник: http://couo.ru/kvartira-i-zagorodnyj-dom/stroitelstvo-i-remont/antigribkovoe-sredstvo-dlya-sten-obyazatelnaya-obrabotka-dlya-vsekh-pomeshchenij.html

Опасность от грибков и плесени

Если вы хотите проигнорировать противогрибковую обработку, обратите внимание, что плесень может способствовать появлению ряда заболеваний:

• аллергии;

• астме;

• грибковому поражению кожи и внутренних органов, преимущественно дыхательных;

• онкологическому поражению.

Проживание в комнатах, пораженных грибком, запрещено санитарно-эпидемиологическими нормами, а у детей может вызвать серьезные поражения организма. Своевременная антигрибковая грунтовка перед покраской поможет провести профилактику развития спор.

Грибок в комнате может вызвать проблемы со здоровьем

Блок: 9/12 | Кол-во символов: 582
Источник: http://couo.ru/kvartira-i-zagorodnyj-dom/stroitelstvo-i-remont/antigribkovoe-sredstvo-dlya-sten-obyazatelnaya-obrabotka-dlya-vsekh-pomeshchenij.html

Признаки и причины образования грибка

Появление грибка на стенах – крайне неприятное явление, способное свести на нет дорогостоящий ремонт в квартире.

Плесень не только портит внешний вид, она ухудшает микроклимат в помещении и вредит здоровью человека. Своевременное выявление «врага» существенно облегчает борьбу с грибком. Подробно о методах борьбы с опасным биологическим явлением рассказано в одной из статей нашего сайта.

Споры плесневого грибка токсичны. Попадая в организм человека, они способны вызывать ряд заболеваний: аллергию, бронхит, мигрень, туберкулез и астму. Особенно восприимчивы пожилые люди и дети

О появлении грибка в доме свидетельствуют следующие признаки:

• наличие серых, черных, темно-зеленых точек и пятен на стенах или потолке;
• появление сырого, неприятного запаха в помещении;
• отслаивание краски, обоев, осыпание штукатурки и потемнение межплиточных швов.

Некоторые могут отмечать ухудшение самочувствия – концентрация внимания снижается, учащаются головные боли, возникает быстрая утомляемость.

Выводить плесень необходимо комплексно. Окончательного и бесповоротного избавления от грибка можно достичь, устранив причины его появления.

Главные причины образования грибка: влажность воздуха более 70% и температурный режим от 20°С. «Плачущие» окна – первый тревожный сигнал

Однако влажность и температурные показатели далеко не единственные факторы развития вредных микроорганизмов. К числу значимых причин относятся:

1. Отсутствие или недостаточная вентиляция. Как правило, грибок начинает развиваться в углах комнаты – в месте, где образуется застой воздуха. При достаточном «продуве» образуются завихрения – воздух задувает споры, а излишки влаги выводятся в вентканал.
2. Некачественная гидроизоляция фундамента. В результате некачественной постройки происходит капиллярный подсос влаги от сырого фундамента – стены в доме сыреют.
3. Неудовлетворительное состояние водопровода и протечки канализации. Периодическое намокание пола, потолка, стен и инженерных каналов создает благоприятную среду для развития грибка.
4. Тонкие промерзающие стены. Из-за плохой теплоизоляции происходит сдвиг точки росы, изнутри помещения на стенах оседает конденсат.
5. Холодный чердак или протекающая крыша. Это частая причина появления плесени на верхних этажах и мансардах.
6. Неправильное использование увлажнителя воздуха. При создании тропических условий для экзотических растений в оранжереях иногда поселяется плесневый грибок.

Большинство отделочных и строительных материалов могут поражаться грибком. Темные пятна появляются на обоях, плитке, деревянной отделке и штукатурке.

Галерея изображений

Фото из

Самые благоприятные условия для появления и расселения грибка — ванные комнаты, душевые и туалеты, т. е. помещения с высоким уровнем влажности

Плесень всегда сопутствует нарушениям строительных правил. Если пластиковый плинтус уложен без вентиляционного зазора, под ним обязательно расплодится грибок

С невероятной скоростью плесневый грибок распространяется в швах между элементами плиточной облицовки. Поэтому для обустройства ванных рекомендуют использовать плиточный клей с антисептиком

Грибок на оконных откосах часто вызван несоблюдением техники монтажа: недостаточная гидроизоляция откосов или негерметичный монтажный шов. Ненадлежащее утепление стен тоже провоцирует появление плесени

Если помещение не обустроено вентиляцией, обеспечивающей нормативный воздухообмен, плесень может появиться даже под бумажными обоями

Плесень практически всегда появляется под «не дышащей» отделкой, не пропускающей воздух, особенно, если нарушена технология применения

Плесень способна поражать практически все стройматериалы, из которых сооружают несущие конструкции. Она разрушает бетон, кирпич, древесину

Для того чтобы предотвратить разрушение и предупредить появление плесени применяются средства, позволяющие избавиться от грибка и провести профилактику

Плесневый грибок в ванной комнате

Очаг плесени под пластиковым плинтусом

Распространение плесени в швах плиточной облицовки

Грибковые колонии на оконных откосах

Плесень на бетоне под бумажными обоями

Колонии грибка под виниловыми обоями

Синяя плесень на древесине

Средства борьбы с разрушающим явлением

Кроме того, плесневый грибок способен расселяться в бытовой технике, чаще всего от его появления страдают стиральные машинки, посудомойки и микроволновки.

Блок: 2/8 | Кол-во символов: 4441
Источник: http://sovet-ingenera.com/vent/montazh/antigribkovoe-sredstvo-dlya-sten.html

Полезное видео по теме

Блок: 10/10 | Кол-во символов: 108
Источник: https://otdelkasten.com/pokraska-sten/sredstvo-ot-pleseni-na-stenah

Виды грунтовок против грибка по назначению

Различие продукции против плесени по назначению помогает производителям предложить продукцию по категориям. При этом учитываются потребности покупателей и особенности тех работ, которые им требуется выполнить. Назначение подразумевает разную концентрацию противоплесневых компонентов. Различается и основа, зависящая от типа работ, которые проводились или будут проводиться «до» и «после» нанесения.

В продаже можно встретить санирующие жидкости, применяемые в момент проведения капитального или косметического ремонта:

• эмульсии – для создания защитного санирующего слоя между возможно пораженной поверхностью и новым слоем отделки;

• концентраты – для «лечения» от грибка;

• грунтовочные смеси – для профилактической обработки.

Грунтовка против грибка выбирается исходя из предстоящих работ

К наиболее востребованным относятся следующие продукты: Ферозит (на минеральной основе), MilKill(на латексной основе), «Acryl Grundierung» (на акриловой основе) от немецкой ТМ Олимпик. В данном случае при выборе нужно обращать внимание:

• на глубину проникновения и эффект – в зависимости от характера поражения грибком;

• на основу используемых материалов, чтобы обеспечить максимальную адгезию.

Большинство основ без особых проблем совмещаются между собой. Однако, при использовании только латексных или акриловых продуктов значительно улучшаются эксплуатационные характеристики. Различные антибактериальные добавки помогают решить проблему плесени в долгосрочной перспективе.

Для борьбы с сильным поражением плесенью используют специализированные и профессиональные концентраты. Наиболее популярными средствами от грибка считаются следующие.

• CT99 бренда Ceresit – концентрат для фунгицидного санирования помещений, применяется для обработки фундаментов, вертикальных поверхностей. Обеспечивает длительный эффект, а при соблюдении технологии позволяет полностью избавиться от проблемы.

• Олимп Стоп Плесень для экспресс-обработки без необходимости удаления пораженного грибком слоя.

• спрей-концентрат NEOMID BIO для сканирования небольших участков или для профилактики мест, которые намокли.

• ФОНГИФЛЮИД АЛЬПА – активный фунгицид для всех видов поверхностей без нанесения повреждений. Применяется внутри и снаружи помещения. Выпускается в объемах для строительной обработки и в виде спрея для бытового использования.

• БИОЦИД – очень мощное немецкое средство, двукратная покраска обеспечивает полное уничтожение плесени и грибков.

• антисептик ДАЛИ для всех видов поверхностей, включая дерево и гипсокартон.

Выбор концентратов и строительных растворов от грибков обычно делается в зависимости от доступности продукта, стоимости, характера обработки и преследуемых целей.

Смесь Стоп-Плесень применяется для экспресс обработки пораженной зоны

Блок: 3/12 | Кол-во символов: 2742
Источник: http://couo.ru/kvartira-i-zagorodnyj-dom/stroitelstvo-i-remont/antigribkovoe-sredstvo-dlya-sten-obyazatelnaya-obrabotka-dlya-vsekh-pomeshchenij.html

Виды фунгицидных средств

Обычно средства против плесени фунгицидные. Это биологические или химические вещества, которые подавляют развитие грибков. Активные ингредиенты есть в составе строительных смесей для защиты от плесени. В зависимости от назначения есть 2 вида средств:

• грунтовки, выполняющие функцию профилактики;
• концентрированные смеси.

Эмульсии для профилактики используют при осуществлении ремонта – для отделки стен завершающим покрытием. Противогрибковые грунтовки способны укрепить основание, повысить адгезию, снизить пористость материала, избавиться от плесени и защититься от развития грибка.

При покупке грунтовки следует обращать внимание на состав. В эмульсии не должно быть карбендазима – токсичного фунгицида, который запрещен на территории Европы. Важным фактором при выборе является вид обрабатывающего покрытия:

• укрепляющую грунтовку выбирают для шпаклеванных и оштукатуренных стен под покраску или обои;
• грунт глубокого проникновения – лучший выбор для малопористых оснований;
• универсальным составом обрабатывают разные типы поверхностей.

Есть и другие антигрибковые средства для стен – концентраты. Ими обрабатывают участки, которые поражены грибком. Средства проникают в структуру материала и избавляют от плесени, лишайников, мхов. Многие концентрированные препараты имеют длительный эффект и не допускают вторичного заражения. Для профилактики и устранения грибков применяют составы на основе следующих компонентов:

• латексные – состав обогащен солями тяжелых металлов, поэтому средством обрабатывают стены в жилых комнатах;
• акриловые – антисептические средства используются внутри и снаружи помещения;
• алкидные – эмульсии часто применяют для обработки деревянных поверхностей.

Грунтовки и концентраты сразу готовы к использованию. Для профилактики концентрированная эмульсия разводится водой.

Это эффективное антигрибковое средство для стен. В латексной эмульсии действующим компонентом является биоцид, который уничтожает споры грибков и плесени. Средство используют в качестве профилактики мелкопористых и маловпитывающих поверхностей перед отделкой. Эмульсия идеальна для фундаментов, бассейнов, кирпичных и бетонных стен, гипсокартонных и фанерных покрытий.

На 1 слой расходуется 250 г/ кв. м. Желательно обрабатывать в 2-3 слоя. Глубина проникновения средства составляет 1-5 мм. Высыхает эмульсия за сутки. Ее выбирают для обработки внутри и снаружи дома. Смесь неоднородная, поэтому перед использованием надо перемешать. Работы выполняются при температуре 5-30 градусов.

Блок: 17/22 | Кол-во символов: 2491
Источник: https://nadezhnostroj.ru/stroymaterialyi/otdelochnyie-materialyi/antigribkovoe-sredstvo-dlya-obrabotki-sten-i-potolkov-kakoe-vybrat. html

Видео: Как избавится от грибка на стенах

Блок: 11/12 | Кол-во символов: 40
Источник: http://couo.ru/kvartira-i-zagorodnyj-dom/stroitelstvo-i-remont/antigribkovoe-sredstvo-dlya-sten-obyazatelnaya-obrabotka-dlya-vsekh-pomeshchenij.html

Видео: Как избавится от грибка на стенах

Блок: 12/12 | Кол-во символов: 40
Источник: http://couo.ru/kvartira-i-zagorodnyj-dom/stroitelstvo-i-remont/antigribkovoe-sredstvo-dlya-sten-obyazatelnaya-obrabotka-dlya-vsekh-pomeshchenij.html

Как избежать?

Чтобы избежать появления грибка, необходимо:

1. Уточнить, правильно ли функционируют в доме отопление и вентиляция.
2. Проветривать влажное помещение, оставляя дверь в ванную открытой.
3. При сырости в подвале провести гидроизоляцию.
4. Убрать цветы: фиалку и герань, которые могут вызвать плесень.
5. Обработать стены специальным средством от плесени.

Блок: 13/22 | Кол-во символов: 347
Источник: https://nadezhnostroj.ru/stroymaterialyi/otdelochnyie-materialyi/antigribkovoe-sredstvo-dlya-obrabotki-sten-i-potolkov-kakoe-vybrat.html

Требование к помещению

Чтобы плесень не беспокоила, то необходимо провести необходимые работы по изоляции подвала или панельных швов. Кроме этого, поменять пластиковые окна на распашные модели, они считаются лучшим вариантом.

Желательно предусмотреть дополнительную вентиляцию, если есть такая возможность.

Профилактическая обработка помещения от плесени и грибка:

1. Необходимо обработать проблемные места уксусом или перекисью водорода.
2. Нужно чаще проветривать помещение.
3. Если есть подвал, то необходимо проверить уровень талых и грунтовых вод, обеспечить недоступность попадания влаги от них в помещение.
4. Устанавливать распашные окна.
5. Давать влажным помещениям просыхать за ночь.

Блок: 14/22 | Кол-во символов: 671
Источник: https://nadezhnostroj.ru/stroymaterialyi/otdelochnyie-materialyi/antigribkovoe-sredstvo-dlya-obrabotki-sten-i-potolkov-kakoe-vybrat.html

Что делать если появился грибок или плесень на стенах?

Если уксус и перекись не помогают избавиться от плесени, то тогда лучше провести обработку стен спреем «Биотол» или антисептиком «Дали».

На кухне и ванной необходимо установить вентиляцию. Протирать стены и полы противогрибковым раствором, самодельным или готовым.

Что необходимо делать в первую очередь:

1. Провести механическую очистку мест, где появился грибок.
2. Обработка поверхностей купленным или самодельным средством.
3. Выкинуть вещи, которые оказались, поражены грибком.
4. Провести хорошую вентиляцию в помещение.
5. Устранить все источники влажности либо обеспечить проветривание.

Пошаговое руководство по устранению причин и подготовке поверхности к обработке:

1. Снимаем обои и проводим зачистку стен.
2. На освобожденные участки наносят средство от плесени и оставляют высыхать не менее 5 часов.
3. После этого стены обрабатываются сухой щеткой.
4. Необходимо промыть стены водой и снова их просушить.
5. Наносим грунтовку глубокого проникновения.
6. Штукатурим и сушим поверхность.
7. Грунтовка стен и наклейка новых обоев. Клей нужен с антигрибковыми свойствами влагостойкий.

Блок: 15/22 | Кол-во символов: 1098
Источник: https://nadezhnostroj.ru/stroymaterialyi/otdelochnyie-materialyi/antigribkovoe-sredstvo-dlya-obrabotki-sten-i-potolkov-kakoe-vybrat.html

Кол-во блоков: 27 | Общее кол-во символов: 21961
Количество использованных доноров: 6
Информация по каждому донору:

1. http://sovet-ingenera. com/vent/montazh/antigribkovoe-sredstvo-dlya-sten.html: использовано 2 блоков из 8, кол-во символов 7710 (35%)
2. https://nadezhnostroj.ru/stroymaterialyi/otdelochnyie-materialyi/antigribkovoe-sredstvo-dlya-obrabotki-sten-i-potolkov-kakoe-vybrat.html: использовано 5 блоков из 22, кол-во символов 4893 (22%)
3. http://couo.ru/kvartira-i-zagorodnyj-dom/stroitelstvo-i-remont/antigribkovoe-sredstvo-dlya-sten-obyazatelnaya-obrabotka-dlya-vsekh-pomeshchenij.html: использовано 5 блоков из 12, кол-во символов 4208 (19%)
4. https://ZnatokPotolka.ru/chistka-i-uhod/protivogribkovye-sredstva.html: использовано 3 блоков из 6, кол-во символов 3819 (17%)
5. https://otdelkasten.com/pokraska-sten/sredstvo-ot-pleseni-na-stenah: использовано 1 блоков из 10, кол-во символов 108 (0%)
6. https://dezplan.ru/article/top-5-sredstv-ot-pleseni-na-stenah: использовано 3 блоков из 5, кол-во символов 1223 (6%)

Грунтовка для отделки минеральных поверхностей

Любые работы, связанные с отделкой различных поверхностей, требуют подготовительных мероприятий, среди которых ключевую роль играет грунтование. Некоторые считают, что грунтовка является необязательным материалом, на котором можно сэкономить. Однако, специалисты рекомендуют не пропускать этап грунтования – это избавит вас от значительных проблем в дальнейшем, улучшит соединение последующих слоев лакокрасочного покрытия с основанием и защитит поверхность от возможных повреждений.

Зачем нужна грунтовка стен

Первоначально использовать грунтовку стали художники, которым не удавалось положить краски на холст без специального грунта. Обработанная поверхность не только улучшала сцепление краски и поверхности холста, но и придавала основанию картины плотность и однородность. В целом при переносе грунтовки в строительный сегмент ее функции были сохранены. Грунтовка

• Эффективно укрепляет поверхность;
• Связывает остаточную пыль;
• Создает ровную и удобную поверхность для финишной отделки;
• Защищает от грибков и плесени;
• Снижает впитывающую способность.

Практика показывает, что успех при отделке стен на 80% зависит именно от правильно подобранного грунтовочного материала. В случае, если вы решили не использовать грунтовку или неправильно выбрали смесь, появляется высокий риск того, что штукатурка начнет трескаться или вовсе отвалится, а краска отшелушится. Однако, если все сделать правильно, вы сэкономите до 40% отделочных материалов, защитите и укрепите поверхность, легко сможете удалить слои при последующем ремонте, а также сможете быть уверены в долговечности полученного результата.

Грунтовка для минеральной поверхности

Минеральными называют поверхности, изготовленные из кирпича, штукатурки, бетона, шлакоблока, газобетона и т.д. Проще говоря, минеральными поверхностями являются самые распространенные материалы для пола, стен и потолков используемые при строительстве (кроме деревянных строений).

Для защиты и укрепления таких оснований наиболее эффективной считается грунтовка глубокого проникновения, способная пропитать структуру поверхности на максимальную глубину, увеличив сцепление со следующим накладываемым слоем. Как правило, в состав таких грунтовок включены противогрибковые добавки, препятствующие развитию различных видов грибков и плесени.

В случае, когда работать приходится с рыхлой или пористой поверхностью, то рекомендуется использовать так называемые укрепляющие грунтовки. В их состав включены связующие и клеящие компоненты, которые проникая в минеральные составы значительно укрепляют их внешний слой.

Универсальная грунтовка по минеральным поверхностям PRO Primer

При работе с минеральными поверхностями, мы рекомендуем использовать специально разработанную для этого грунтовку – PRO Primer, выпускающуюся под брендом КОМАНДОР. Продукт зарегистрирован в соответствии со всеми отечественными стандартами качества.

PRO Primer – новая водоразбаляемая укрепляющая и санирующая полиакриловая грунтовка глубокого проникновения по минеральным поверхностям для наружных и внутренних работ. В состав данного материала входит нелетучий и невымываемый водой биоцид пролонгированного действия, который активно препятствует развитию грибка и плесени на длительный срок. Это особенно актуально для помещений с повышенной влажностью.

Грунтовка эффективно выравнивает впитывающую способность поверхностей, которые впоследствии будут окрашены водно-дисперсионными красками, благодаря чему, вы сможете сэкономить расход лакокрасочных материалов, используемых при работе с поверхностями.

PRO Primer также применяется в качестве самостоятельного покрытия как пылесвязывающее, укрепляющее и санирующее средство на поверхности бетонных полов под рулонные материалы и укладку плитки и газобетонные блоки под штукатурку для снижения водопоглощения. Если работы проводятся по старым мелящим покрытиям из красок на основе акрилатов, винилацетата и перхлорвиниловых смол, то PRO Primer используется для повышения адгезии новой краски.

Эта экологичная грунтовка применяется как при внутренних работах, так и при внешних и не представляет опасности для жизни человека. Она легко наносится кистью, малярной щеткой или валиком, на сильно впитывающие поверхности грунтовку можно наносить с применением садового распылителя.

Подробные устные и письменные инструкции по использованию грунтовочных материалов КОМАНДОР вы можете получить у наших сотрудников, а также у продавцов-консультантов в магазинах наших дистрибьюторов. Мы надеемся, что наш опыт, советы и рекомендации будут полезны, а итоги отделочных работ будут радовать Вас долгие годы.

Если вы решили купить грунтовку для минеральных поверхностей, рекомендуем ознакомиться со списком магазинов, в которых представлена наша продукция. Обязательно свяжитесь с торговой точкой перед посещением, для уточнения информации, графика работы и наличия товара.

Произошла ошибка при установке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

---

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

---

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

---

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файле cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

(PDF) Роль Common Primer как противогрибкового агента в древесине

Журнал IOSR по экологическим наукам, токсикологии и технологиям пищевых продуктов (IOSR-JESTFT)

e-ISSN: 2319-2402, p- ISSN: 2319-2399.Volume 11, выпуск 3 вер. III (март 2017 г.), PP 96-103

www.iosrjournals.org

DOI: 10.9790 / 2402-11030396103 www.iosrjournals.org 96 | Страница

Роль Common Primer в качестве противогрибкового агента в древесине

Arghyadeep Bhattacharjee1 *, Maitrayee Mondal1, Krishanu Dutta1,

Krittika Rao1

Monmita Bhar2, Nafizul Arhitta 9000, Dr.Аруп Кумар Митра3

1 (аспирант кафедры микробиологии, Колледж Св. Ксавьера, Калькутта, филиал Калькуттского университета,

Индия)

2 (Бакалавриат кафедры микробиологии, Колледж Св. Ксавьера, Калькутта, филиал Калькуттского университета,

Индия)

3 (доцент кафедры микробиологии колледжа Св. Ксавьера, Калькутта, филиал Калькуттского университета

, Индия)

Реферат: Древесина, одно из самых распространенных в мире сырьевых материалов, используемых в человеческое общество для производства

продуктов и энергии, вторичная ксилема сосудистых растений. Древесина обычно состоит из примерно 25% лигнина

, 70% целлюлозных углеводов, примерно 45% целлюлозы и 25% гемицеллюлозы. Лигнин представляет собой сложный фенольный полимер

, который придает деревьям механическую прочность. Физические и химические свойства лигнина

также служат барьером против вторжения вредителей и патогенов. Но некоторые микроорганизмы способны к разложению лигнина

, что является одной из самых больших угроз. К ним относятся бактерии, а также грибки.Поэтому ведется поиск методов

защиты древесины от этих микробов; Взрывобезопасное покрытие древесины химическими консервантами, такими как грунтовки

или воск, окрашивание древесины. В этом исследовании был выбран зараженный образец соснового леса. Выделение грибка из

инфицированной части древесины на КПК и его микроскопическая характеристика показали одно-четырехклеточные конидии, подобные

разветвленных цепочечных структур, напоминающих кладоспориум. Каждая ячейка имела размер приблизительно от 6 до 8 мкм. Почвенная банка

Метод

в стационарных условиях при 37 ° C в течение 6 недель помог определить его биоразлагаемую способность

для свежей древесины Shorea robusta.Значительное снижение веса свежей древесины, зараженной изолятами, составило

, что подтвердило способность изолята разлагать древесину. Этот метод был повторен для того же образца древесины

, покрытого грунтовкой, с использованием того же изолята, который подтвердил способность изолята разрушать грунтовку. Биоразлагаемый ферментный анализ

изолята был проведен с использованием вератрилового спирта и показал присутствие лигнинпероксидазы

, которая, возможно, способствовала его способности разлагать древесину.Изоляты обладают не только лигнинолитической активностью

, но также обладают целлюлолитической (эндоглюканазной) активностью. Таким образом, грунтовки подвержены микробной деградации, а

нельзя использовать в качестве защитного средства для древесины, и следует искать альтернативы. Хотя эти праймеры

при использовании на других субстратах, после использования могут быть подвергнуты биологическому восстановлению с использованием этого изолята.

Ключевые слова: грибы, гемицеллюлоза, эндоглюканаза, праймеры, ксилема, воск

I. Введение

Древесина имеет долгую историю использования в качестве топлива, которая продолжается и по сей день, в основном в сельских районах мира

.Новое жилищное строительство во многих частях мира сегодня обычно строится из деревянных конструкций

. Дерево всегда широко использовалось для изготовления мебели. Дальнейшие разработки включают применение нового клея лигнина

, перерабатываемую пищевую упаковку, применение для замены резиновых шин, антибактериальные медицинские агенты,

и производство высокопрочных тканей или композитов. Древесина и другие лигноцеллюлозные материалы

образуются из трех основных полимерных компонентов: целлюлозы, лигнина и гемицеллюлоз.Но главная угроза заключается в том, что древесина

разлагается различными биологическими агентами, включая грибки, бактерии и насекомые.

Дереворазрушающие грибы являются наиболее частыми биоразлагающими веществами для бревен, древесины и изделий из дерева. Гнилая древесина имеет меньшую плотность, механические свойства

хуже, а ее физические свойства меняются индивидуально в зависимости от вида гнили

(коричневая, белая или мягкая). Грибы колонизируют древесину и разрушают компоненты клеточной стенки, образуя коричневую, мягкую или белую гниль.

Грибы бурой гнили, которые разрушают в основном полисахаридные компоненты древесины, оставляют лигниновый каркас.

Грибы белой гнили могут разрушать все компоненты клеточной стенки [1]. Химический состав (включая факторы окружающей среды

, такие как активность воды, температура и тип среды) и физическая структура (т. Е. Распределение трахеид и ямок

) ресурса определяют проникновение древесно-гниющего гриба.

Метод почвенной банки используется для определения скорости грибковой деградации древесины [2]. Ceriporiopsis subvermispora — это

, один из лучших примеров того, как селективный деструктор лигнина производит окислительные ферменты во время биодеградации древесины

. Mn-зависимая пероксидаза (MnP) является преобладающим ферментом, за которым следует лакказа.

Эндоглюканаза играет важную роль в разложении целлюлозы, поскольку она гидролизует глюкозидные связи, постепенно расщепляя

глюкозидных остатков и приводя к снижению образования сахара [3].

Анализ генов противогрибковой устойчивости Candida albicans и Candida glabrata с использованием секвенирования нового поколения

Абстрактные

Введение / Цели

В последние годы сообщалось об увеличении числа устойчивых к противогрибковым препаратам штаммов Candida . Целью этого исследования было обнаружение мутаций в генах устойчивости азолустойчивых, эхинокандин-устойчивых или мультирезистентных штаммов с использованием технологии секвенирования нового поколения, которая позволяет анализировать множественные механизмы устойчивости в условиях высокой производительности.

Методы

Были исследованы 40 клинических изолятов Candida (16 C . albicans и 24 C . glabrata штаммов) с МИК для азолов и эхинокандинов выше клинической точки разрыва EUCAST. Гены ERG11 , ERG3 , TAC1 и GSC1 ( FKS1 ) в C . albicans , а также ERG11 , CgPDR1 , FKS1 и FKS2 в C .Были секвенированы glabrata .

Результаты

Было идентифицировано 54 различных миссенс-мутации, о 13 из которых ранее не сообщалось. У всех девяти устойчивых к эхинокандину изолятов Candida были обнаружены мутации в горячих точках (HS) FKS1 , FKS2 или GSC1 . В ERG3 два гомозиготных преждевременных стоп-кодона были идентифицированы в двух высокоазолустойчивых и умеренно эхинокандинорезистентных C . albicans штаммов. Семь точечных мутаций в ERG11 были определены в азолустойчивом C . albicans , тогда как азолустойчивый C . glabrata , мутаций ERG11 не обнаружено. У 10 из 13 азолустойчивый С . glabrata , было подтверждено 12 различных потенциальных мутаций усиления функции в факторе транскрипции CgPDR1 , которые связаны со сверхэкспрессией CDR1 / 2 оттоковых насосов.

Заключение

Это исследование показало, что секвенирование следующего поколения позволяет проводить тщательное исследование большого количества изолятов с меньшими затратами и быстрее, чем обычное секвенирование по Сэнгеру. Ориентация на разные гены устойчивости и большой размер выборки высокоустойчивых штаммов позволяет лучше определять значимость различных мутаций и различать причинные мутации и полиморфизмы.

Образец цитирования: Spettel K, Barousch W, Makristathis A, Zeller I, Nehr M, Selitsch B и др.(2019) Анализ генов противогрибковой устойчивости у Candida albicans и Candida glabrata с использованием секвенирования следующего поколения. PLoS ONE 14 (1): e0210397. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0210397

Редактор: Джой Стертевант, Университет штата Луизиана, США

Поступила: 8 ноября 2018 г .; Одобрена: 21 декабря 2018 г .; Опубликовано: 10 января 2019 г.

Авторские права: © 2019 Spettel et al.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Доступность данных: Все соответствующие данные находятся в рукописи и ее файлах с вспомогательной информацией.

Финансирование: Работа была поддержана грантом Pfizer Austria. Спонсор не участвовал в разработке исследования, анализе данных и подготовке рукописи, а также в принятии решения о публикации. Чистое вещество микафунгин предоставлено компанией Astellas GmbH, Австрия. BW получила грант от Pfizer и входила в состав бюро спикеров Pfizer, Merck Sharpe & Dohme, Basilea, Gilead и Astellas.

Конкурирующие интересы: Автор BW получил стипендию и гонорары в качестве судьи от компаний Pfizer и Astellas. Она также является членом консультативного совета Merck Sharp & Dohme Austria и работала в бюро спикеров Basilea and Gilead. Остальные авторы не заявляют о конфликте интересов.Это не влияет на нашу приверженность политике PLOS ONE в отношении обмена данными и материалами.

Введение

Candida spp. превратился в важный патоген, вызывающий инфекции кровотока, связанные с высокой смертностью. С . albicans и менее восприимчивые C . glabrata — наиболее частые виды, вызывающие кандидемию и кандидоз [1, 2]. Эхинокандины и азолы играют важную роль в лечении инвазивного кандидоза.В последние годы все чаще появляются сообщения о изолятах Candida с приобретенной устойчивостью к азолам и эхинокандинам [3, 4]. Следовательно, тестирование на чувствительность к противогрибковым препаратам и выявление мутаций в генах устойчивости становятся все более важными для выявления устойчивости к противогрибковым препаратам и определения основных механизмов устойчивости.

Эхинокандины неконкурентно ингибируют гликозилтрансферазу 1,3-β-D-глюкансинтазу ( FKS ). Этот фермент отвечает за биосинтез олигосахарида 1,3-β-D-глюкана, важного структурного компонента клеточной стенки грибов [5].Сниженная восприимчивость к эхинокандинам связана с целевыми мутациями в горячих точках (HS) белков Fks, которые представляют собой предполагаемый связывающий домен эхинокандинов. Точечные мутации в этих областях могут снижать сродство эхинокандинов к 1,3-β-D-глюкансинтазе [3, 6, 7].

Фармакологической мишенью азолов является фермент 14-α-деметилаза (кодируется ERG11 ), важный фермент в биосинтезе эргостерола. Приобретенная устойчивость к азолам может быть вызвана несколькими механизмами.Мутации фармакологической мишени способны изменить структуру фермента и могут привести к снижению аффинности связывания азолов с Erg11p [8, 9]. Часто оттокные насосы снижают внутриклеточное накопление азолов. Повышенный отток основан на сверхэкспрессии CDR1, /, CDR2, (устойчивость к кандидозным лекарственным средствам) и MDR1, (множественная лекарственная устойчивость). Мутации с усилением функции в факторах транскрипции TAC1 и CgPDR1 могут приводить к более высокой экспрессии генов насосов оттока лекарств [10–12].

Мутации с потерей функции в ферменте Erg3p — еще один механизм устойчивости к азолам. Помимо ингибирования Erg11p, азолы вызывают обходной метаболизм, приводящий к накоплению токсичных концентраций 14α-метил-3,6-диола. Этот метаболит блокирует рост грибков. Мутации потери функции в ERG3 ингибируют превращение 14α-метилфекостерола в токсичный 14α-метил-3,6-диол, тем самым снижая эффективность азола. Кроме того, предшественник 14α-метилфекостерола можно использовать вместо эргостерола [13, 14].

Целью данного исследования было изучение клинических изолятов C . albicans и C . glabrata , демонстрирующая устойчивость либо к эхинокандину, либо к азолу, либо к обоим in vitro , и для корреляции устойчивых фенотипов с описанными мутациями в генах устойчивости.

Несмотря на получение большого количества данных, полногеномное секвенирование имеет серьезные недостатки, такие как низкий уровень охвата и высокая нагрузка на анализ данных. Секвенирование по Сэнгеру также не подходит из-за трудоемкости процесса и высоких затрат на секвенированную основу.Конструкция целевого повторного секвенирования предлагает множество преимуществ по сравнению с традиционными подходами к секвенированию для параллельного секвенирования большого количества изолятов, таких как более высокая надежность, быстрый процесс секвенирования и более управляемый анализ данных. Секвенирование следующего поколения (NGS) — очень эффективный инструмент для изучения набора генов, которые, как известно, участвуют в устойчивости к противогрибковым препаратам, во всеобъемлющем наборе штаммов. Таким образом, NGS, основанный на дизайне целевого повторного секвенирования, был использован для исследования основных механизмов резистентности в наших клинических изолятах.

Мы секвенировали гены, участвующие в устойчивости к эхинокандину ( GSC1 в C . albicans и FKS1 и FKS2 в C . glabrata) и гены, участвующие в устойчивости к азолам TAC1 и ERG3 в C . albicans и ERG11 и CgPDR1 в C . глабрата) . Целью этого исследования было не только выявление установленных, но и выявление новых точечных мутаций, связанных с эхинокандином или устойчивостью к азолам в описанных генах устойчивости.

Методы

Отбор проб и определение чувствительности к противогрибковым препаратам

Сорок изолятов, полученных из таких образцов, как мазки (4), стерильные жидкости (8), посевы крови (12), центральный венозный катетер (1), а также моча (3), кал (4), мокрота (1) а также не указано (7) из различных центров Австрии и Германии. Кроме того, чувствительны штаммы ATCC

и ATCC Y33.90 для C . glabrata и ATCC, ATCC 10231, а также азолустойчивый ATCC 64124 для C . albicans были включены в качестве контролей для подтверждения процесса секвенирования. Для всех штаммов и C был проведен тест на чувствительность к противогрибковым препаратам с использованием метода микроразведения в бульоне. парапсилоз ATCC 22019 и C . krusei ATCC 6258 в качестве контрольных штаммов, как описано Европейским комитетом по тестированию чувствительности к противомикробным препаратам (EUCAST E.DEF 7.3, декабрь 2015 г.) [15]. Минимальные ингибирующие концентрации (МПК) были определены для анидулафунгина, микафунгина и каспофунгина, а также для флуконазола, позаконазола, вориконазола, итраконазола и изавуконазола.Штаммы с МИК при разведении от одного до двух раз выше клинической точки прерывания для эхинокандинов были классифицированы как пограничные с эхинокандинорезистентностью. Изоляты с множественной устойчивостью были определены как устойчивые ко всем протестированным эхинокандинам и азолам.

Экстракция ДНК

Благодаря лучшим количественным и качественным результатам по сравнению с коммерческими наборами для экстракции ДНК, был использован модифицированный метод на основе хлороформа SDS CTAB [16]. Экстракцию ДНК проводили из 24-часовой культуры Candida на агаре Сабуро с декстрозой (SAB).Механический лизис проводили с использованием сфер кремнезема диаметром 1 мм с добавлением детергентов SDS (додецилсульфат натрия) и CTAB (бромид цетилтриметиламмония), а также протеиназы K (Qiagen, Венло, Нидерланды). После добавления хлороформ-изоамиловый спирт 24: 1 водорастворимый полярный слой переносили в новую пробирку с последующим осаждением ацетатом аммония и изопропанолом и затем промывали этанолом. Затем высушенную на воздухе ДНК ресуспендировали в 10 мМ буфере Tris-EDTA. После экстракции количество ДНК определяли с помощью Qubit 2.0 с помощью набора dsDNA HS (Life technologies, Карлсбад, Калифорния) и спектрофотометра NanoDrop 2000c (Thermo Scientific, Уолтем, Массачусетс). Кроме того, отношения A260 / 280 и A260 / 230 использовали для оценки чистоты ДНК.

Секвенирование нового поколения и подготовка библиотеки

Секвенирование проводили с использованием целевого дизайна повторного секвенирования на платформе MiSeq (Illumina, Сан-Диего, Калифорния). Анализ последовательности был выполнен для всей последовательности гена ERG11 и ERG3 , областей HS FKS1 , FKS2 и GSC1 , а также соответствующих областей TAC1 и CgPDR1 (Таблица 1 ).Секвенирование ERG11 и ERG3 было достигнуто с использованием перекрывающихся праймеров и последующей сборки. Секвенирование ампликонов было основано на протоколе 16s, как описано Illumina [17]. ПЦР 1 выполняли с локус-специфическими праймерами с дополнительной выступающей последовательностью, которая является обязательной для секвенирования с помощью технологии Illumina. Четыре из 26 пар праймеров, опубликованных Garnaud et al. были недавно разработаны Primer3 Tool из-за образования шпилек и димеров праймеров (таблицы S1 и S2) [18, 19].Амплификацию библиотеки проводили с использованием набора KAPA HiFi Hot Start Ready Mix (Kapa Biosystems, Wilmington, Massachusetts), высокоточной полимеразы с активностью корректуры, которая хорошо подходит для производства библиотек NGS [20]. К смеси для ПЦР добавляли 12,5 нг геномной ДНК. После этого были объединены амплифицированные продукты ПЦР каждого изолята. Этапы стирки были основаны на Ampure Beads (Beckman Coulter, Brea, California). Затем была проведена индексная ПЦР для маркировки ампликонов для идентификации различных изолятов после объединения.Количественное определение ДНК продуктов ПЦР проводили с использованием Qubit 2.0 с помощью набора dsDNA HS (Life technologies, Карлсбад, Калифорния). ДНК разводили до концентрации 8 пМ для секвенирования на V2-Flowcell 2×250 пар оснований (Illumina, Сан-Диего, Калифорния), и все изоляты объединяли. Библиотеку ДНК денатурировали согласно протоколу [17]. Для контроля качества в библиотеку добавляли 5% PhiX DNA.

Биоинформатический анализ

Качество прогона NGS проверяли с помощью программного обеспечения FASTQC 0.11.4 [21]. Удаление некачественных оснований проводилось с помощью программы Trimmomatic-0.35 [22]. Этот инструмент также удалял все чтения, длина которых не превышала 90bp. Кроме того, первые 24 п.н. были удалены, чтобы исключить последовательности праймеров. Чтения собирались с помощью Bowtie2-2.2.7 [23]. Впоследствии было выполнено выравнивание по эталонной последовательности. Штаммы SC5314 для C . albicans и CBS138 для C . glabrata использовали в качестве контрольных последовательностей.Последовательности генов были загружены с сайта www.candidagenome.org [24]. Для определения вариантов из эталонной последовательности использовались Samtools 0.1.19 и VarScan.v2.3.9 [25]. После этого SnpEff 4.270 использовали для обнаружения изменений, вызывающих аминокислотные замены. Наконец, была проведена визуальная проверка мутаций в файлах сборки, чтобы исключить варианты смещения. В таблице 2 показаны источники эталонных последовательностей. Последовательности изолятов депонированы в базе данных BioProject под регистрационным номером PRJNA510782.

Результаты

Микроразведение EUCAST

Среди 19 С . albicans изолятов, два из которых были чувствительными контрольными штаммами, семь были устойчивы к азолам, шесть были устойчивы к эхинокандину, два были устойчивы к пограничным эхинокандинам и два были устойчивы ко всем тестируемым эхинокандинам и азолам и были классифицированы как мультирезистентные изоляты (Таблица 3 ). Среди 26 C . glabrata, изолятов, 13 из которых были устойчивы к тестируемым азолам, а три — к тестируемым эхинокандинам.Кроме того, два изолята имели пограничную устойчивость к эхинокандину, а шесть — мультирезистентность. Каждый изолят, устойчивый к азолам, демонстрировал полную перекрестную устойчивость против всех тестируемых азолов со стабильно высокими значениями MIC. В случае эхинокандинов, за исключением изолята Cg41, все штаммы показали полную перекрестную резистентность к эхинокандинам. Штамм Cg41 показал высокие значения МИК для анидулафунгина и каспофунгина, но был чувствителен к микафунгину со значением МИК 0,016 мг / л. В таблицах 3 и 4 показаны все данные MIC.

Проверка процесса секвенирования

Для подтверждения процесса секвенирования были секвенированы различные контрольные штаммы, и не было обнаружено никаких расхождений с опубликованными последовательностями. Оценка качества Q30 составила 87%, а общее количество прочтений составило 11,7 миллиона. Число считываний каждого изолята составляло от 250 000 до 400 000. Минимальное и максимальное среднее покрытие генов составило 2250х и 32000х соответственно. Данные NGS выявили наличие гетерозиготных мутаций в C . albicans с вариантом (частотой) примерно в 50% прочтений (48,2–51,7%). Для гомозиготных мутаций около 100% (98,6–100%) считываний показали наличие варианта. Как C . glabrata гаплоидный, варианты чтения этого вида имели частоту примерно 100% (97,9–100%). В изоляте Cg28 мы обнаружили две мутации с частотой 26% и 73%, которые могли быть вызваны субпопуляцией. Это наблюдение было подтверждено секвенированием по Сэнгеру.Частоты мутаций всех других изолятов указывают на то, что они клональные и не имеют субпопуляций.

Не причинные полиморфизмы

Мутации, присутствующие как в чувствительных, так и в устойчивых изолятах, были определены как полиморфизмы, не являющиеся причиной развития устойчивости к противогрибковым препаратам. Из обнаруженных 54 миссенс-мутаций семь уже были определены как полиморфизмы, а четыре мутации были выявлены у чувствительных изолятов и, таким образом, были классифицированы как полиморфизмы. Миссенс-мутации S935L [18] и S941P [18] в TAC1 уже были описаны как полиморфизмы.Гетерозиготная мутация S937L также присутствовала в двух азолочувствительных изолятах. Эта мутация не описана, и нельзя исключать причинность в гомозиготных случаях. Однако в гетерозиготных случаях эта мутация не вызывает устойчивости к азолам. В ERG11 мутации D116E [18], K128T [26] и E266D [26] наблюдались как гомозиготные, так и гетерозиготные в восприимчивых штаммах и уже были описаны как не причинные мутации. Мутация V488I в ERG11 была описана Manastir et al. Как причинная., и как не причинно-следственные, согласно Wang et al. [26, 27]. Мы нашли эту мутацию гомозиготной в штамме, чувствительном к азолам, что подтверждает исследование, опубликованное Wang et al. В ERG3 мы обнаружили ранее неизвестные гомозиготные мутации A138T, P181A и гетерозиготный P267S, которые также могли быть обнаружены у чувствительных изолятов в нашем исследовании.

Мутации потенциально причинной устойчивости

Во всех штаммах было обнаружено 87 различных молчащих мутаций по сравнению с эталонными последовательностями штаммов CBS138 и SC5314.Было обнаружено пятьдесят различных миссенс-мутаций, а также делеция в рамке считывания и два преждевременных стоп-кодона. Все мутации, включая молчащие мутации, перечислены в дополнительных данных (таблица S3). Мы определили 43 миссенс-мутации как потенциально причинные, поскольку они присутствовали только в устойчивых изолятах [28]. 30 из них уже были описаны как причины приобретения устойчивости. В нашем исследовании впервые сообщается о 13 потенциально причинных мутациях. В таблицах 3, 4, 5 и 6 показаны потенциально причинные мутации соответствующих генов.Перечислены только миссенс-мутации, которые классифицируются как потенциально причинные.

В С . albicans , все семь устойчивых к азолам штаммов показали мутацию в гене-мишени ERG11 . В ERG3 и TAC1 могут быть обнаружены четыре и пять потенциально причинных мутаций соответственно. Для сравнения, мутации в ERG11 не могут быть обнаружены в C . glabrata , но 10 из 13 устойчивых к азолам штаммов показали мутацию в CgPDR1 .Мутации GSC1 или FKS были обнаружены во всех изолятах, устойчивых к эхинокандину. Мутации FKS не были обнаружены в четырех пограничных эхинокандин-резистентных C . albicans и C . glabrata изолятов. Все восемь изолятов с множественной устойчивостью имели по крайней мере одну мутацию, которая могла приводить к устойчивости к азолам или эхинокандину (таблица 5).

Мутации в азолустойчивых

C . albicans и C . глабрата

Семь потенциально причинных мутаций F72L [29], Y132H [29], K143R [27, 30], E208K, V437I [29], G450E [29] и T525I были обнаружены в ERG11 в C . Альбиканс . Изолят Ca9 показал две гетерозиготные мутации E208K и T525I, которые до сих пор не описаны. В ERG3 мы обнаружили семь потенциально причинных мутаций A168V [14], S191P, G261E, T329S [14] и A353T [14]. Мутация A353T показана как гомозиготная замена в штамме, устойчивом к азолам, и как гетерозиготная мутация в чувствительных к азолам изолятах Ca13 и Ca14. В TAC1 показаны пять потенциально причинных мутаций G649D, N740D [31], F974L, N977D [10, 32] и G980E [32]. (Таблица 5).

В отличие от C . albicans , ни один из азолустойчивых C . Изоляты glabrata показали какие-либо мутации в ERG11 . В CgPDR1 наблюдали 10 различных мутаций. h388D еще не описан. В этих положениях описаны мутации L291P, G346D, G346A, G348S, G348D и Y372H, но с разными аминокислотными заменами [33, 34].Мутации D876Y, G1079R и G1079V были описаны Ferrari et al. Как причинные. [33]. Никаких мутаций в секвенированных областях CgPDR1 не было обнаружено в изолятах Cg27, Cg32 и Cg39 (таблица 6).

Мутации устойчивых к эхинокандину

C . albicans и C . глабрата

Всего шесть устойчивых к эхинокандину C . albicans , в целевом гене GSC1 обнаружена мутация.Все мутации были обнаружены в GSC1, HS 1 или в его непосредственной близости. Наблюдались три мутации S645P [18], F641C, F641S [7, 35], P649H [36–38] и M696V. Для изолятов Ca13 и Ca16 мутации F641C и S645P, соответственно, показаны как гетерозиготные. Изолят Ca14 показывает мутацию F641S, которая была гомозиготной в этом штамме и ассоциировалась с более высоким MIC, чем для изолята Ca13. Изолят Ca18 показал две гомозиготные мутации P649H и M696V, которые расположены в HS 1 и 90 нуклеотидах ниже HS 1 соответственно.Пограничные эхинокандин-устойчивые изоляты Ca19 и Ca21, которые демонстрируют MIC микафунгина 0,064 мг / л и 0,032 мг / л соответственно, не имели мутаций в GSC1 . Наши штаммы не показали миссенс-мутаций в HS-регионах GSC1 генов, когда МИК была ниже 0,125 мг / л для анидулафунгина и каспофунгина и ниже 0,064 мг / л для микафунгина (таблица 5).

В эхинокандин-резистентных изолятах C . glabrata мы идентифицировали мутации S663P [18, 39, 40], F659del [41–43] в FKS2 , но не обнаружили мутаций в FKS1 . Изолят Cg51 показал очень высокие значения MIC для анидулафунгина (2 мг / л), каспофунгина (> 16 мг / л) и микафунгина (4 мг / л). В этом изоляте обнаружена делеция F659del в FKS2 HS 1. Пограничные эхинокандин-устойчивые изоляты Cg42 и Cg43 не показали мутаций в FKS1 и FKS2 . В этих изолятах МИК для анидулафунгина составляла двукратное разведение выше точки разрыва, а для микафунгина — точно в точке разрыва (таблица 6).

Мутации в мультирезистентности

C . albicans и C . глабрата

Мультистойкий C . Изоляты albicans и Са12 и Са22 показали гомозиготные преждевременные стоп-кодоны Y325 * и Y190 * в ERG3 соответственно. В обоих областях GSC1 и HS не было обнаружено мутаций, несмотря на повышенные значения MIC для эхинокандина (таблица 5).

В шестиступенчатой ​​стойке С . glabrata , пять мутаций подтверждены в генах FKS . В FKS1 мутации K1323E и F625S [18] могут быть обнаружены в изолятах Cg29 и Cg46 соответственно. В FKS2 мутации F659S и S663P могут быть обнаружены в изолятах Cg50 и Cg47 соответственно. Для трех из шести изолятов с множественной устойчивостью потенциально причинные мутации были обнаружены в CgPDR1 : W297R [33, 34] для изолята Cg46, V329F [44] для изолята Cg49 и G1088E для изолята Cg50. Только изоляты Cg46 и Cg50 показали мутацию в генах FKS и CgPDR1 .Изолят Cg49, который показал умеренно повышенные значения MIC для эхинокандинов, не показал мутаций в FKS1 и FKS2 (таблица 6).

Обсуждение

NGS, как ранее было показано, успешно обнаруживает мутации противогрибковой устойчивости у клинически важных видов Candida [18]. При целевом пересеквенировании можно одновременно изучать гены устойчивости большого числа изолятов. По сравнению с полногеномным секвенированием (WGS) этот подход снижает затраты на секвенирование, генерирует более управляемые необработанные данные и снижает нагрузку на анализ данных. Стоимость исследования 50 изолятов с использованием WGS составит 16 000 евро. В этом исследовании затраты составили всего 3000 евро. Таким образом, затраты на секвенирование могут быть сокращены как минимум в 5 раз благодаря целевому дизайну повторного секвенирования. Кроме того, целевое повторное упорядочение приводит к гораздо более высоким уровням охвата, чем те, которые достигаются с помощью WGS. Таким образом, этот метод очень надежен и позволяет обнаруживать редко встречающиеся варианты, например устойчивые субпопуляции. Кроме того, секвенирование выполняется намного быстрее, чем при использовании обычного метода Сэнгера.Процесс секвенирования в нашем проекте занял около 22 часов для 51 штамма по 13 ампликонов в каждом. Для сравнения, при использовании секвенирования по Сэнгеру на 4-капиллярном секвенаторе время анализа составило бы около четырех недель. Секвенирование по Сэнгеру дороже, и анализ этих обширных данных о секвенировании потребует много времени.

В этом исследовании было исследовано большое количество фенотипически устойчивых изолятов, полученных из различных центров в Австрии и Германии, с целью выявления мутаций, вызывающих устойчивость, и изучения того, имеют ли штаммы, отнесенные к категории устойчивых с использованием клинических контрольных точек, уже описанные или до сих пор неизвестные мутации устойчивости. .Благодаря высокопроизводительному секвенированию мы смогли обнаружить как установленные, так и новые мутации устойчивости в большой выборке устойчивых к противогрибковым препаратам штаммов.

Сопротивление азолам

Мутации-мишени в ERG11 были обнаружены только в C . Альбиканс . В каждом изоляте, устойчивом к азолам, в этом гене были обнаружены потенциально причинные мутации. Пять из этих мутаций уже были описаны как индуцирующие устойчивость на основании предполагаемого механизма, согласно которому изменение последовательности белка приводит к снижению сродства связывания азолов [27, 29, 30].В отличие от C . albicans , не было мутаций в ERG11 ни в одном из 16 азолустойчивых C . glabrata штамма. Отсутствие мутации ERG11 у азолустойчивого C . glabrata уже описан [45, 46]. Это говорит о том, что наши результаты согласуются с другими исследованиями, и мутации ERG11 не влияют на устойчивость к азолам в нашем C . glabrata изолятов.

CgPDR1 , по-видимому, является более важной причиной устойчивости к азолам в C . glabrata . CgPDR1 представляет собой фактор транскрипции, который индуцирует экспрессию генов эффлюксных насосов CgCDR1 / 2p и CgSNQ2p. В CgPDR1 до сих пор описано 67 мутаций с усилением функции [33]. Эти мутации были связаны с присущей высокой экспрессией оттокных насосов и, в частности, были связаны с резистентностью к азолам [12]. В нашем исследовании было обнаружено 13 потенциально причинных мутаций.В 10 из 13 азолустойчивых штаммов была обнаружена по крайней мере одна мутация в CgPDR1 . Известно одиннадцать из этих мутаций, остальные мутации h388D и G1088E обнаружены впервые. Tsai et al. описали домены CgPDR1 на основании гомологии между S . cerevisiae PDR1 и C . glabrata CgPDR1 [34]. ДНК-связывающий домен расположен на остатках 26–59, регуляторный домен — на 322–465, а домен активации — на 903–1107. Они обнаружили четыре мутации в остатках 280–391. Девять из 13 мутаций в CgPDR1 , обнаруженных в нашем исследовании, были расположены на остатках 288–372, рядом с предполагаемым регуляторным доменом. Соответственно, эти мутации могут быть связаны с измененной экспрессией оттокных насосов. В предполагаемом домене активации были идентифицированы три мутации (G1079R, G1079V и G1088E). Таким образом, мутации в этих областях могут быть связаны со сверхэкспрессией насосов оттока лекарств. Чтобы подтвердить влияние этих мутаций, в будущих исследованиях может быть проведен анализ уровней экспрессии эффлюксных насосов.

Мутации с усилением функции в факторе транскрипции TAC1 приводят к изначально повышенной экспрессии оттокных насосов CDR1p и CDR2p и были связаны с резистентностью к азолам [47]. В нашем исследовании можно идентифицировать пять потенциально причинных мутаций в секвенированных областях TAC1 . Из них G649D и F974L до сих пор не описаны. Однако, поскольку ни один из секвенированных штаммов не показал мутаций только в TAC1 , важность этого механизма не могла быть прояснена в этом исследовании.

Мы также смогли обнаружить мутации с потерей функции в ERG3 , которые предположительно приводят к устойчивости к азолам в сочетании с умеренной устойчивостью к эхинокандину и описаны в разделе о множественной устойчивости.

Устойчивость к эхинокандину

В нашем исследовании мутации в GSC1 , FKS1 и FKS2 были обнаружены во всех изолятах, показывающих увеличение значений MIC (> 2 раза разведения выше CB), что было связано с полной перекрестной резистентностью, за исключением один С . glabrata изолят. В этих изолятах было обнаружено несколько миссенс-мутаций. Для изолятов с умеренно повышенными МИК, то есть с разведениями от одного до двух выше клинической точки разрыва и классифицированных как погранично-устойчивые, не было обнаружено ни перекрестной устойчивости к эхинокандинам, ни мутаций FKS .

В нашем исследовании единичная мутация в HS-регионах генов-мишеней привела к полной перекрестной устойчивости в классе эхинокандинов и наблюдалась как для гетерозиготных, так и для гомозиготных мутаций. В отличие от этого наблюдения, модель C . glabrata Изолят Cg41 показал изолированную чувствительность к микафунгину (МИК 0,016 мг / л), тогда как анидулафунгин показал повышенный МИК 0,25 мг / л и каспофунгин 2 мг / л. В этом изоляте была обнаружена уже известная мутация P667T в FKS2 HS 1. Об отсутствии перекрестной резистентности уже сообщалось [3, 48]. Это представляет особый интерес, поскольку обсуждается, что анидулафунгин служит суррогатным маркером для всех эхинокандинов [49, 50].Однако в нашем случае микафунгин мог быть важной терапевтической альтернативой. Эти результаты показывают, что изменения в конформации 1,3-β-D-глюкансинтазы могут приводить к неполной перекрестной резистентности в классе эхинокандинов в зависимости от конкретной структуры соответствующего агента. Следовательно, тестирование чувствительности каждого эхинокандина кажется предпочтительным, чем использование анидулафунгина в качестве индикатора устойчивости к эхинокандину.

Внешняя локализация некоторых участков предполагаемого трансмембранного белка 1,3-β-D-глюкансинтазы, по-видимому, отражает участки HS [51]. Все наши шесть устойчивых к эхинокандину C . Изоляты albicans показали мутацию в GSC1 HS 1. Мутаций не было обнаружено в HS 2. Следовательно, HS 1, по-видимому, играет более важную роль в развитии устойчивости к эхинокандину у нашего C . albicans штаммов. Модель C . Изолят albicans Са18 показал две гомозиготные мутации в GSC1 . P649H расположен на нижнем конце HS 1, а M696V расположен на 90 нуклеотидов ниже HS 1 и на 30 нуклеотидов выше HS 3, что описано Johnson et al.[51]. Таким образом, можно предположить, что в редких случаях другие участки HS могут быть вовлечены в приобретение устойчивости к эхинокандину.

Из шести устойчивых к эхинокандину C . glabrata , четыре показали мутацию в FKS2 HS 1. Мультирезистентные изоляты Cg29 и Cg48 показали мутацию K1323E в FKS1 , что на пять аминокислот выше HS 2. Эти изоляты показали минимальное повышение МИК. значения являются только однократным разведением выше клинической точки останова. В этих случаях мутация вне HS была связана с минимально повышенными значениями MIC.

В изоляте Cg51 была обнаружена делеция F659del в рамке считывания в FKS2 HS 1. Этот штамм показал значения МИК в диапазоне устойчивости к анидулафунгину (2 мг / л), каспофунгину (> 16 мг / л) и микафунгина (4 мг / л). Эта мутация уже была описана как связанная с очень высокими, а также с низкими значениями MIC, что может быть вызвано разной скоростью экспрессии [41–43].

Мульти-сопротивление

Из 40 клинических штаммов два C . albicans и шесть C . glabrata оказались мультиустойчивыми. В C . glabrata , только два изолята показали мутации как в FKS1 , так и в CgpDR1 , что объясняет устойчивость к азолам и эхинокандину. В остальных четырех изолятах могла быть обнаружена только мутация либо в генах FKS , либо в генах CgPDR1 .

Мультистойкий C . albicans Штаммы Са12 и Са22 показали только мутацию потери функции в ERG3 из-за преждевременных стоп-кодонов Y325 * и Y190 *, что предположительно приводит к устойчивости к азолам и умеренной устойчивости к эхинокандинам без проявления мутаций FKS . Хотя молекулярный механизм умеренной устойчивости к эхинокандину не ясен, это наблюдение согласуется с данными Rybak et al. [52]. Таким образом, не следует упускать из виду важность мутаций потери функции ERG3 для развития устойчивости.

Тот факт, что потенциально причинная мутация устойчивости к азолам и эхинокандину присутствует не в каждом устойчивом изоляте, предполагает участие различных, до сих пор неизвестных, механизмов устойчивости.

Заключение

NGS оказался подходящим методом для обнаружения мутаций устойчивости.Этот метод позволяет получить более тщательный, экономичный и гораздо более быстрый метод секвенирования, чем обычное секвенирование по Сэнгеру. Кроме того, целевой дизайн повторного упорядочения позволяет исследовать больший размер выборки, чем WGS. В сочетании с фенотипическим анализом паттернов устойчивости можно сделать выводы о лежащих в основе молекулярных механизмах.

Мы исследовали 40 резистентных клинических C . albicans и C . glabrata изолятов и обнаружил 30 описанных и 13 новых мутаций в шести генах устойчивости.Кроме того, в кодирующих последовательностях была обнаружена высокая частота полиморфизмов. Это наблюдение подчеркивает важность различия между полиморфизмами и причинными мутациями. Это особенно касается устойчивости к азолам, когда несколько механизмов могут приводить к устойчивости и взаимодействовать друг с другом. Как следствие, база данных SNP, которая включает каждый вариант, а также фенотип, будет полезна для различения полиморфизмов и соответствующих мутаций.

В заключение можно подтвердить связь между мутациями в генах FKS и устойчивостью к эхинокандину.Однако приобретение устойчивости к азолам, по-видимому, имеет многофакторные причины. Мутации в ERG11 , по-видимому, играют роль только в C . Альбиканс . В C . glabrata , вместо этого возможна избыточная экспрессия оттока. В C . albicans , гомозиготные ERG3 нонсенс-мутации, по-видимому, связаны с устойчивостью к азолам и умеренно повышенными МПК эхинокандина. Четыре мультистойких C .Изоляты glabrata не выявили основных мутаций устойчивости как к эхинокандину, так и к азолам. Следовательно, есть еще другие клеточные механизмы, которые требуют дальнейших исследований.

Благодарности

Мы выражаем особую благодарность Александру М. Хиршлю за постоянную поддержку и ценные обсуждения.

Список литературы

1. 1. Pfaller MA, Diekema DJ, Gibbs DL, Newell VA, Ellis D, Tullio V et al. Результаты глобального эпиднадзора за противогрибковыми заболеваниями ARTEMIS DISK, 1997–2007 гг .: а 10.5-летний анализ чувствительности видов Candida к флуконазолу и вориконазолу, определяемый стандартизированной дисковой диффузией CLSI. J Clin Microbiol 2010 [цитировано 9 сентября 2016 г.]; 48 (4): 1366–77. Доступно по адресу: URL: https://www. ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2849609/pdf/2117-09.pdf. pmid: 20164282
2. 2. Япар Н. Эпидемиология и факторы риска инвазивного кандидоза. Ther Clin Risk Manag 2014; 10: 95–105. pmid: 24611015
3. 3. Александр Б.Д., Джонсон, доктор медицины, Пфайффер С.Д., Хименес-Ортигоса С., Катания Дж., Букер Р. и др.Повышение устойчивости к эхинокандину у Candida glabrata: клиническая неудача коррелирует с наличием мутаций FKS и повышенными минимальными ингибирующими концентрациями. Clin Infect Dis 2013 [процитировано 4 сентября 2016 года]; 56 (12): 1724–32. Доступно по адресу: URL: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3658363/pdf/cit136.pdf. pmid: 23487382
4. 4. Пфаллер М.А., Мессер С.А., Холлис Р.Дж., Бойкен Л., Тендолкар С., Крёгер Дж. И др. Изменение чувствительности изолятов Candida glabrata к флуконазолу в зависимости от возраста и географического положения пациентов в США в 2001–2007 годах.J Clin Microbiol 2009; 47 (10): 3185–90. pmid: 19656983
5. 5. Деннинг DW, Бромли MJ. Инфекционное заболевание. Как укрепить противогрибковый трубопровод. Наука 2015; 347 (6229): 1414–6. pmid: 25814567
6. 6. Катияр С., Пфаллер М., Эдлинд Т. Клинические изоляты Candida albicans и Candida glabrata, демонстрирующие пониженную чувствительность к эхинокандину. Противомикробные агенты Chemother 2006; 50 (8): 2892–4. pmid: 16870797
7. 7. Балашов С.В., Парк С, Перлин Д.С.Оценка устойчивости Candida albicans к противогрибковому препарату эхинокандин каспофунгину путем профилирования мутаций в FKS1. Противомикробные агенты Chemother 2006; 50 (6): 2058–63. pmid: 16723566
8. 8. Lamb DC, Kelly DE, Schunck W.H., Shyadehi AZ, Akhtar M, Lowe DJ et al. Мутация T315A в стерол 14α-деметилазы Candida albicans вызывает снижение ферментативной активности и устойчивости к флуконазолу за счет снижения сродства. J. Biol. Chem. 1997; 272 (9): 5682–8. pmid:

   78

9. 9. Сюй Ю, Шэн Ф, Чжао Дж, Чен Л, Ли К.Мутации ERG11 и экспрессия генов устойчивости в изолятах Candida albicans, устойчивых к флуконазолу. Arch Microbiol 2015; 197 (9): 1087–93. pmid: 26349561
10. 10. Косте А., Тернер В., Ишер Ф., Моршхаузер Дж., Форче А., Сельмеки А. и др. Мутация в Tac1p, факторе транскрипции, регулирующем CDR1 и CDR2, сочетается с потерей гетерозиготности на хромосоме 5, опосредуя устойчивость к противогрибковым препаратам Candida albicans. Генетика 2006; 172 (4): 2139–56. pmid: 16452151
11. 11.Цай Х. Ф., Крол А. А., Сарти К. Э., Беннет Дж. Candida glabrata PDR1, транскрипционный регулятор сети устойчивости к плейотропным лекарствам, опосредует устойчивость к азолам в клинических изолятах и ​​миниатюрных мутантах. Противомикробные агенты Chemother 2006 [цитировано 10 сентября 2016 г.]; 50 (4): 1384–92. Доступно по адресу: URL: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1426987/pdf/1629-05.pdf. pmid: 16569856
12. 12. Ferrari S, Sanguinetti M, Torelli R, Posteraro B, Sanglard D. Вклад CgPDR1-регулируемых генов в повышенную вирулентность устойчивых к азолам Candida glabrata.PLoS One 2011; 6 (3): e17589. pmid: 21408004
13. 13. Миядзаки Ю., Гебер А., Миядзаки Х., Фальконер Д., Паркинсон Т., Хичкок С. и др. Клонирование, секвенирование, экспрессия и разнообразие аллельных последовательностей ERG3 (ген C-5 стеролдесатуразы) у Candida albicans. Gene 1999; 236 (1): 43–51. pmid: 10433965
14. 14. Morio F, Pagniez F, Lacroix C, Miegeville M, Le Pape P. Аминокислотные замены в стероле-дельта-5,6-десатуразе Candida albicans (Erg3p) придают устойчивость к азолам: характеристика двух новых мутантов с нарушенной вирулентностью.J Antimicrob Chemother 2012; 67 (9): 2131–8. pmid: 22678731
15. 15. М. С. Арендруп, Дж. Гвинея, М. Куэнка-Эстрелла, Дж. Мелетиадис, Дж. У. Мутон, К. Лагроу, С. Дж. Ховард и Подкомитет по тестированию противогрибковой чувствительности (AFST) Европейского комитета ESCMID по тестированию антимикробной чувствительности (EUCAST) *. ОПРЕДЕЛАТЕЛЬНЫЙ ДОКУМЕНТ EUCAST E.DEF 7.3: Метод определения минимального разбавления бульона Ингибирующие концентрации противогрибковых агентов для дрожжей [цитируется 29 августа 2016 г.].http://www.eucast.org/fileadmin/src/media/PDFs/EUCAST_files/AFST/Files/EUCAST_E_Def_7_3_Yeast_testing_definitive.pdf.
16. 16. Умеша С., Манукумар Х.М., Рагхава С. Экспресс-метод выделения геномной ДНК от грибковых патогенов пищевого происхождения. 3 Biotech 2016 [цитировано 18 декабря 2018 г.]; 6 (2): 123. pmid: 28330193
17. 17. Иллюмина. Руководство по подготовке библиотеки метагеномного секвенирования 16S .; 2013 [цитируется 13 августа 2014 г.]. support.illumina.com/documents/documentation/chemistry_documentation/16s/16s-metagenomic-library-prep-guide-15044223-b.pdf.
18. 18. Гарно С., Боттерель Ф., Сертур Н., Бугну М.-Е, Даннауи Е., Ларрат С. и др. Секвенирование следующего поколения позволяет по-новому взглянуть на устойчивость Candida spp. к эхинокандинам и азолам. J Antimicrob Chemother 2015; 70 (9): 2556–65. pmid: 26017039
19. 19. Untergasser A, Cutcutache I, Koressaar T., Ye J, Faircloth BC, Remm M et al. Primer3 — новые возможности и интерфейсы. Nucleic Acids Res 2012 [цитировано 7 января 2017 г.]; 40 (15): e115. Доступно по адресу: URL: https: // www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3424584/pdf/gks596.pdf. pmid: 22730293
20. 20. Перепел М.А., Смит М., Коупленд П., Отто Т.Д., Харрис С.Р., Коннор Т.Р. и др. Рассказ о трех платформах секвенирования следующего поколения: сравнение секвенсоров Ion Torrent, Pacific Biosciences и Illumina MiSeq. BMC Genomics 2012; 13: 341. pmid: 22827831
21. 21. Саймон Эндрюс. FastQC: инструмент контроля качества для данных последовательности с высокой пропускной способностью; 2010 [цитируется 12 сентября 2018 г.]. http: //www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/.
22. 22. Bolger AM, Lohse M, Usadel B. Trimmomatic: гибкий триммер для данных последовательности Illumina. Биоинформатика 2014; 30 (15): 2114–20. pmid: 24695404
23. 23. Лангмид Б, Зальцберг С.Л. Быстрое согласование с ошибками чтения с Bowtie 2. Nat Methods 2012; 9 (4): 357–9. pmid: 22388286
24. 24. Skrzypek MS, Binkley J, Binkley G, Miyasato SR, Simison M, Sherlock G. База данных генома Candida (CGD): включение сборки 22, систематических идентификаторов и визуализации данных высокопроизводительного секвенирования.Nucleic Acids Res 2017; 45 (D1): D592 – D596. pmid: 27738138
25. 25. Koboldt DC, Chen K, Wylie T., Larson DE, McLellan MD, Mardis ER et al. VarScan: обнаружение вариантов при массовом параллельном секвенировании отдельных и объединенных образцов URL: http://varscan.sourceforge.net. Биоинформатика 2009; 25 (17): 2283–5. pmid: 19542151
26. 26. Ван Х, Конг Ф., Соррелл Т.К., Ван Б., МакНиколас П., Пантарат Н. и др. Быстрое обнаружение мутаций гена ERG11 в клинических изолятах Candida albicans с пониженной чувствительностью к флуконазолу путем амплификации по кругу и секвенирования ДНК. BMC Microbiol 2009; 9: 167. pmid: 19682357
27. 27. Манастир Л., Эргон М.С., Ючесой М. Исследование мутаций в гене Erg11 устойчивых к флуконазолу изолятов Candida albicans из турецких больниц. Микозы 2011 г .; 54 (2): 99–104. pmid: 19732347
28. 28. MacArthur DG, Manolio TA, Dimmock DP, Rehm HL, Shendure J, Abecasis GR et al. Руководство по исследованию причинно-следственной связи вариантов последовательностей при заболеваниях человека. Природа 2014; 508 (7497): 469–76. pmid: 24759409
29. 29.Фавр Б., Дидмон М., Райдер Н.С. Множественные замены аминокислот в ланостерин-14альфа-деметилазе способствуют устойчивости к азолам Candida albicans. Микробиология 1999; 145 (Pt 10): 2715–25.
30. 30. Флауэрс С.А., Колон В, Уэйли С.Г., Шулер М.А., Роджерс П.Д. Вклад клинических мутаций в ERG11 в устойчивость к азолам Candida albicans. Антимикробные агенты Chemother 2015; 59 (1): 450–60. pmid: 25385095
31. 31. Siikala E, Rautemaa R, Richardson M, Saxen H, Bowyer P, Sanglard D. Стойкая колонизация Candida albicans и молекулярные механизмы устойчивости к азолам у пациентов с аутоиммунной полиэндокринопатией, кандидозом и эктодермальной дистрофией (APECED). J Antimicrob Chemother 2010; 65 (12): 2505–13. pmid: 20876623
32. 32. Косте А.Т., Криттин Дж., Баузер С., Роде Б., Санглард Д. Функциональный анализ цис- и транс-действующих элементов промотора CDR2 Candida albicans с новой системой промотора-репортера. Eukaryot Cell 2009; 8 (8): 1250–67. pmid: 19561319
33. 33.Ferrari S, Ischer F, Calabrese D, Posteraro B, Sanguinetti M, Fadda G et al. Усиление функциональных мутаций в CgPDR1 Candida glabrata не только опосредует противогрибковую резистентность, но и усиливает вирулентность. PLoS Pathog 2009; 5 (1): e1000268. pmid: 166
34. 34. Цай Х. Ф., Саммонс Л. Р., Чжан Х, Суффис С. Д., Су К., Майерс Т. Г. и др. Микроматричный и молекулярный анализ механизма устойчивости к азолам ротоглоточных изолятов Candida glabrata. Противомикробные агенты Chemother 2010; 54 (8): 3308–17. pmid: 20547810
35. 35. Видерхольд Н.П., Найвар Л.К., Боканегра Р.А., Киркпатрик В.Р., Паттерсон Т.Ф. Повышение дозы каспофунгина при инвазивном кандидозе, вызванном устойчивостью Candida albicans. Противомикробные агенты Chemother 2011; 55 (7): 3254–60. pmid: 21502632
36. 36. Гарсия-Эффрон Г, Катияр С.К., Парк С., Эдлинд ТД, Перлин Д.С. Естественное изменение аминокислоты пролина на аланин в Fks1p при парапсилозе Candida, ортопсилозе Candida и метапсилозе Candida является причиной пониженной чувствительности к эхинокандину.Противомикробные агенты Chemother 2008; 52 (7): 2305–12. pmid: 18443110
37. 37. Desnos-Ollivier M, Bretagne S, Raoux D, Hoinard D, Dromer F, Dannaoui E. Мутации в гене fks1 у Candida albicans, C. tropicalis и C. krusei коррелируют с повышенными МПК каспофунгина, обнаруженными в среде AM3, с использованием метода Европейский комитет по тестированию чувствительности к антибиотикам. Противомикробные агенты Chemother 2008; 52 (9): 3092–8. pmid: 185
38. 38. Дудюк С., Гамарра С., Хименес-Ортигоса С., Леонарделли Ф., Маседо Д., Перлин Д.С. и др.Быстрое обнаружение мутаций FKS1, ответственных за клиническую устойчивость к эхинокандину у Candida albicans. J Clin Microbiol 2015; 53 (7): 2037–41. pmid: 25878347
39. 39. Klotz U, Schmidt D, Willinger B., Steinmann E, Buer J, Rath P-M et al. Устойчивость к эхинокандину и популяционная структура инвазивных изолятов Candida glabrata из двух университетских больниц в Германии и Австрии. Микозы 2016; 59 (5): 312–8. pmid: 26806376
40. 40. Зимбек А.Дж., Икбал Н., Алквист А.М., Фарли М.М., Харрисон Л.Х., Чиллер Т. и др.Мутации FKS и повышенные значения MIC эхинокандина среди изолятов Candida glabrata по результатам популяционного эпиднадзора в США. Противомикробные агенты Chemother 2010; 54 (12): 5042–7. pmid: 20837754
41. 41. Сарая Т., Танабе К., Араки К., Йонетани С., Макино Х., Ватанабе Т. и др. Прорыв в инвазивном лечении Candida glabrata у пациентов, принимающих микафунгин: конверсия нового гена FKS коррелировала с последовательным повышением МПК. J Clin Microbiol 2014; 52 (7): 2709–12. pmid: 24789192
42. 42. Катияр С.К., Аластруэй-Искьердо А., Хили К.Р., Джонсон М.Э., Перлин Д.С., Эдлинд Т.Д.Fks1 и Fks2 функционально избыточны, но по-разному регулируются у Candida glabrata: последствия для устойчивости к эхинокандину. Противомикробные агенты Chemother 2012 [цитировано 4 сентября 2016 г.]; 56 (12): 6304–9. Доступно по адресу: URL: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3497156/pdf/zac6304.pdf. pmid: 23027185
43. 43. Гарсия-Эффрон Г., Ли С., Парк С., Клири Д. Д., Перлин Д. С.. Влияние мутаций FKS1 и FKS2 Candida glabrata на чувствительность к эхинокандину и кинетику 1,3-бета-D-глюкансинтазы: значение для существующей точки разрыва чувствительности.Противомикробные агенты Chemother 2009; 53 (9): 3690–9. pmid: 19546367
44. 44. Хили KR, Zhao Y, Perez WB, Lockhart SR, Sobel JD, Farmakiotis D et al. Преобладающий мутаторный генотип, идентифицированный у грибкового патогена Candida glabrata, способствует развитию множественной лекарственной устойчивости. Nat Commun 2016; 7: 11128. pmid: 27020939
45. 45. Сангинетти М., Постераро Б., Фиори Б., Ранно С., Торелли Р., Фадда Г. Механизмы устойчивости к азолам в клинических изолятах Candida glabrata, собранных во время больничного обследования устойчивости к противогрибковым препаратам.Противомикробные агенты Chemother 2005 [цитировано 6 ноября 2016 г.]; 49 (2): 668–79. pmid: 15673750
46. 46. душ Сантуш Силва Даниэлли Беральдо, Родригес LMC, Алмейда AAd, Пирес де Оливейра Келли Мари, Grisolia AB. Новые точечные мутации в гене ERG11 в клинических изолятах видов Candida, устойчивых к азолам. Mem Inst Oswaldo Cruz 2016; 111 (3): 192–9. pmid: 26982177
47. 47. Coste AT, Karababa M, Ischer F, Bille J, Sanglard D. TAC1, активатор транскрипции генов CDR, представляет собой новый фактор транскрипции, участвующий в регуляции CDR1 и CDR2 транспортеров ABC Candida albicans.Eukaryot Cell 2004 [цитировано 5 января 2017 г.]; 3 (6): 1639–52. Доступно по адресу: URL: https://www. ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC539021/pdf/0132-04.pdf. pmid: 155
48. 48. Джонсон МЭ, Катияр С.К., Эдлинд ТД. Новая горячая точка Fks для приобретенной устойчивости к эхинокандину у Saccharomyces cerevisiae и ее вклада в внутреннюю устойчивость видов Scedosporium. Противомикробные агенты Chemother 2011; 55 (8): 3774–81. pmid: 21576441
49. 49. Pfaller MA, Diekema DJ, Jones RN, Castanheira M.Использование анидулафунгина в качестве суррогатного маркера для прогнозирования чувствительности и устойчивости к каспофунгину среди 4290 клинических изолятов Candida с использованием методов CLSI и критериев интерпретации. J Clin Microbiol 2014 [цитируется 5 августа 2017 г.]; 52 (9): 3223–9. pmid: 24951808
50. 50. Европейский комитет по тестированию на чувствительность к противомикробным препаратам. Анидулафунгин: Обоснование клинических контрольных точек, версия 2.0, 2013 2013.
51. 51. Джонсон МЭ, Эдлинд ТД. Топологический и мутационный анализ Saccharomyces cerevisiae Fks1. Eukaryot Cell 2012; 11 (7): 952–60. pmid: 22581527
52. 52. Рыбак Дж. М., Диккенс С. М., Паркер Дж. Э., Кодл К. Э., Манигаба К., Уэйли С. Г. и др. Потеря активности C-5-стерол-десатуразы приводит к повышенной устойчивости к противогрибковым средствам азола и эхинокандина в клиническом изоляте парапсилоза Candida. Антимикробные агенты Chemother 2017; 61 (9).

Endophytic Bacillus spp. продуцируют противогрибковые липопептиды и индуцируют экспрессию гена защиты хозяина в кукурузе

https: // doi.org / 10.1016 / j.micres.2014.11.004Get rights and content

Abstract

Эндофиты — это мутуалистические симбионты в здоровых тканях растений. В этом исследовании мы выделили Bacillus spp. из семян нескольких сортов кукурузы. Было обнаружено, что Bacillus amyloliquifaciens или Bacillus subtilis присутствуют во всех сортах кукурузы, изученных в этом исследовании. Чтобы определить, могут ли бактерии продуцировать противогрибковые соединения, обычно липопептиды в Bacillus spp. , бактериальные культуры были проверены на продукцию липопептидов. Липопептиды экстрагировали кислотным осаждением из жидких культур Bacillus spp. Липопептидные экстракты из Bacillus spp. выделенный из индийского попкорна и желтой зубчатой ​​кукурузы показал ингибирующую активность против Fusarium moniliforme при дозе 500 мкг на диск. С помощью масс-спектрометрии MALDI-TOF мы обнаружили присутствие в этих изолятах противогрибковых средств итурина А, фенгицина и бацилломицина. ПЦР-амплификация также показала наличие генов итурина А и фенгицина. B. subtilis (SG_JW.03), выделенный из индийского попкорна, продемонстрировал сильное ингибирование микофлоры семян Arabidopsis и усиление роста проростков. Мы проверили индукцию экспрессии защитного гена в растении-хозяине после обработки растений B. subtilis (SG_JW.03) и его липопептидным экстрактом с помощью RT-qPCR. Корни проростков индийского попкорна, обработанные суспензией B. subtilis (SG_JW.03), показали индукцию генов, связанных с патогенезом, включая PR-1 и PR-4, которые связаны с защитой растений от грибковых патогенов.Сам по себе липопептидный экстракт не увеличивал экспрессию этих генов, связанных с патогенезом. Основываясь на нашем исследовании эндофитов кукурузы, мы предполагаем, что бактериальные эндофиты, которые встречаются в природе во многих сортах кукурузы, могут действовать для защиты хозяев, секретируя противогрибковые липопептиды, которые ингибируют патогены, а также индуцируют повышающую регуляцию связанных с патогенезом генов растений-хозяев ( системная приобретенная резистентность).

Ключевые слова

Кукуруза

Эндофит

Фенгицин

Хитиназа

Патогенез

Рекомендуемые статьи Цитирующие статьи (0)

Copyright © 2014 Elsevier GmbH.Все права защищены.

Рекомендуемые статьи

Ссылки на статьи

Идентификация и разработка 32-членных противогрибковых макролактонов нотонесомицинов | Фабрики микробных клеток

1.

Ньюман Д. Д., Крэгг Г. М.. Натуральные продукты как источники новых лекарств с 1981 по 2014 годы. J Nat Prod. 2016; 79: 629–61.

CAS PubMed Статья Google Scholar

2.

Берди Дж. Мысли и факты об антибиотиках: где мы сейчас и куда идем.J Antibiot (Токио). 2012; 65: 385–95.

PubMed Статья CAS Google Scholar

3.

Паркинсон Э.И., Баир Дж. С., Накамура Б. А., Ли Х. Ю., Куттаб Х. И., Саутгейт Э. Х. и др. Дезоксинибомицины ингибируют мутантную ДНК-гиразу и спасают мышей, инфицированных фторхинолон-резистентными бактериями. Nat Commun. 2015; 6: 6947.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

4.

Родригес Т., Рекер Д., Шнайдер П., Шнайдер Г. Расчет на натуральные продукты при разработке лекарств. Nat Chem. 2016; 8: 531–41.

CAS PubMed Статья Google Scholar

5.

Ng SB, Kanagasundaram Y, Fan H, Arumugam P, Eisenhaber B, Eisenhaber F. Библиотека природных организмов 160 K, уникальный ресурс для исследования природных продуктов. Nat Biotechnol. 2018; 36: 570–3.

CAS PubMed Статья Google Scholar

6.

Йоганатан К., Цао С., Краста С.К., Аитипамула С., Уиттон С.Р., Нг С. и др. Микросфаэрины A – D, четыре новых димера бензофенона с активностью против MRSA из гриба Microsphaeropsis sp. Тетраэдр. 2008; 64: 10181–7.

CAS Статья Google Scholar

7.

Ро Дж.Р., Субраманиам Дж., Чой Х., Ким Э. Х., Нг С.П., Йоганатан К. и др. Гаргантулид A, сложный 52-членный макролактон, проявляющий антибактериальную активность из Streptomyces sp.Org Lett. 2015; 17: 1377–80.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

8.

Sirota FL, Goh F, Low K-N, Yang L-K, Crasta SC, Eisenhaber B, et al. Выделение и идентификация аналога антрацимицина из Nocardiopsis kunsanensis , галофила из солеварни, с помощью стратегии геномного анализа. J Genomics. 2018; 6: 63–73.

PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

9.

Йоганатан К., Ян Л., Россант К., Хуанг И., Нг С., Батлер М.С. и др. Кохлиохиноны и эпикохиноны: антагонисты человеческого хемокинового рецептора CCR5 из Bipolaris brizae и Stachybotrys chartarum . J Antibiot (Токио). 2004. 57: 59–63.

CAS PubMed Статья Google Scholar

10.

Валлабханени С., Моди Р.К., Уокер Т., Чиллер Т. Глобальное бремя грибковых заболеваний. Заражение Dis Clin North Am.2016; 30: 1–11.

PubMed Статья Google Scholar

11.

Гвинея J. Глобальные тенденции в распределении видов Candida , вызывающих кандидемию. Clin Microbiol Infect. 2014; 20 (Приложение 6): 5–10.

PubMed Статья Google Scholar

12.

Паулуссен С., Холлсворт Дж. Э., Альварес-Перес С., Ниерман В. К., Хэмилл П. Г., Блейн Д. и др. Экология аспергиллеза: понимание патогенной активности Aspergillus fumigatus и некоторых других видов Aspergillus .Microb Biotechnol. 2016; 10: 296–322.

PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

13.

Brown GD, Denning DW, Gow NAR, Levitz SM, Netea MG, White TC. Скрытые убийцы: грибковые инфекции человека. Sci Transl Med. 2012; 4: 165rv13.

PubMed Статья CAS Google Scholar

14.

Сан С., Луи Кью, Хан Л., Ма Кью, Хе С, Ли Х и др. Идентификация и характеристика Fusarium proliferatum , нового вида грибов, вызывающих грибковый кератит.Научный отчет 2018; 8: 4859.

PubMed PubMed Central Статья CAS Google Scholar

15.

Smith KD, Achan B, Hullsiek KH, McDonald TR, Okagaki LH, Alhadab AA, et al. Повышенная устойчивость к противогрибковым препаратам у клинических изолятов Cryptococcus neoformans в Уганде. Антимикробные агенты Chemother. 2015; 59: 7197–204.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

16.

Шарма С., Кумар Р., Кумар Н., Масих А., Гупта Д., Чоудхари А. Исследование механизмов множественной резистентности в клинических изолятах Aspergillus flavus , устойчивых к вориконазолу, из эпиднадзора в грудной больнице в Дели, Индия. Антимикробные агенты Chemother. 2018; 62: e01928-17.

PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

17.

Сасаки Т., Фурихата К., Симадзу А., Сето Х., Ивата М., Ватанабе Т. и др.Новый макролидный антибиотик нотонесомицин A.J Antibiot (Токио). 1986; 39: 502–9.

CAS PubMed Статья Google Scholar

18.

Chiu H-T, Weng C-P, Lin Y-C, Chen K-H. Целенаправленная идентификация и характеристика предполагаемого кластера генов для биосинтеза бразилинолида, раскрывающая механистические идеи и комбинаторную синтетическую полезность ферментов биосинтеза 2-дезокси-1-фукозы. Org Biomol Chem. 2016; 14: 1988–2006.

CAS PubMed Статья Google Scholar

19.

Танака Ю., Комаки Х., Ядзава К., Миками Ю., Немото А., Тодзё Т. и др. Бразилинолид А, новый антибиотик из группы макролидов, продуцируемый Nocardia brasiliensis : штамм-продуцент, выделение и биологическая активность. J Antibiot (Токио). 1997; 50: 1036–41.

CAS PubMed Статья Google Scholar

20.

Роббинс Н. , Спитцер М., Ван В., Ваглехнер Н., Патель Д. Д., О’Брайен Дж. С. и др. Открытие ибомицина, сложного макролактона, который проявляет противогрибковую активность, препятствуя переносу эндоцитов и функции мембран. Cell Chem Biol. 2016; 23: 1383–94.

CAS PubMed Статья Google Scholar

21.

Helaly SE, Kulik A, Zinecker H, Ramachandaran K, Tan GYA, Imhoff JF, et al. Лангколид, 32-членный макролактоновый антибиотик, продуцируемый Streptomyces sp.Acta 3062. J Nat Prod. 2012; 75: 1018–24.

CAS PubMed Статья Google Scholar

22.

Ван З., Фанг В., Ши Л., Ван К., Чжан Ю., Чжан З. и др. Новонестмицины A и B, два новых 32-членных биоактивных макролида из Streptomyces phytohabitans HBERC-20821. J Antibiot (Токио). 2015; 68: 185–90.

CAS PubMed Статья Google Scholar

23.

Сальседо Р.Г., Олано С., Гомес С., Фернандес Р., Брана А.Ф., Мендес С. и др. Характеристика и разработка кластера генов биосинтеза противоопухолевых макролидов PM100117 и PM100118 из морских актинобактерий: создание нового улучшенного производного. Фабрики микробных клеток. 2016; 15:44.

Артикул CAS Google Scholar

24.

Сальседо Р.Г., Олано С., Фернандес Р., Брана А.Ф., Мендес С., де ла Калле Ф. и др. Выяснение стадий гликозилирования во время биосинтеза противоопухолевых макролидов PM100117 и PM100118 и разработка новых производных.Фабрики микробных клеток. 2016; 15: 187.

Артикул CAS Google Scholar

25.

Блин К., Медема М. Х., Коттманн Р., Ли С. Ю., Вебер Т. База данных antiSMASH, всеобъемлющая база данных кластеров генов биосинтеза вторичных метаболитов микробов. Nucleic Acids Res. 2017; 45: D555–9.

CAS PubMed Статья Google Scholar

26.

Gomez-Escribano JP, Alt S, Bibb MJ.Секвенирование актинобактерий нового поколения для открытия новых натуральных продуктов. Mar Drugs. 2016; 14: 78.

PubMed Central Статья CAS PubMed Google Scholar

27.

Zhang MM, Wong FT, Wang Y, Luo S, Lim YH, Heng E, et al. Стратегия CRISPR – Cas9 для активации кластеров молчаливых биосинтетических генов Streptomyces . Nat Chem Biol. 2017; 13: 607–9.

CAS Статья Google Scholar

28.

Тонг Y, Чарусанти П., Чжан Л., Вебер Т., Ли С. Инженерия актиномицетальных геномов на основе CRISPR – Cas9. ACS Synth Biol. 2015; 4: 1020–9.

CAS PubMed Статья Google Scholar

29.

Jia H, Zhang L, Wang T, Han J, Tang H, Zhang L. Разработка инструмента редактирования генов, опосредованного CRISPR / Cas9, в Streptomyces rimosus . Microbiol Читать англ. 2017; 163: 1148–55.

CAS Статья Google Scholar

30.

Cobb RE, Wang Y, Zhao H. Высокоэффективное мультиплексное редактирование генома видов Streptomyces с использованием разработанной системы CRISPR / Cas. ACS Synth Biol. 2015; 4: 723–8.

CAS PubMed Статья Google Scholar

31.

Huang H, Zheng G, Jiang W, Hu H, Lu Y. Одноэтапное высокоэффективное редактирование генома с помощью CRISPR / Cas9 в Streptomyces . Acta Biochim Biophys Sin. 2015; 47: 231–43.

CAS PubMed Статья Google Scholar

32.

Такеучи Т., Хатано М., Умекита М., Хаяши С., Вада С.-I, Нагайоши М. и др. Анализ истощения АТФ привел к выделению новых 36-членных полиоловых макролидов деплелидов A и B из Streptomyces sp. MM581-NF15. Org Lett. 2017; 19: 4207–10.

CAS PubMed Статья Google Scholar

33.

Komatsu K, Tsuda M, Tanaka Y, Mikami Y, Kobayashi J. Абсолютная стереохимия иммуносупрессивного макролида бразилинолида A и его нового родственного соединения бразилинолида C.J Org Chem. 2004; 69: 1535–41.

CAS PubMed Статья Google Scholar

34.

Sasaki T, Furihata K, Nakayama H, Seto H, Otake N. Структура нового макролидного антибиотика, нотонесомицина A. Tetrahedron Lett. 1986; 27: 1603–6.

CAS Статья Google Scholar

35.

Hideyuki S, Yasushi T, Katsukiyo Y, Yuzuru M, Jun’ichi K. Brasilinolide A, новый иммунодепрессивный макролид из актиномицета Nocardia brasiliensis .Тетраэдр. 1996; 52: 9031–4.

Артикул Google Scholar

36.

Wan Z, Fang W, Shi L, Wang K, Zhang Y, Zhang Z и др. Новонестмицины A и B, два новых 32-членных биоактивных макролида из Streptomyces phytohabitans HBERC-20821. J Antibiot. 2015; 68: 185–90.

CAS PubMed Статья Google Scholar

37.

Овербек Р., Олсон Р., Пуш Г. Д., Олсен Г. Дж., Дэвис Дж. Дж., Дис Т. и др.SEED и быстрое аннотирование микробных геномов с использованием технологии подсистем (RAST). Nucleic Acids Res. 2014; 42: D206–14.

CAS PubMed Статья Google Scholar

38.

Вебер Т., Блин К., Дуддела С., Круг Д., Ким Х.Ю., Брюкколери Р. и др. AntiSMASH 3.0 — исчерпывающий ресурс для анализа генома кластеров биосинтетических генов. Nucleic Acids Res. 2015; 43: W237–43.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

39.

Координаторы ресурсов NCBI. Ресурсы базы данных Национального центра биотехнологической информации. Nucleic Acids Res. 2018; 46: D8–13.

Артикул CAS Google Scholar

40.

Salcedo RG, Olano C, Gómez C, Fernández R, Braña AF, Méndez C, de la Calle F, Salas JA. Характеристика и разработка кластера генов биосинтеза противоопухолевых макролидов PM100117 и PM100118 из морских актинобактерий: создание нового улучшенного производного.Фабрики микробных клеток. 2016; 15–62: 44.

Артикул CAS Google Scholar

41.

Wang L, White RL, Vining LC. Биосинтез дидезоксисахарного компонента жадомицина B: гены в jad-кластере Streptomyces venezuelae ISP5230 для сборки L-дигитоксозы и переноса в ангуциклин агликон. Microbiol Читать англ. 2002; 148: 1091–103.

CAS Статья Google Scholar

42.

Pandey RP, Gurung RB, Parajuli P, Koirala N, Tuoi LT, Sohng JK. Оценка акцепторного субстрата промискуитета YjiC-опосредованного гликозилирования по отношению к флавоноидам. Carbohydr Res. 2014; 393: 26–31.

CAS PubMed Статья Google Scholar

43.

Луо Й, Чжан Л., Бартон К.В., Чжао Х. Систематическая идентификация панели сильных конститутивных промоторов из Streptomyces albus . ACS Synth Biol. 2015; 4: 1001–10.

CAS PubMed Статья Google Scholar

44.

Лейх Т.С., Тейлор Дж. С., Маркхэм Дж. Д.. Локус активации сульфата Escherichia coli K12: клонирование, генетическая и ферментативная характеристика. J Biol Chem. 1988; 263: 2409–16.

CAS PubMed Google Scholar

45.

Чжао Q, He Q, Ding W, Tang M, Kang Q, Yu Y и др. Характеристика кластера биосинтетических генов азиномицина B, выявляющая другую итеративную поликетидсинтазу I типа для биосинтеза нафтоата.Chem Biol. 2008; 15: 693–705.

CAS PubMed Статья Google Scholar

46.

Mougous JD, Senaratne RH, Petzold CJ, Jain M, Lee DH, Schelle MW, et al. Сульфатированный метаболит, продуцируемый stf3, отрицательно регулирует вирулентность Mycobacterium tuberculosis . Proc Natl Acad Sci USA. 2006; 103: 4258–63.

CAS PubMed Статья Google Scholar

47.

Соги К.М., Холсклав К.М., Фрагиадакис Г.К., Номура Д.К., Лири Дж. А., Бертоцци CR. Биосинтез и регуляция сульфоменахинона, метаболита, связанного с вирулентностью Mycobacterium tuberculosis . ACS Infect Dis. 2016; 2: 800–6.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

48.

Сековска А., Кунг Х. Ф., Данчин А. Метаболизм серы в Escherichia coli и родственных бактериях: факты и вымысел.J Mol Microbiol Biotechnol. 2000; 2: 145–77.

CAS PubMed Google Scholar

49.

Путулал Дж., Томас М.Г., Маршалл К.Г., Ной Дж. М., Хаббард Б.К., Уолш К.Т. и др. Сборка каркаса гликопептидного антибиотика: биосинтез A47934 из Streptomyces toyocaensis NRRL15009. Proc Natl Acad Sci USA. 2002; 99: 8962–7.

CAS PubMed Статья Google Scholar

50.

Hong H, Samborkyy M, Usachova K, Schnatz K, Leadlay PF. Сульфатирование и амидиногидролиз в биосинтезе гигантских линейных полиенов. Beilstein J Org Chem. 2017; 13: 2408–15.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

51.

Тан X, Эйтель К., Кайссер Л., Кулик А., Гронд С., Густ Б. Двухступенчатое сульфатирование в биосинтезе антибиотиков требует поликетид-синтазы III типа. Nat Chem Biol. 2013; 9: 610–5.

CAS PubMed Статья Google Scholar

52.

Li R, Lloyd EP, Moshos KA, Townsend CA. Идентификация и характеристика карбапенема MM 4550 и его кластера генов в Streptomyces argenteolus ATCC 11009. Chembiochem Eur J Chem Biol. 2014; 15: 320–31.

CAS Статья Google Scholar

53.

van der Horst MA, Hartog AF, El Morabet R, Marais A, Kircz M, Wever R.Ферментативное сульфатирование фенольных гидроксильных групп различных метаболитов растений арилсульфотрансферазой. Eur J Org Chem. 2015; 2015: 534–41.

Артикул CAS Google Scholar

54.

Banik JJ, Craig JW, Calle PY, Brady SF. Адаптация клонов ДНК из окружающей среды, богатых ферментами: источник ферментов для создания библиотек неестественных натуральных продуктов. J Am Chem Soc. 2010; 132: 15661–70.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

55.

Schniete JK, Cruz-Morales P, Selem-Mojica N, Fernández-Martínez LT, Hunter IS, Barona-Gómez F, et al. Расширение первичного метаболизма помогает повысить метаболическую устойчивость для облегчения биосинтеза антибиотиков у стрептомицетов. mBio. 2018; 9: e02283-17.

PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

56.

Ромеро-Родригес А., Роча Д., Руис-Виллафан Б., Тьеррафрия V, Родригес-Саноха Р., Сегура-Гонсалес Д. и др.Транскриптомный анализ классической модели регуляции углеродного катаболита у Streptomyces coelicolor . BMC Microbiol. 2016; 16:77.

PubMed PubMed Central Статья CAS Google Scholar

57.

Джин Х-М, Чанг И-К, Ли Дж. Х., Хун С. К.. Влияние увеличения концентрации НАДФН путем метаболической инженерии пентозофосфатного пути на продукцию антибиотиков и споруляцию у Streptomyces lividans TK24.J Microbiol Biotechnol. 2017; 27: 1867–76.

CAS PubMed Статья Google Scholar

58.

Wentzel A, Bruheim P, Overby A, Jakobsen ØM, Sletta H, Omara WAM, et al. Оптимизированная стратегия глубокой периодической ферментации для исследований метаболического переключения в системном масштабе у Streptomyces coelicolor A3 (2). BMC Syst Biol. 2012; 6:59.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

59.

Уилсон К. Получение геномной ДНК из бактерий. Curr Protoc Mol Biol. 2001; Глава 2: Раздел 2.4.

CAS PubMed Google Scholar

60.

Chin C-S, Alexander DH, Marks P, Klammer AA, Drake J, Heiner C, et al. Негибридные, готовые сборки микробного генома из данных секвенирования SMRT с длинным считыванием. Нат методы. 2013; 10: 563–9.

CAS PubMed Статья Google Scholar

61.

Labana P, Gosse JT, Boddy CN. Проект последовательности генома типового штамма Streptomyces armeniacus ATCC 15676. Microbiol Resour Announc. 2018; 7: e01107-18.

PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

62.

Hyatt D, Chen G-L, Locascio PF, Land ML, Larimer FW, Hauser LJ. Блудный: узнавание прокариотических генов и идентификация сайта инициации трансляции. BMC Bioinform. 2010; 11: 119.

Артикул CAS Google Scholar

63.

Делчер А.Л., Хармон Д., Касиф С., Уайт О, Зальцберг С.Л. Улучшенная идентификация микробных генов с помощью GLIMMER. Nucleic Acids Res. 1999; 27: 4636–41.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

64.

Зальцберг С.Л., Делчер А.Л., Касиф С., Уайт О. Идентификация микробных генов с использованием интерполированных марковских моделей. Nucleic Acids Res. 1998. 26: 544–8.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

65.

Лукашин А.В., Бородовский М. GeneMark.hmm: новые решения для поиска генов. Nucleic Acids Res. 1998. 26: 1107–15.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

66.

Эйзенхабер Б., Кучибхатла Д., Шерман В., Сирота, Флорида, Березовский И.Н., Вонг В.-К. и др. Рецепт предсказания функции на основе последовательности белков и его реализация в программной среде ANNOTATOR. Методы Мол Биол Клифтон, штат Нью-Джерси. 2016; 1415: 477–506.

CAS Статья Google Scholar

67.

Katoh K, Standley DM. Программное обеспечение для множественного выравнивания последовательностей MAFFT, версия 7: улучшения производительности и удобства использования. Mol Biol Evol. 2013; 30: 772–80.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

68.

Джонс Д. Т., Тейлор В. Р., Торнтон Дж. М.. Быстрое создание матриц данных о мутациях из белковых последовательностей.Comput Appl Biosci CABIOS. 1992; 8: 275–82.

CAS PubMed Google Scholar

69.

Кумар С., Стечер Г., Тамура К. MEGA7: молекулярно-эволюционный генетический анализ версии 7.0 для больших наборов данных. Mol Biol Evol. 2016; 33: 1870–4.

CAS PubMed Статья Google Scholar

70.

Лим Й.Х., Вонг Ф.Т., Йео В.Л., Чинг К.С., Лим Ю.В., Хэн Э. и др. Аурорамицин: мощный антибиотик из Streptomyces roseosporus путем активации CRISP – Cas9.ChemBioChem. 2018; 19: 1716–9.

CAS Статья Google Scholar

71.

Allard N, Garneau D, Poulin-Laprade D, Burrus V, Brzezinski R, Roy S. Ауксотрофный по диаминопимелиновой кислоте донор Escherichia coli обеспечивает улучшенный контр-отбор после межродовой конъюгации с актиномицетами. Может J Microbiol. 2015; 61: 565–74.

CAS PubMed Статья Google Scholar

72.

Livak KJ, Schmittgen TD. Анализ данных относительной экспрессии генов с использованием количественной ПЦР в реальном времени и метода 2 (-Delta Delta C (T)). Методы Сан-Диего, Калифорния, 2001; 25: 402–8.

CAS Статья Google Scholar

Грибковый кератит Лекарства: противогрибковые препараты

Хейнс К.А., Вестерненг Т.Дж., Фелл Дж.В., Моенс В. Быстрое обнаружение и идентификация патогенных грибов с помощью амплификации большой субъединицы рибосомной ДНК с помощью полимеразной цепной реакции. J Med Vet Mycol . 1995 сентябрь-октябрь. 33 (5): 319-25. [Медлайн].

Ваддавалли П.К., Гарг П., Шарма С., Сангван В.С., Рао Г.Н., Томас Р. Роль конфокальной микроскопии в диагностике грибкового и акантамебного кератита. Офтальмология . 2011 января 118 (1): 29-35. [Медлайн].

Мацумото Ю., Мурат Д., Кодзима Т., Шимазаки Дж., Цубота К. Сравнение местного местного применения микафунгина или флуконазола при лечении грибкового кератита Candida. Br J Офтальмол . 2011 Октябрь 95 (10): 1406-9. [Медлайн].

Accensi F J, Cano L, Figuera, ML Abarca и FJ. Cabañes. Новые методы ПЦР для дифференциации видов в агрегате Aspergillus niger. FEMS Microbiol. Lett . 1999. 180: 191–196.

Alexandrakis G, Jalali S, Gloor P. Диагностика фузариозного кератита на животной модели с использованием полимеразной цепной реакции. Br J Офтальмол . 1998 Март 82 (3): 306-11.[Медлайн].

Avunduk AM, Beuerman RW, Varnell ED, Kaufman HE. Конфокальная микроскопия кератита Aspergillus fumigatus. Br J Офтальмол . 2003 Апрель 87 (4): 409-10. [Медлайн].

Борн MJ, Elliott JH, O’Day DM. Лечение окулярным флуконазолом эндофтальмита Candida parapsilosis после неудачного интравитреального введения амфотерицина B. Arch Ophthalmol . 1993 Октябрь 111 (10): 1326-7. [Медлайн].

Chen YC, Eisner JD, Kattar MM, Rassoulian-Barrett SL, LaFe K, Yarfitz SL, et al.Идентификация важных с медицинской точки зрения дрожжей с использованием основанного на ПЦР обнаружения полиморфизмов последовательностей ДНК во внутренней транскрибированной области спейсера 2 генов рРНК. Дж. Клин Микробиол . 2000 июн. 38 (6): 2302-10. [Медлайн].

Чаудхари А., Сингх К. Спектр грибкового кератита в Северной Индии. Роговица . 2005 24 января (1): 8-15. [Медлайн].

Донненфельд Э.Д., Перри HD, Снайдер Р.В., Моадель Р., Эльски М., Джонс Х. Интракорнеальная, водянистая жидкость и проникновение в стекловидное тело офлоксацина для местного и перорального применения. Арочный офтальмол . 1997 Февраль 115 (2): 173-6. [Медлайн].

Driebe WT Jr, Mandelbaum S, Forster RK, Schwartz LK, Culbertson WW. Псевдофакический эндофтальмит. Диагностика и лечение. Офтальмология . 1986 апр. 93 (4): 442-8. [Медлайн].

Данлоп А.А., Райт Э.Д., Ховладер С.А., Назрул И., Хусейн Р., Макклеллан К. Гнойное изъязвление роговицы в Бангладеш. Проведено исследование 142 случаев с изучением микробиологического диагноза, клинико-эпидемиологических особенностей бактериального и грибкового кератита. Aust N Z J Ophthalmol . 1994 Май. 22 (2): 105-10. [Медлайн].

Einsele H, Hebart H, Roller G, Löffler J, Rothenhofer I, Muller CA. Обнаружение и идентификация грибковых патогенов в крови с помощью молекулярных зондов. Дж. Клин Микробиол . 1997 июн. 35 (6): 1353-60. [Медлайн].

Эстеве-Зарзосо Б. , Беллох С., Урубуру Ф., Кверол А. Идентификация дрожжей с помощью ПДРФ-анализа гена 5.8S рРНК и двух рибосомных внутренних транскрибируемых спейсеров. Int J Syst Bacteriol . 1999, январь, 49, Pt 1: 329-37. [Медлайн].

Феррер С. С., Фрасес Ф, Колом, Дж. Л. Алио, Дж. Л. Абад и М. Э. Муле. Молекулярная диагностика грибковых инфекций глаза на животной модели. Ред. Iberoam. Микол . 2000. 17: S134.

Florakis GJ, Moazami G, Schubert H, Koester CJ, Auran JD. Сканирующая щелевая конфокальная микроскопия грибкового кератита. Арочный офтальмол . 1997 ноябрь 115 (11): 1461-3. [Медлайн].

Форстер Р.К., Эбботт Р.Л., Гелендер Х. Лечение инфекционного эндофтальмита. Офтальмология . 1980 апр. 87 (4): 313-9. [Медлайн].

Гарг П. , Махеш С., Бансал АК, Гопинатан У, Рао Г.Н. Грибковая инфекция из самозаклеивающегося разреза без швов при хирургии катаракты. Офтальмология . 2003 ноябрь 110 (11): 2173-7. [Медлайн].

Guzek JP, Roosenberg JM, Gano DL, Wessels IF. Влияние носителя на проникновение в роговицу растертых в порошок кетоконазола и итраконазола. Лазеры офтальмологические . 1998 29 ноября (11): 926-9. [Медлайн].

Идальго Дж. А., Алангаден Г. Дж., Элиотт Д., Акинс Р. А., Пуклин Дж., Абрамс Г. Диагностика грибкового эндофтальмита путем обнаружения ДНК Candida albicans во внутриглазной жидкости с использованием анализа видоспецифической полимеразной цепной реакции. J Заразить Dis . 2000 Март 181 (3): 1198-201. [Медлайн].

Jaeger EE, Carroll NM, Choudhury S, Dunlop AA, Towler HM, Matheson MM, et al.Быстрое обнаружение и идентификация видов Candida, Aspergillus и Fusarium в образцах глаз с помощью вложенной ПЦР. Дж. Клин Микробиол . 2000 августа 38 (8): 2902-8. [Медлайн].

Иордания JA. ПЦР-идентификация четырех важных с медицинской точки зрения видов Candida с использованием одной пары праймеров. Дж. Клин Микробиол . 1994 Декабрь 32 (12): 2962-7. [Медлайн].

Кауфман, Калифорния, Брэдли, С.Ф., Вайн, АК. Кандидозный эндофтальмит, связанный с имплантацией интраокулярных линз: эффективность терапии флуконазолом. Микозы . 1993 Янв-Фев. 36 (1-2): 13-7. [Медлайн].

Кейхани К., Сеедор Дж. А., Шах М. К., Террачиано А. Дж., Риттербанд, округ Колумбия. Заболеваемость грибковым кератитом и эндофтальмитом после проникающей кератопластики. Роговица . 2005 24 апреля (3): 288-91. [Медлайн].

Knox CM, Cevellos V, Dean D. Типирование рибосомной ДНК 16S для идентификации патогенов у пациентов с бактериальным кератитом. Дж. Клин Микробиол . 1998 декабрь.36 (12): 3492-6. [Медлайн].

Кумар М, Шукла ПК. Использование ПЦР-нацеливания на внутренние транскрибируемые спейсерные области и анализ однонитевого конформационного полиморфизма вариации последовательностей в различных регионах генов рРНК у грибов для быстрой диагностики грибкового кератита. Дж. Клин Микробиол . 2005 Февраль 43 (2): 662-8. [Медлайн].

Lott TJ, Kuykendall RJ, Reiss E. Анализ нуклеотидной последовательности рДНК 5.8S и прилегающей области ITS2 Candida albicans и родственных видов. Дрожжи . 1993, 9 (11): 1199-206. [Медлайн].

Мабон М. Грибковый кератит. Int Ophthalmol Clin . 1998. 38 (4): 115-23. [Медлайн].

Макимура К., Мураяма С.Ю., Ямагути Х. Обнаружение широкого спектра важных с медицинской точки зрения грибов с помощью полимеразной цепной реакции. J Med Microbiol . 1994 Май. 40 (5): 358-64. [Медлайн].

Miyakawa Y, Mabuchi T, Kagaya K, Fukazawa Y. Выделение и характеристика видоспецифического фрагмента ДНК для обнаружения Candida albicans с помощью полимеразной цепной реакции. Дж. Клин Микробиол . 1992, 30 апреля (4): 894-900. [Медлайн].

Охрави Н., Адамсон П., Мант Р., Мэтисон М.М., Мидгли Г., Таулер Х.М. Полимеразная цепная реакция и полиморфизм длины рестрикционных фрагментов опосредуют обнаружение и видообразование Candida spp, вызывающих внутриглазную инфекцию. Инвест офтальмол Vis Sci . 1998 Май. 39 (6): 859-66. [Медлайн].

Panda A, Sharma N, Das G, Kumar N, Satpathy G. Грибковый кератит у детей: эпидемиологическая и микробиологическая оценка. Роговица . 1997 Май. 16 (3): 295-9. [Медлайн].

webmd.com»> Prajna NV, John RK, Nirmalan PK, Lalitha P, Srinivasan M. Рандомизированное клиническое испытание, сравнивающее 2% эконазол и 5% натамицин для лечения грибкового кератита. Br J Офтальмол . 2003 Октябрь 87 (10): 1235-7. [Медлайн].

Prajna NV, Nirmalan PK, Mahalakshmi R, Lalitha P, Srinivasan M. Одновременное использование 5% натамицина и 2% эконазола для лечения грибкового кератита. Роговица . 2004 23 ноября (8): 793-6. [Медлайн].

Reiss E, Tanaka K, Bruker G, Chazalet V, Coleman D, Debeaupuis JP. Молекулярная диагностика и эпидемиология грибковых инфекций. Мед Микол . 1998. 36 Suppl 1: 249-57. [Медлайн].

Riggsby WS, Torres-Bauza LJ, Wills JW, Townes TM. Содержание ДНК, кинетическая сложность и вопрос плоидности Candida albicans. Мол Клетки Биол . 2 июля 1982 г. (7): 853-62. [Медлайн].

Роза Р. Х. младший, Миллер Д., Альфонсо ЕС. Меняющийся спектр грибкового кератита на юге Флориды. Офтальмология . 1994 июн.101 (6): 1005-13. [Медлайн].

Сринивасан М. Грибковый кератит. Curr Opin Ophthalmol . 2004 15 августа (4): 321-7. [Медлайн].

Tang CM, Holden DW, Aufauvre-Brown A, Cohen J. Обнаружение Aspergillus spp. с помощью полимеразной цепной реакции и ее оценки в жидкости бронхоальвеолярного лаважа. Am Rev Respir Dis . 1993 ноябрь 148 (5): 1313-7. [Медлайн].

Thomas PA. Грибковые инфекции роговицы. Глаз . 2003 17 ноября (8): 852-62. [Медлайн].

Упадхьяй М.П., ​​Кармачарья П.К., Коирала С., Туладхар Н.Р., Брайан Л. Э., Смолин Г. Эпидемиологические характеристики, предрасполагающие факторы и этиологический диагноз язвы роговицы в Непале. Ам Дж. Офтальмол . 1991 15 января. 111 (1): 92-9. [Медлайн].

Weissgold DJ, Orlin SE, Sulewski ME, Frayer WC, Eagle RC Jr.Грибковый кератит с отсроченным началом после эндофтальмита. Офтальмология . 1998 Февраль 105 (2): 258-62. [Медлайн].

White TJ, Bruns T, Lee S, Tailor S. Амплификация и прямое секвенирование генов грибковой рибосомной РНК для филогенетики. Innins MA, Гельфанд DH, Снинский JJ, White TJ, ред. Протоколы ПЦР. Руководство по методам и применению . Сан-Диего, Калифорния: Academic Press, Inc; 1990. 315-22.

стр. 1000258 1..17

% PDF-1.4 % 1 0 объект > эндобдж 6 0 объект /Заголовок /Предмет / Автор /Режиссер / CreationDate (D: 20211213102229-00’00 ‘) / ModDate (D: 2008121

06 + 08’00 ‘) >> эндобдж 2 0 obj > эндобдж 3 0 obj > эндобдж 4 0 объект > эндобдж 5 0 объект > ручей

чел. 1000258 1..17

конечный поток эндобдж 7 0 объект > эндобдж 8 0 объект > эндобдж 9 0 объект > эндобдж 10 0 объект > эндобдж 11 0 объект > эндобдж 12 0 объект > эндобдж 13 0 объект > эндобдж 14 0 объект > эндобдж 15 0 объект > эндобдж 16 0 объект > эндобдж 17 0 объект > эндобдж 18 0 объект > эндобдж 19 0 объект > эндобдж 20 0 объект > эндобдж 21 0 объект > эндобдж 22 0 объект > эндобдж 23 0 объект > эндобдж 24 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC / ImageB / ImageI] >> эндобдж 25 0 объект > ручей x ڥ YK6W # QoPn [9r`1ˇ (nc] (/} $ R`) — / _ qg | _ | \ C̰KZ.