Объем плита днища пн 10: Плита днища ПН-10, ПН-15

Содержание

ПН10

Элементы бетонных колодцев плиты низа ПН10 представляют собой сборные железобетонные конструкции, состоящие из различных жб элементов и предназначены для устройства инженерных и водоотводных коммуникаций, различных коммуникационных сетей и канализационных септиков. Бетонные колодцы универсальны для сооружений горловин и стволов сборных колодцев, которые стыкуются путем сварки скоб.


Популярны колодцы железобетонные в частной застройке и на участках, где из них устраиваются системы водоснабжения, питьевые колодцы и небольшие канализации. Дорожное строительство также активно использует данный тип жб изделий. Бетонное кольцо вместе с крышкой колодца и днищем, соответствующего общему для всех элементов диаметру колодца, составляют полноценную конструкцию. К элементам колодцев плиты низа ПН10 предъявляются строгие требования качества, прописанные в ГОСТ 8020-90.


Конструкция элементов колодцев плиты низа ПН10 достаточно проста и представляет собой каркас из металлической арматуры толщиной 6-10 мм, покрытый бетоном и имеющем требуемую форму.

Процесс производства, в основном, происходит методом вибропрессования. Стальной арматурный каркас покрывают слоем из тяжелого бетона и подвергают вибрации, которая и придает бетону требуемую плотность. В итоге получаются прочные элементы для железобетонных колодцев высокого качества толщиной 60-140 мм. При производстве элементов железобетонных колодцев используется тяжелый бетон марок от М200 до М500, гарантирующий запас прочности и трещиностойкости.

Нашей компанией производится монтаж и установка плиты низа ПН10. По вопросам монтажа колодцев железобетонных и элементов колодцев обращаться по телефону (812) 336-87-96.

Основными требованиями, предъявляемыми к бетону для колодцев являются прочность, плотность и водонепроницаемость (W4), так как бетонные колодцы заглубляют ниже уровня грунтовых вод. Элементы плиты низа ПН10 имеют низкое водопоглощение и могут долгое время взаимодействовать с жидкостями. Для применения данных элементов в агрессивных грунтах в производстве используют специальные сульфатостойкие или другие цементы, хорошо переносящие реактивные или химические среды.

Поскольку колодцы находятся глубоко в грунте и не испытывают резких перепадов температур, требования к морозостойкости элементов железобетонных колодцев плиты низа ПН10 рассчитываются индивидуально и зависят от климатических условий места монтажа.

Предназначенные выдерживать нагрузки от крышки и друг друга, элементы колодцев плиты низа ПН10 армируются каркасами из упрочненной стали классов Ат-IIIС и Ат-IVС и А-I, А-II и А-III. Металлические детали, особенно наружные, проходят предварительную обработку антикоррозийными составами.

В компании БЛОК можно заказать как колодцы, так и элементы колодцев плиты низа ПН10, а так же проконсультироваться с нашими специалистами, подобрать требуемые бетонные колодцы. Купить изделия и проконсультироваться по общим вопросам покупки и доставки Вы можете позвонив по телефонам компании ГК БЛОК:

Санкт-Петербург: (812) 309-22-09, Москва: (495) 646-38-32, Краснодар: (861) 279-36-00. Режим работы компании: Пн-Пт с 9-00 до 18-00. Компанией БЛОК осуществляется доставка ЖБИ по всей России прямо до объекта заказчика или на строительную площадку, если позволяет инфраструктура. В нашем отделе продаж можно узнать заранее уточнить цену из группы «колодцы железобетонные» и рассчитать общую стоимость заказа.


Монтаж элементов колодцев железобетонных

Выбор размера элемента осуществляют в зависимости от того, какое предназначение сооружаемого железобетонного колодца. Диаметр элементов колодцев плиты низа ПН10 должен соответствовать диаметру рабочей камеры. Канализационные колодцы и кольца шире водопроводных и газопроводных. А если колодцы будут использоваться для внутриквартальных сетей, то стоит учитывать, что такие трубопроводы намного уже.

Колодцы из бетонных элементов плиты низа ПН10 монтируются намного легче и быстрее, чем других типов. Чтобы при монтаже они не сошли с места, изделия скрепляют между собой в четырех или шести местах стальными скобами.

Для удобства пользования в элементах колодцев предусматривают место для установки шибера, металлической лестницы или подвесных скоб. Скобы устанавливают в отверстия, а подвесные закладывают в местах стыкования. Дорожное строительство применят установку изделий плиты низа ПН10 на цементный раствор стандартного состава 1:2. Стыки элементов со всех сторон затирают этим составом и железнят. Но даже это не исключает гидроизоляцию колодцев после установки.

Показатели приемо-сдаточных испытаний элементов бетонных колодцев плиты низа ПН10

  1. Класс бетона по прочности и отпускной прочности бетона;
  2. Соответствие арматурных и закладных изделий;
  3. Прочность сварных соединений;
  4. Толщина защитного слоя бетона до арматуры;
  5. Точность геометрических параметров;
  6. Качество бетонной поверхности.

Технический паспорт, сопровождающий партию элементов бетонных колодцев плиты низа ПН10, должен содержать информацию о дате изготовления партии, о количестве изделий, о результатах испытаний на прочность, сведения о марке бетона, прочности на сжатие, класс бетона по морозостойкости и водонепроницаемости.

Контроль качества элементов колодцев плиты низа ПН10 железобетонных

Как и в иных изделиях ЖБИ, трещин в изделиях плиты низа ПН10 быть не должно. Возможны лишь едва заметные глазу, так называемые, усадочные трещины шириной не более одной десятой миллиметра. Возможны незначительные отклонения геометрических параметров колец не более ±5 мм по толщине, ±6 мм по диаметру жб изделия. Поверхности изделия не должны иметь большого количества раковин диаметром более 15 мм и глубиной больше 5 мм. Готовые колодцы железобетонные не должны скрывать монтажные петли элементов за наплывами бетона, так как это может затруднить монтаж парапетных плит.

Хранение и транспортировка элементов бетонных колодцев

Элементы бетонных колодцев плиты низа ПН10 должны храниться штабелями в рабочем положении, лицевой стороной вверх. Один штабель не должен состоять из более чем 3-5 рядов, во избежание падения и деформации жб изделий. Для доставки изделия укладывают штабелем не выше 2, 5 метров и надежно закрепляют.

При транспортировке и хранении между элементами должны лежать прокладки толщиной не менее 40 мм.


критерии качества по ГОСТу, расчёт объёма бетона в м3, порядок изготовления

Плиты низа колодцев обозначаются маркировкой ПН 10 и представляют собой армированные бетонные конструкции. Эти изделия предназначаются для сооружения канализационных септиков, водоотводных и прочих коммуникаций. Бетонная плита стыкуется с другими элементами колодца с помощью металлических скоб. Для изготовления ПН 10 объём бетона в м3 рассчитывают исходя из габаритов изделия.

Конструкция и область применения

Плиты низа колодцев используются на частных и общественных территориях. Они могут быть частью канализационных, водопроводных и других колодцев. ПН 10 применяют и в дорожном строительстве. Полноценная конструкция включает в себя следующие элементы:

  • плита донной части колодца ПН 10;
  • крышка;
  • кольца;
  • горловина.

Требования к характеристикам

Железобетонная плита должна обладать рядом характеристик, главные из которых — водонепроницаемость, плотность и прочность. Плита низа часто находится ниже залегания грунтовых вод, поэтому она не должна пропускать влагу.

Качественные изделия способны несколько лет контактировать с жидкостью, не теряя прочности. Если использование предполагается в условиях соприкосновения с агрессивными средами, в бетон вводят специальные добавки или делают смесь на основе сульфатостойкого цемента.

Требования к морозостойкости рассчитываются в индивидуальном порядке. Определяющий фактор — климатические условия той местности, где будет эксплуатироваться плита. Чаще всего на глубине расположения днища нет резких перепадов температур, поэтому требования к морозостойкости невысокие. Арматура изготавливается из стали определённых марок, включая:

  • А-I;
  • А-II;
  • A-III;
  • Ат-IIIС;
  • Ат-IVС.

Детали подвергаются обработке специальными составами, защищающими от коррозии.

Монтаж железобетонных элементов

Плита днища колодца выбирается того диаметра, который соответствует размеру сооружения. Рабочая камера должна иметь достаточный диаметр, чтобы в неё мог свободно пролезть взрослый человек. Трубопроводы, расположенные во внутриквартальных территориях, обычно имеют меньшие размеры по сравнению с остальными. Газопроводные и водопроводные колодезные сооружения бывают уже, чем канализационные.

Бетонные колодцы хороши тем, что на их монтаж требуется меньше времени, если сравнивать с металлическими и кирпичными сооружениями. При установке изделия скрепляют между собой металлическими скобами. Достаточно зафиксировать каждый элемент в 4 или 6 местах. Такая мера предотвращает вероятность смещения изделий.

Поскольку эксплуатация колодца предполагает регулярное техническое обслуживание, внутри монтируют крепления в виде скоб и подвесных элементов. Последние закладывают до момента стыкования колец. Также предусматривают место для установки лестницы или шибера. Это нужно, чтобы впоследствии в колодец мог спуститься рабочий.

В дорожном строительстве плиту низа скрепляют с другими элементами бетонным раствором в соотношении 1:2 (1 часть цемента на 2 части песка). Стыки обрабатывают с наружной и внутренней стороны, после чего выполняют дополнительную гидроизоляцию.

Контроль качества

Готовая плита ПН 10 подвергается приемосдаточным испытаниям, после чего делается вывод о её качестве. Если всё в норме, продукция допускается к отгрузке. Учитываются следующие параметры:

  • качество поверхности изделия;
  • точность геометрических размеров;
  • расстояние от поверхности изделия до арматурного каркаса;
  • соответствие накладных изделия и арматуры нормативам;
  • класс бетона по отпускной прочности.

Партия изделий сопровождается техническим паспортом. В документе указывают номер партии и дату выпуска. Помимо этого, в нём содержатся такие данные:

  • марка бетона;
  • параметры водостойкости;
  • класс морозоустойчивости;
  • результаты испытаний на прочность;
  • стойкость к нагрузке на сжатие;
  • количество изделий в партии.

Кроме числовых характеристик, изделие должно соответствовать нормативам по внешнему виду. В бетоне не должно быть больших трещин, кроме усадочных. Предельный размер для них составляет 0,1 мм. Предельные отклонения размеров платы низа:

  • диаметр — 6 мм;
  • толщина — 15 мм.

На поверхности плиты могут присутствовать раковины глубиной до 5 мм и диаметром до 15 мм. Монтажные петли должны быть хорошо видны, не допускается, чтобы на них были наплывы бетона. Правила транспортировки и хранения сводятся к тому, что плиты должны находиться в горизонтальном положении, а между ними необходимо уложить прокладки высотой 40 мм.

Плита перекрытия ПН-10

Плита днища ПН-10 — железобетонная конструкция круглых подземных колодцев, являющиеся дном колодца из сборных элементов. При необходимости плита днища укладывается под рабочую камеру и используются в колодцах из кирпича и природного камня. Железобетонные колодцы получили широкое распространение как в инженерных сетях (водопровод, газопровода, канализация), так и в частной застройке (питьевые колодцы, выгребные ямы, септики). Колодцы из железобетона отличаются долговечностью, не склонны к обрастанию и не выделяют токсичных веществ. В стандарте производства колодезных днищ.

Плиты днища ПН10 изготавливаются из железобетона. Это высокопрочные и многофункциональные изделия (стальной каркас, покрытый слоем бетона в форме круга), с помощью которых удается получить надежные и долговечные технические сооружения. Связка с элементами (кольцами) производится цементным раствором.

ПН-10 производства ООО «Евроблок» выпускаются в соответствии с ГОСТ 8020-90 и требованиям серии 3.900-1.14, что устанавливает строгие требования к качеству элементов колодцев.

Основные габаритные размеры ПН-10: внешний диаметр – 1500 мм, высота — 100 мм. Масса изделия составляет 450 кг. Общий объем бетона на одно изделие – 0,18 м3.

Бетоны для изготовления крышек ПН 10 подбираются по рецептуре в зависимости от климатических условий эксплуатации. Благодаря бетону W4 и выше днища колодцев могут долгое время находится в контакте с агрессивной средой грунтов и жидкостей. Морозостойкость бетона изделия не ниже F50. Стальная начинка плиты покрыта антикоррозийными составами.

 

Маркировка изделия

Маркирование плиты днища ПН-10 осуществляется согласно ГОСТ 8020-90. Буквенная группа ПН – тип элемента колодца (обозначает тип изделия), 10 – диаметр колодца, также может быть обозначена водонепроницаемость бетона:

Контроль качества изделия

Главной причиной для отбраковки изделия является обнажение арматуры. Такой дефект приводит к быстрому разрушению изделия. Трещин в бетонных плитах днищ ПН быть не должно. Возможны лишь едва заметные глазу усадочные трещины, шириной не более одной десятой миллиметра. На приемке плит ПН нужно проверить его показатели: класса бетона по прочности и отпускной прочности бетона, соответствия арматурных и закладных изделий, толщины защитного слоя бетона до арматуры, точности геометрических параметров, качества бетонной поверхности.

 

Транспортировка и хранение

Плиты днищ ПН-10 должны храниться штабелями не более двух с половиной метров в высоту и не более 6 рядов в стопке.

При перевозке и хранении между плитами перекрытия прокладывают деревянные прокладки, причем строго друг под другом на одном уровне.

Плита днища железобетонная ПН-10 | «ЖБИКОМ»

Более 10 лет работы

Площадь склада более 2 000 м2

Поставка с 70 заводов

Плита днища ПН-10 – это железобетонное изделие, представляющее собой монолитную плиту в форме круга. Данный тип ЖБИ используется для сооружения колодезных составных конструкций различного назначения. Продажи днища ПН-10 в Москве не утихают, ведь помимо низкой цены, изделие может похвастаться еще уймой различных и очень весомых характеристик. В их числе высокая прочность изделия, его безвредность и длительный срок эксплуатации.

Производство

Днище колодца ПН-10 осуществляется на специальном заводе. Производство должно проходить согласно всем нормам ГОСТ 8020-90 с использованием бетона М200 или М500.

Такие заводы производят изделия в несколько этапов:

  • Изначальная подготовка к армированию;
  • Проведение опалубочных работ;
  • Процесс армирования;
  • Бетонирование изделия;
  • Уход за сохнущим готовым изделием.

Применение

Данный тип изделия замечательно подходит почти для любого типа колодца. Так как не все стеновые кольца имеют собственное днище, данный тип изделия остается востребованным. Безвредность материала, в свою очередь, существенно расширяет границы областей применения.

Плита днища ПН-10 может быть использована:

  • Для оборудования систем коммуникаций;
  • Строительства колодцев для воды;
  • Для возведения канализационных люков;
  • Для газопровода или водопровода;
  • При возведении септика.

Хранение и транспортировка изделий

ЖБИ нуждаются в правильном хранении, дабы сохранить свой изначальный эксплуатационный срок. Транспортировка, из-за немалых габаритов изделий, производится благодаря грузовым автомобилям. Выгрузка и монтаж ЖБИ происходит при помощи подъемной техники.

Как купить в Москве?

Приобрести плиты днища в Москве очень легко, если знать, где искать. Компания «ЖБИКОМ» предлагает широкий спектр изделий из бетона по самым приемлемым ценам с доставкой в Москве. При таких низких ценах, качество изделий остается неизменно высоким, поэтому клиент всегда может быть уверен в качественном товаре. К тому же оформление заказа очень простое и длится всего-то пару минут. Достаточно зайти на сайт компании «ЖБИКОМ» и воспользоваться специальной формой. Консерваторы могут просто позвонить по телефону +7 (499) 707-12-06. Кроме того, «ЖБИКОМ» также принимает заказы по e-mail – [email protected]

Плиты перекрытия колодцев и днища в Мурманске и области

Марки изделия

Плита днища колодца ПН 10, ПН 15, ПН 20 (ПН-10,ПН-15,ПН-20) применяют при строительстве водопроводных и канализационных систем. Данные элементы используют совместно с кольцами и крышками, на выходе получается упакованный колодец.

Марка изделийD наруж. d внутр., ммH, высота, ммМасса, тОбъем, м3
ПП 10-1D -1160
d — 680
1500,290,10
ПП 15-1D — 1680
d — 680
1500. 660,37
ПП 20-1D — 2200
d — 680
1601,380,51

Контроль качества

Завод «М500» изготавливает бетонные крышки и днища колодца в точном соответствии с нормативными требованиями. Каждое изделие подвергается тщательному контролю на всех этапах производства, начиная от выбора сырья и заканчивая оформлением паспорта на каждую партию.

[ Преимущества завода “М500” ]

Плиты перекрытия колодцев и днища

ИЗДЕЛИЯ В НАЛИЧИИ
МИНИМАЛЬНЫЙ СРОК ИЗГОТОВЛЕНИЯ
СВОЯ ДОСТАВКА
ГИБКАЯ СИСТЕМА СКИДОК

Индивидуальный подход к каждому покупателю. Оптовым покупателям скидки!

Плита перекрытия для ж б колодцев (днища колодцев): цена

Марка изделия Наименование изделия Объем бетона в плотном теле без потерь, м³ Вес, тонны Размер изделия, L х B х H, мм
1 2 3 4 5

Изделия для колодцев по серии 3.900.1-14 выпуск 1

Назначение: предназначены для строительства водопроводных и канализационных колодцев.
ПН 10 Плита днища для колодца диаметром 1,0 м 0,18 0,45 Д= 1500, h=100
ПП 10-1 Плита перекрытия для колодца диаметром 1,0 м первого типа несущей способности 0,10 0,25 Д=1160, Дотв. =700, h=150
ПП 10-2 Плита перекрытия для колодца диаметром 1,0 м второго типа несущей способности 0,10 0,25 Д=1160, Дотв.=700, h=150
ПН 15 Плита днища для колодца диаметром 1,5 м 0,38 0,95 Д=2000, h=120
1ПП 15-1 Плита перекрытия для колодца диаметром 1,5 м первого типа несущей способности 1 типоразмера 0,27 0,68 Д=1680, Дотв.=700, h=150
1ПП 15-2 Плита перекрытия для колодца диаметром 1,5 м второго типа несущей способности 1 типоразмера 0,28 0,70 Д=1680, Дотв.=700, смещ. отвер к краю=400, h=150
2ПП 15-1 Плита перекрытия для колодца диаметром 1,5 м первого типа несущей способности 2 типоразмера 0,28 0,70 Д=1680, Дотв. =700, h=200
2ПП 15-2 Плита перекрытия для колодца диаметром 1,5 м второго типа несущей способности 2 типоразмера 0,27 0,68 Д=1680, Дотв.=700, смещ. Отвер к краю =150
ПН 20 Плита днища для колодца диаметром 2,0 м 0,59 1,47 Д=2500, h=120
1ПП 20-1 Плита перекрытия для колодца диаметром 2,0 м первого типа несущей способности 1 типоразмера 0,55 1,38 Д=2200, Дотв.=700, h=160
1ПП 20-2 Плита перекрытия для колодца диаметром 2,0 м первого типа несущей способности 1 типоразмера 0,55 1,38 Д=2200, Дотв.=700, h=160
2ПП 20-1 Плита перекрытия для колодца диаметром 2,0 м первого типа несущей способности 2 типоразмера 0,48 1,20 Д=2200, Дотв. =1000, h=500
2ПП 20-2 Плита перекрытия для колодца диаметром 2,0 м второго типа несущей способности 2 типоразмера 0,48 1,20 Д=2200, Дотв.=1000, h=500
КО 6 Кольцо опорное для устройства крышек люков колодцев 0,02 0,05 Дв=580, Дн=840, h=70

Крышки, днища колодцев (ПП, ПН) Волгоград

Бетонный завод PSK-SK предлагает купить крышки, плиты перекрытия и днища колодца на выгодных условиях. Благодаря собственному производству купить крышку для колодца у нас можно по самой доступной цене.

Значение величины «с» для плит перекрытия следующее:
1. ПП 10-1 (2), с=80 мм
2. 1ПП 15-1 (2), с=90 мм
3. 2ПП 15-1 (2), с=290 мм
4. 3ПП 15-1 (2), с=100 мм
5. 1ПП 20-1 (2), с=100 мм
6. 2ПП 20-1 (2), с=550 мм
7. 3ПП 20-1 (2), с=100 мм

 
КОЛЬЦО СТЕНОВОЕ КОЛОДЦЕВ, ГОСТ 8020-2016
Наименование изделия D внеш, мм D внутр, мм высота, мм объем,  м³ вес, т БЕЗНАЛИЧНЫЙ РАСЧЕТ С НДС НАЛИЧНЫЙ РАСЧЕТ БЕЗ НДС
КО 6 кольцо опорное 840 580 70 0,02 0,05 495 475
КО 1 900 600 100 0,046 0,084 1195 1095
КС 7-3 840 700 290 0,5 0,14 1175 995
КС 10-3 1160 1000 290 0,079 0,2 1395 1295
КС 10-6 1160 1000 590 0,16 0,4 2495 2095
КС 10-9 1160 1000 890 0,242 0,6 3195 2850
КС 15-6 1680 1500 590 0,3 0,75 3695 3295
КС 15-9 1680 1500 890 0,44 1,1 4795 4295
КС 20-9 2200 2000 890 0,77 1,93 7595 6895
КС 20-6 2200 2000 890 0,51 1,28 6895 6195
КС 25-3 2750 2500 300 0,29 0,7 8995 8195
КС 25-6 2750 2500 600 0,58 1,4 16995 15795
КС 25-9 2750 2500 900 0,88 2,2 21995 19995
КС 25-12 2750 2500 1200 1,15 2,8 22995 20995
ПЛИТА ДНИЩА КОЛОДЦЕВ, ГОСТ 8020-2016, чертеж ООО «ПСК»
Наименование изделия D внеш, мм D внутр, мм высота, мм объем,  м³ вес, т БЕЗНАЛИЧНЫЙ РАСЧЕТ С НДС НАЛИЧНЫЙ РАСЧЕТ БЕЗ НДС
ПН 10 1160 1160 150 0,16 0,32 2195 1995
ПН 10 по ГОСТ 1500 1500 100 0,18 0,45 2595 2395
ПН 15 1680 1680 150 0,33 0,75 3995 3695
ПН 15 по ГОСТ 2000 2000 120 0,38 0,95 5295 4895
ПН 20 2200 2200 160 0,57 1,1 9595 8795
ПН 20 по ГОСТ 2500 2500 120 0,59 1,48 10995 9995
ПН 25 2750 2750 180 1 2,4 18995 17795
ПН 25 по ГОСТ 3000 3000 160 1,14 2,8 19995 17995
Д 25-20 3000 2500 120 0,9 2,25 16995 16995
Д 25-25 3000 3000 140 1,26 3 26995 26995
Д 30-20 3500 2500 120 1,05 2,62 18995 18995
Д 40-30 4500 3500 150 2,36 5,9 45995 45995
Д 45-40 5000 4500 150 3,38 8,4 65995 65995
Почему стоит купить железобетонные крышки колодцев?

Железобетонные крышки для колодцев – это непременный атрибут при создании следующих систем:

— дренажных;
— смотровых;
— канализационных;
— водопроводных.

Крышка для колодца может иметь разные характеристики, все зависит от технических характеристик системы коммуникации, ее специфики, эксплуатации, состава комплекса сборного железобетонного колодца. Производятся они для сетей водоснабжения, теплоснабжения и канализации из армированного бетона М200 или М300 с армированием сеткой.
Для данных систем всегда необходимы плиты днища перекрытия колодцев. Они отличаются круглой конфигурацией и оснащены специальным отверстием для монтажа люка. Плиты перекрытия колодцев ПП имеют внутренний диаметр в 0.7 м, который обеспечивает легкое проникновение через горловину.

Крышки колодцев и их типы

Наш завод специализируется на изготовлении всех типоразмеров плиты перекрытия колодцев:

— 1ПП;
— 2ПП;
— 3ПП;
— 4ПП.

Производство осуществляется согласно ГОСТ 8020-90. У нас можно купить плиты ПП с разными отверстиями и разнообразных форм. Также мы изготавливаем крышки для колодцев с несколькими отверстиями.

Еще одной из важных частей считаются крышки днища колодцев. Это основание снизу, которое способно выдержать массу всей конструкции сооружения. Плиты днища колодцев от компании PSK-SK отличаются округлой формой  и сделаны из тяжелого бетона с мощным армированием. На изготовление плит днища идет бетон марки не меньше М200. У нас можно купить плиты с маркировкой ПН10, ПН15 и ПН20.

Вся продукция бетонного завода PSK-SK характеризуется долговечностью и высокой надежностью. Мы всегда следим за всем процессом создания продукции, поэтому гарантируем ее качество.

Продукты с низкой адгезией ячеек PrimeSurface

Эксперименты

Для тканевой инженерии и регенеративной медицины:

Regenova — это новая роботизированная система, которая облегчает изготовление трехмерных клеточных структур путем размещения клеточных сфероидов в тонких игольчатых массивах в соответствии с заранее разработанными трехмерными данными. Ниже приведены примеры таких производств с использованием планшета PrimeSurface ™ 96U компании S-BIO и 3D-принтера Bio, Regenova (Cyfuse Biomedical K.К.) .; нервная 3D-ткань и 3D-ткань с мезенхимальными стволовыми клетками.

Нейронная 3D ткань

Источники клеток Нейральные предшественники, происходящие от hiPSC
Количество ячеек 4 X 10 4 клеток / лунку
Питательная среда Для нервных клеток
Продолжительность созревания на планшете 2 дня
3D-структура напечатанной 3D-ткани с печатью 3 X 3 X 2
Количество сфероидов, используемых для 3D-ткани 18 сфероидов
Срок созревания после 3D-печати Удаление игл через 9 дней после 3D-печати

3D ткань после удаления игл

3D ткань с мезенхимальными стволовыми клетками

Источники клеток Мезенхимальные стволовые клетки, полученные из жировой ткани человека (hADSC)
Количество ячеек 5 X 10 3 клеток / лунку
Питательная среда для MSC
Продолжительность созревания на планшете 2 дня
3D-структура напечатанной 3D-ткани Круглая форма с 48 сфероидами x 10 слоев
Количество сфероидов, используемых для 3D-ткани 480 сфероидов
Срок созревания после 3D-печати Удаление игл через 6 дней после 3D-печати

После 3D печати, сверху

После 3D-печати, вид сбоку

3D ткань после удаления игл

Пример применения дифференцировки hES-клеток с использованием PrimeSurface


Однородные сфероиды образуются спонтанно в течение одного дня для эффективного агрегатного образования ES-клеток с использованием PrimeSurface

Самообразование нервной ткани сетчатки из совокупности человеческих ES-клеток с использованием PrimeSurface MS-9096V

Культуральная тарелка PrimeSurface MS-9096V
Тип ячейки ЭС клетки человека (штамм ХЭС-1)
Плотность высева 9000 ячеек / лунку
Питательная среда GMEM + KSR + NEAA + 2ME + 20 мкм Y-27632
Культурная среда 5% CO2, 37 ° C

Ресурс данных

  • Изображение a-c
    Отделение технологии стволовых клеток человека Центр биологии развития RIKEN

Артикул

  • Самообразование оптических чашечек и хранимой стратифицированной нервной сетчатки из человеческих ESCs; НаканоТ, Андо С. , Таката Н., Кавада М., Мугурума К., Секигути К., Сайто К., Йонемура С., Эйраку М., Сасай Ю. Cell Stem Cell, 10 (6), 771-785 (2012)
  • .

Пример оценки эффективности противоопухолевого препарата с использованием PrimeSurface

Тип ячейки MCF-7 (Клетка рака груди человека)
Противоопухолевый препарат 5-фторурацил (5-FU)

Ресурс данных

Nishio Lab., Кафедра биологии генома, Медицинский факультет Университета Кинки

Пожалуйста, проверьте дополнительные данные для более детального примера применения.

Volume 0 bind

Пользователь вызывает одну или две больших змеи, которые выползают из его рукавов и обвиваются вокруг врага, захватывая их. Это отличная техника для поимки кого-либо живого или для нанесения ущерба путем сжатия, и если ситуация требует этого, змеи могут укусить жертву своими ядовитыми клыками. При заранее указанном вызове процедура может быть сокращена за счет использования крови на … 15 ноября 2014 г. · Пожалуйста, обратитесь к таблицам данных различных производителей, чтобы выбрать подходящий шприцевой фильтр с: (1) низким удерживаемым объемом; (2) достаточно большой размер для объема выборки; (3) химически совместимый с раствором и материалом, который вы собираетесь вводить через него, и (4) наименьшее сродство связывания с белками (если применимо).

Каковы по крайней мере четыре (4) ограничения на использование корреляции и регрессии _

2 сентября 2020 г. защита федеральной информации и информационных систем.Раздел 3553 (b) (2) раздела 44 Кодекса США уполномочивает Секретаря Министерства внутренней безопасности (DHS) разрабатывать и контролировать выполнение … 4 декабря 2020 г. · Обновлено 4 декабря 2020 г. в # dev-среда, #docker. Настройка Docker для Windows и WSL для безупречной работы С помощью пары настроек WSL (подсистема Windows для Linux, также известная как Bash для Windows) можно использовать с Docker для Windows.

Eecs 281 lab 4

200 лет доверия.Фармакопея США (USP) была создана почти 200 лет назад с целью завоевать доверие там, где это наиболее важно: в лекарствах, добавках и продуктах питания, от которых люди полагаются для своего здоровья. The Binding of Isaac: Rebirth — это римейк The Binding of Isaac, сложной приключенческой игры, в которой сочетается генерация случайных уровней в roguelike-играх (сложные игры с ролевыми характеристиками, где, если вы умрете, вы начинаете с самого начала) с подземельями, вдохновленными сага о Zelda. Зацепившиеся пользователи потратили на игру сотни часов.

Револьвер не работает

Daily Cover Story: Fintech-стартапы открывают новые рыночные возможности для товарного брокера Murabahah, поскольку объем транзакций от банков падает. ГЛОБАЛЬНО: Бизнес традиционных исламских финансовых институтов может пострадать из-за пандемии, но для брокера Eiger Trading Advisors это снижение объема транзакций было сведено на нет резким увеличением числа сделок в сфере финансовых технологий … Канал звуковых уведомлений меняет громкость аудиоприемника до значения, определенного в свойстве notificationVolume объекта, и восстанавливает его после завершения воспроизведения.Обратите внимание, что привязка Sonos имеет ограничение на 20 секунд для звуков уведомлений. Любой более длинный звук будет отключен.

Подавители, разрешенные в Идахо

B. Связывание с белками Многие лекарства связываются с белками плазмы. Слабые кислоты и нейтральные препараты связываются особенно с альбумином, тогда как основные препараты имеют тенденцию связываться с альфа-1-кислотным гликопротеином (оросомукоидом). Некоторые лекарства даже связываются с белками поверхности красных клеток. 1. Воздействие на распределение лекарственного средства Только та часть концентрации лекарственного средства в плазме, которая находится в свободном состоянии. Formax FD 2036 AutoSeal представляет собой удобный в использовании герметик большого объема, идеально подходящий для обработки моноблочных почтовых сообщений, чувствительных к давлению.Он оснащен цветной сенсорной панелью управления, на которой вместо текста используются признанные во всем мире символы, а также имеется шестизначный сбрасываемый счетчик. Со скоростью до 11000 форм в час, емкостью бункера до 350 форм и возможностью …

Тестовая форма главы 1 по геометрии 2c

принято v2.0 2020 -05-29 16:49:28 UTC 51 2020-07-23 17:15:44 UTC 5 2020 2317 Эрик Wh Система моделирования динамики поверхности сообщества Хаттона, Колорадский университет в Боулдере, США 0000-0002-5864-6459 Марк Д. Система моделирования динамики поверхности сообщества Piper, Колорадский университет в Боулдере, США 0000-0001-6418-277X Система моделирования динамики поверхности сообщества Грегори Э. Такера, Университет Колорадо … Портал для клиентов Red Hat предоставляет доступные знания, опыт и рекомендации через подписку Red Hat.

Укажите геометрию электронных пар и геометрию молекул для каждого из шести соединений.

ДОБРО ПОЖАЛОВАТЬ В MAC.АРХИВ! Прочтите / mac / 00introduction, если вы еще этого не сделали. Вы также можете прочитать /mac/00help/archivepolicy.txt. Например, в эксперименте VI, 3 и 4 при парциальном давлении кислорода 55 мм увеличение давления углекислого газа с 3 мм до 25 мм вызывало только уменьшение поглощения кислорода с 10,4 объемных процентов до 9,6 объемных процентов, а в эксперименте IV, от 4 до 5 при давлении кислорода 150 мм, давлении углекислого газа 75 мм только уменьшение кислорода . ..

N920t комбинация двоичных 6

Плотность состояний на единицу Объем на единицу энергии находится делением на V (объем кристалла).g (E) 2D становится: Как указано изначально для массы электрона, m m *. Таким образом, 2 2 2 2 () 2 h h π π m L L m g E D = = 2 * () 2 πh m g E D = Существенно, что 2D плотность состояний не зависит от энергии. Сразу, как верх …

[v1.0.48 +]: прокрутите влево или вправо. Требуется Windows Vista или новее. Их можно использовать в качестве горячих клавиш для некоторых (но не для всех) мышей, у которых есть второе колесо или которые поддерживают наклон колеса в любую сторону. В некоторых случаях для управления этой функцией необходимо использовать программное обеспечение, поставляемое с мышью.

Ford Falcon, 9 дюймов, задняя часть

См. Сочетания клавиш # Xorg, чтобы привязать следующие команды к клавишам громкости: XF86AudioRaiseVolume, XF86AudioLowerVolume и XF86AudioMute. Сначала выясните, какой приемник соответствует аудиовыходу, которым вы хотите управлять. Чтобы перечислить доступные приемники: $ pactl listinks short Предположим, нужно использовать приемник 0, для увеличения объема:

Рекомендуемые привязки. Бинд в прыжке. Привязка переключателя громкости. Изменить привязку масштаба карты. Увеличьте громкость при перемещении привязки. Переключить Net_graph с привязкой к табло.

ANSYS прямая оптимизация

Мастера кибербезопасности Канада онлайн

Каретка Radrover

Духовная деятельность

Отчет об аренде Zumper область

Гидравлический регулирующий клапан Case 1845c

Zombie Gunship Survival 1.5 1.1 mod apk неограниченные деньги

9000

высокое отношение поверхности мембраны к объему … связывание с белками плазмы (человека и крысы) при двух концентрациях 1 и 10 мкМ, … 0 0,002 0,004 0,006 0.008 0,01 …

Например, если у вас есть глубина 7 дюймов, деление на 12 даст вам 0,583333 фута (или около 0,6 фута с округлением). Шаг 3 Умножьте ваши три измерения (самая длинная сторона, самая короткая сторона и глубина), чтобы найти объем в кубических футах.

Байпы регулировки громкости. Скрипт конфигурации для Counter-Strike: Source. 0.7 «bind kp_uparrow» volume 0.8 «bind kp_pgup» volume 0.9 «bind KP_INS» volume 0 «bind kp_del» volume 1 «.

Таким образом, уровни fCS были рассчитаны на основе их общего CS и уровней кортизол-связывающего глобулина (CBG).CBG снизился примерно на 30% после 6 и 12 месяцев заместительной терапии hGH (n = 20, P <0,01). Наблюдалась значимая отрицательная корреляция между deltaCBG (CBG6months-CBGbaseline) и deltaIGF-I (IGF-I6months-IGF-Ibaseline) (P = 0,04).

POVME 2.0 — это значительно улучшенная версия нашего популярного алгоритма для характеристики объемов и формы макромолекулярных (например, белков) связывающих карманов. В версии 2.0 реализован ряд улучшений, включая повышение скорости за счет интеграции numpy / scipy и необязательного использования нескольких процессоров; лучшая точность за счет опционального. ..

Портированный прием camaro6

Калькулятор столбов для столбов

Тест двойного щелчка Logitech

Вермонт

Уровень преступности по сравнению с другими штатами

грязевой двигатель на продажу Craigslist

Custom cable building

Netgear lb1120 Устранение неполадок

Angry noise roblox id

Society

Система управления школой в asp net core github

Найдите два последовательных нечетных целых числа, сумма которых составляет 176

Trc20 умный кон tract

Scp классы

Изюм на солнце акт 1 сцена 1 вопросы и ответы pdf

Sightmark Ghost Hunter Крепление для шлема

Cowboy

c

Huysken van riel pigeons на продажу

1904 индийская голова пенни

Kastmaster tube tail

Openshift statefulset api

Тоничность и растительная клетка

d Lycoming oul 320 e2

Beach house pl ANS на сваях

Бумажные шаблоны для американских горок бесплатно

Proprio direct magog

Паспорт датчика Pir

Когда реакции нейтрализации могут быть использованы в лабораторных условиях_

Динамик Harman kardon продолжает отключаться

Компания с тремя сегментами имеет доллар 10000

india

Avakin life ice walker eyes

Brass stab vst

Комплект резиновых ножек HP

Что можно поставить под мини-холодильник на ковер

Продуктивное нападение приводит Delphi к победе в групповом чемпионате над Сигером, 7-3

DELPHI, Ind. (WLFI) «Дельфи» защищала свое домашнее поле и завоевала титул чемпиона Секции № 38 в классе 2А, ​​победив Сигера со счетом 7: 3 в понедельник вечером.

Чейз Лонг возглавил Оракулов, появившись 3-4 раза на пластинке и один RBI. Пейтон Рот добавил два дубля RBI в 4-м иннинге, чтобы разбить счет 2: 2. После двойника Рота Оракулы никогда не оглянулись назад.

Кейд Уокер Сигера забил в конце 4-го иннинга.Патриоты завершают сезон 2021 года с общим показателем (21-5).

The Oracles сыграют в Рочестере в региональном турнире Центрально-католической церкви 5 июня в 13:00. Победитель этой игры сыграет с победителем Вапахани / Мэдисон-Грант в региональном финале.

ДРУГИЕ ОЦЕНКИ:

Класс 3A

Секция 20 — Северо-западная

Twin Lakes def.Вест Лафайет, 4-2.

Северо-западное опр. Западная, 6-5

Северо-западное опр. Твин Лейкс, 8-5 (Чемпионшип)

Класс A

Секция 54 — Граница

Россвилль деф. Шеридан, 3-1

Клинтон Центральное опр. Три-Централ, 2-0

Клинтон Центральное опр. Россвилл, 6-2 (Чемпионат)

Oregon Tech вернулись в национальный чемпионат после 10-летнего перерыва

КОЛУМБУС, Джорджия — Спустя 10 долгих лет команде по софтболу Oregon Tech Owls осталась одна победа от завоевания национального титула.Двух пробежек в первом иннинге оказалось достаточно для OIT, чтобы пройти к своей первой титульной игре NAIA World Series с 2011 года.

Колотящие Совы вышли резко, чтобы начать игру. Маккенна Армантраут нарисовала прогулку, за которой последовал сингл Kaila Mick. Они оба поднялись на 60 футов благодаря удачно поставленной жертвенной головке Обри Бусингера. Уходящая героиня Мэгги Бакхольц продолжала отбивать сцепление с синглом RBI по центру, чтобы поставить Armantrout и дать Oregon Tech преимущество 1-0.

После того, как Криста Уорд нанесла удар, Грег Стюарт объявил о двойном перехвате. После того, как бросок снизился до второго, Мик оторвался от ворот с третьего и забил после того, как кэтчер был вызван за препятствие. ОИТ повел 2: 0 в нижней половине тайма.

Колледж Айдахо получил бы один обратно в третьем, но, кроме того, Сара Абрамсон показала хорошую подачу, и ее защита поддержала ее, когда это было необходимо. Несколько раз на протяжении игры туз Совы выбрасывал из строя пробки, которые могли бы сделать игру намного ближе.

Но, заняв первое место в пятой позиции, Oregon Tech воспользовалась парой ошибок Yotes и заработала две попытки.С преимуществом 4: 1 «Совы» использовали круиз-контроль и впервые за десять лет пробили свой билет на матч национального первенства.

«Честно говоря, это немного сюрреалистично — думать, что мы зашли так далеко, до этого момента», — сказал Басинджер NewsWatch 12 Sports после их победы. «Оглядываясь назад на февраль, когда мы начали, это было просто рукой, чтобы добраться до национального чемпионата, и теперь мы на самом деле здесь, и сейчас это действительно просто сюрреалистично.«

Oregon Tech ожидает команду, которая завтра выйдет из сетки проигравших, первая игра объединит Южный Орегон и Бетани в 13:00 по тихоокеанскому стандартному времени. В 16:00 по тихоокеанскому стандартному времени победитель этой игры встретится с Колледжем Айдахо, чтобы узнать, кто сыграет с «Совами» на национальном чемпионате.

AUSTOR Шлифовальные листы для деталей с мышью, 60 штук Подушечки для шлифования 12 отверстий Шлифовальная машина с крючками и петлями в ассортименте 60/80/120/180/240/320 зернистости, подходящая для Black and Decker Detail Принадлежности для ручных шлифовальных машин co Принадлежности для шлифовальных машин

AUSTOR Шлифовальные листы для деталей на 60 штук Подушечки для шлифовальных листов с 12 отверстиями Шлифовальная бумага с крючками и петлями в ассортименте 60/80/120/180/240/320 Зернистость, подходящая для шлифовальных листов Black and Decker

AUSTOR 60 шт. Шлифовальные листы для мышей Подушечки с 12 отверстиями Шлифовальная машина с крючками и петлями Наждачная бумага в ассортименте с зернистостью 60/80/120/180/240/320 для ручной шлифовальной машины Black and Decker Detail: Инструменты и предметы домашнего обихода. AUSTOR 60 шт. Шлифовальные листы для деталей с мышью Подушечки для шлифовальных листов с 12 отверстиями Шлифовальная машина с крючками и петлями Наждачная бумага в ассортименте 60/80/120/180/240/320 зерен, подходящая для шлифовальной машины Black and Decker для рук: инструменты и товары для дома. Практическая зернистость — включая 6 видов наждачной бумаги с разным зерном, от крупной до мелкой: 60 # 80 # 120 # 180 # 240 # 320 #, 10 листов для каждой зернистости, всего 60 листов, которые могут удовлетворить ваши требования для различных материалов и областей применения Технология подложки — шлифовальные листы на липучке, легко и быстро наклеиваются на шлифовальный станок。 Размер: размер наждачной бумаги для мыши размером около 135 * 95 мм, предварительно перфорированный с 12 отверстиями для удаления пыли, подходит для шлифовального станка 135 мм, пожалуйста, проверьте, есть ли нижняя пластина шлифовальной машины соответствует размеру шлифовальных тарелок или нет。 Высококачественный материал — шлифовальные листы AUSTOR изготовлены из абразивного материала на основе оксида алюминия, прочные и антистатические, чем крупнее зерно, тем лучше эффект полировки。 Широкое применение — мышь AUSTOR шлифовальные шкурки идеально подходят для удаления ржавчины, полировки металла, дерева, пластика, кожи, резины, стекла и т. д. Шлифовальные листы с деталями для мыши AUSTOR 60。 。Технические характеристики 。Абразив: оксид алюминия 。Размер: 135 * 95 мм 。Цвет: красновато-коричневый . Предварительно перфорированные с 12 отверстиями 。Технология задней части: липучка。 。Пакет включает шлифовальные листы 60 * 10 шлифовальных листов 。80 * 10 шлифовальных листов 。120 * 10 шлифовальных листов 180 * 10 шлифовальных листов 。240 * 10 шлифовальных листов 。320 * 10。。。






AUSTOR 60 штук Шлифовальные листы для мышей Подушечки с 12 отверстиями Шлифовальная машина с крючками и петлями в ассортименте 60/80/120/180/240/320 Зернистость, подходящая для ладонной шлифовальной машины Black and Decker

Античная латунь Маленькая zsjhtc Creative Lion Head Винтажные антикварные ручки для дверных ящиков шкафа с вытяжными кольцами, ручки, 2 шт. Бежевая осина Creative 30274-2 5 Ширина дна Переходный дизайн Маленькая люстра в форме колокольчика Набор абажуров 3 x 5 x 4.YG-1 E5522060 Твердосплавная концевая фреза Alu-Power, длинная спираль, 45 градусов, 6,0 мм, длина 57 мм, 2 зуба, без покрытия. CBB61 Run Capacitor 450V AC 1.5uF 2 Wire Металлизированные полипропиленовые пленочные конденсаторы 5 шт. 100 шт. В коробке Крепежные инновации 7300 Power-Stud-1/4-дюймовый на 1-3 / 4-дюймовый Расширительный анкер из нержавеющей стали 304 из нержавеющей стали, колода случайного цвета Настенный фонарь Baost на солнечной энергии Светодиодный настенный светильник Наружная дорожка Садовый забор Ландшафтная стена Лампа для передней двери гаража, 57Y02 Задние крышки для сварки TIG 57Y04 Короткие задние крышки Набор разного размера для сварочной горелки TIG WP-17/18/26 Средний 5pcs57Y02 (Длинный) Длинный 57Y03.Класс ограничения тока CC Отклоняющий картридж предохранители CCMR30 от Littelfuse 600V Midget Time Delay 10 PACK 30 Amp LITTELFUSE CCMR-30 или CCMR030 30A, ASR Outdoor плетеный веревка для выживания Technora 950 фунтов различной длины, натуральная, WallPops NU1661 Photo Opp Frames Peel and Stick Wallpaper Multi-Color. Symmons GIDDS-133963 Temptrol Diverter Volume Spindle TA-25A Белый. 22 мм 220V 10A Переключатель мгновенного действия Светодиодный переключатель сброса света с плоской головкой Зеленый кнопочный переключатель Вкл.


Роль Убенимекса при раке желудка.

Введение

Рак желудка (РЖ) — одна из самых распространенных опухолей желудочно-кишечного тракта. 1 Международное агентство по изучению рака сообщило о примерно 19,3 миллионах новых случаев рака во всем мире в 2020 году и примерно 10 миллионах смертей. В Китае заболеваемость GC занимает четвертое место среди злокачественных опухолей, тогда как смертность от GC занимает второе место. Заболеваемость GC в Китае составляет почти половину всех случаев заболевания во всем мире, что серьезно угрожает жизни и здоровью людей. 2 Начало GC незаметно, и ранние поражения ограничиваются слизистой и подслизистой оболочкой. 3 Таким образом, у большинства пациентов с РЖ диагностируется запущенная стадия, из которых 5-летняя выживаемость после операции составляет менее 30%. 4 Как и многие злокачественные новообразования, GC склонен к метастазированию в другие органы, такие как печень и легкие. 5 Чтобы снизить уровень смертности от ГК, необходимы новые методы ранней диагностики и новая таргетная терапия для предотвращения метастазов.

Рисунок 1 Продолжение.

Рисунок 1 Продолжение.

Рисунок 1 Убенимекс значительно ограничивает миграцию и инвазионный потенциал клеток GC. ( A D ) Анализы заживления ран, показывающие снижение скорости заживления царапин в клетках желудка человека MGC-803, SGC-7901, BGC-823 и MKN-28.Показаны репрезентативные изображения. ( E и F ) Столбчатый график отображает сводную информацию о показателях заживления. ( G и I ) Анализ инвазии или миграции через лунки с 0,12 мг / мл или 0,25 мг / мл Убенимекса для клеток желудка человека MGC-803, SGC-7901, BGC-823 и MKN-28. Показаны микрофотографии пораженных или мигрировавших опухолевых клеток. Бар = 100 мкм. ( H и J ) Столбчатый график количества инвазированных или мигрировавших клеток. ( K N ) Вестерн-блоттинг-анализ экспрессии E-кадгерина, N-кадгерина и виментина в клетках желудка человека MGC-803, SGC-7901, BGC-823 и MKN-28.Столбчатый график показывает относительное значение в градациях серого каждой полосы по сравнению со значением β ‑ актина. * P <0,05, ** P <0,01 и *** P <0,001.

CD13, также называемая аминопептидазой N (APN), принадлежит к семейству мембранных металлопротеиназ типа II и экспрессируется на различных опухолевых клетках. CD13 использует протеолитические ферменты, способствующие васкуляризации, пролиферации, инфильтрации и метастазированию опухолевых клеток. 6 Нет подробных исследований прямого противоопухолевого эффекта Убенимекса, но появляются доказательства, указывающие на комбинированное применение с химиотерапевтическими препаратами. В частности, Убенимекс оказывает синергетическое действие с 5-фторурацилом и улучшает химиотерапевтический эффект 5-фторурацила в отношении рака печени, почек, рака груди и других опухолей. 7 Более того, Убенимекс способствует апоптозу, индуцированному химиотерапией, и ингибирует экспрессию транспортеров АТФ-зависимого белка-переносчика (ABC), тем самым обращая вспять множественную лекарственную устойчивость в клетках гепатоцеллюлярной карциномы (HCC) путем воздействия на CD13. Однако, как единственный ингибитор CD13, представленный в настоящее время на рынке, Убенимекс используется только в качестве вспомогательного средства в сочетании с химиотерапией в качестве иммуномодулирующей терапии. 8 Нет сообщений о связи между экспрессией CD13 и метастазами GC, не говоря уже о ингибировании метастазов GC, опосредованном Убенимексом.

NGFI-A-связывающий белок 1 (NAB1) принадлежит к семейству NGFI-A / Egr-связывающих белков, 9 , которые действуют как корепрессоры для взаимодействия с Egr2 и необходимы для правильной координации образования миелина. 10,11 Убедительные доказательства показали, что NAB1 взаимодействует с HIC-1, обеспечивая нормальную секрецию Wnt в качестве адаптера для множественных белков, чтобы взаимодействовать с F-actin, чтобы регулировать различные процессы в нервной системе. 12 NAB1 также является корепрессором транскрипции, и ранее он был идентифицирован как ген, реагирующий на глюкокортикоиды, в гладкомышечных клетках хомячка, а также может быть корепрессором, влияющим на воспалительные реакции. 13 Однако мало сообщений об исследовании NAB1 в опухолях, и ни одно исследование не показало, что NAB1 участвует в ингибировании метастазирования GC.

Активированные митогеном протеинкиназы (MAPK) широко активируются во многих типах клеток, которые играют ключевую роль в стимулировании роста и метастазирования опухоли.Как сообщается, IDO1 и COL12A1 синергетически способствуют метастазированию GC, образуя петлю положительной обратной связи через путь MAPK и CXCR7, который рассматривался как хемокиновый рецептор для SDF-1. 14 Киназа, регулируемая внеклеточными сигналами (ERK), является основной киназой семейства MAPK, которая регулирует пролиферацию, апоптоз, дифференцировку и прогрессирование различных раковых клеток человека. Кроме того, инактивация пути MAPK / ERK снижает индуцированный SMARCE1 рост и подвижность GC-клеток. 15 Известно, что сигнальный путь MAPK играет роль в регуляции пролиферации, инвазии и метастазирования опухолей. 16,17 Однако несколько исследований показали взаимосвязь между NAB1 и MAPK в клетках GC.

Здесь мы продемонстрировали, что Убенимекс ингибирует метастазирование GC путем подавления экспрессии CD13. Кроме того, мы провели скрининг с высоким содержанием (HCS) и обнаружили, что NAB1 является предполагаемой мишенью CD13, с помощью которой Убенимекс подавляет GC. Кроме того, Убенимекс может ингибировать метастазирование GC через путь CD13 / NAB1 / MAPK. В совокупности эти результаты показали, что Убенимекс является многообещающим агентом, который может ингибировать метастазирование GC.

Методы

Реактивы и антитела

Убенимекс (чистота ≥99,9%) был приобретен у Shenzhen Main Luck Pharmaceuticals Inc. (Шэньчжэнь, Китай), растворен в ДМСО и затем разбавлен стерилизованной средой Игла, модифицированной Дульбекко (DMEM). Конечная концентрация ДМСО в культурах была <0,1%. Кроличьи моноклональные антитела против ANPEP (CD13; Abcam Biotechnology, Кембридж, США; каталожный номер ab108382; 1: 3000), NAB1 (Abcam; каталожный номер ab150389; 1: 3000), p ‑ MAPK (Abcam; кат.нет. ab151279; 1: 250), E-кадгерин (Elabscience Biotechnology Co., Ltd, Ухань, Китай; номер по каталогу E-AB-53267; 1: 1000), N-кадгерин (Elabscience; номер по каталогу E-AB-70061. ; 1: 1000), виментин (Elabscience; каталожный номер E-AB-18212; 1: 2000) и β-актин (Proteintech, Rosemont, IL, USA; каталожный номер 20536-1-AP; 1: 3000 ) были использованы в этом исследовании. Все вторичные антитела (каталожный номер SA00001-2; 1: 3000) были приобретены в Proteintech Biosciences.

Культура клеток

Линии клеток желудка человека (MKN-28, MGC-803, BGC-823 и SGC-7901) были приобретены в Банке клеток Китайской академии наук (Шанхай, Китай) и культивированы в среде DMEM (Гибко, Карлсбад, Калифорния, США) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (Gibco), 100 Ед / мл пенициллина и 100 мкг / мл стрептомицина (North China Pharmaceutical Co. , Inc., Шицзячжуан, Китай) в увлажненном инкубаторе с 5% CO 2 при 37 ° C.

Конструирование плазмид и амплификация генов

Плазмиды сверхэкспрессии NAB1 (номер в GenBank NM__001321313), меченные усиленным зеленым флуоресцентным белком (EGFP) (CD13; номер в GenBank NM_001150) и плазмиды отрицательного контроля (контрольная плазмида с пустым вектором; CMV-MCS-3FLAG-IRES-EGFP-SV40-SV40 ) были использованы в этом исследовании. Мы провели поиск кодирующей последовательности человеческого NAB1 в GenBank и разработали праймеры для ПЦР.Следующие пары праймеров были сконструированы на основе последовательностей мРНК ANPEP и NAB1: ANPEP-p1, 5ʹ-TACCGGACTCAGATCTCGAGCGCCACCATGGCCAAGGGCTTCTATATTTCCAAG-3ʹ; ANPEP-p2, 5ʹ-TCCTTGTAGTCCATGGATCCTTTGCTGTTTTCTGTGAACCACTGGAGCAC-3ʹ; NAB1-p1, 5ʹ-TACCGGACTCAGATCTCGAGCGCCACCATGGCTGCGGCCTTACCCAG-3ʹ; и NAB1-p2, 5ʹ-TCCTTGTAGTCCATGGATCCTCTTGAATCTTCAGGCTCTG-3ʹ. Последовательности праймеров для идентификации ПЦР были следующими: ANPEP-p3, 5ʹ-CAGTACATGCCCTGGGAGGC-3ʹ; ANPEP-p4, 5ʹ-AACGCACACCGGCCTTATTC-3ʹ; NAB1-p3, 5ʹ-CTCTGTGGCTGAGTGTGTGG-3ʹ; и NAB1-p4, 5ʹ-AACGCACACCGGCCTTATTC-3ʹ.Смесь для ПЦР содержала 2 мкл матрицы кДНК, 1 мкл праймера (10 мкмоль / л), 10 мкл смеси для ПЦР и dH 2 O до общего объема 20 мкл. Программа ПЦР была следующей: 94 ° C в течение 5 мин; 40 циклов 94 ° C в течение 30 с, 58 ° C в течение 30 с и 72 ° C в течение 5 минут; и окончательное удлинение при 72 ° C в течение 5 мин. Конечные продукты ПЦР разделяли электрофорезом с использованием 1% полиакриламидных гелей, а целевой фрагмент очищали и выделяли с использованием набора для экстракции из геля агарозы (Watson Biomedical Inc., Шанхай, Китай).

Трансфекция клеток

Плазмиды со сверхэкспрессией

ANPEP (CD13) и NAB1 использовали для трансфекций клеток. Клетки MKN-28, MGC-803, BGC-823 и SGC-7901 высевали в 6-луночные планшеты для культивирования клеток и культивировали до 80% слияния. Затем добавляли реагент липофектамин 3000 (Thermo Fisher Scientific, Inc., США) и клетки трансфицировали плазмидами в течение 24 часов при 37 ° C. Процедуры выполнялись в соответствии с инструкциями производителя.

Анализ генных чипов и HCS функции клеток

Генный чип Affymetrix Clariom TM S использовали для определения спектра экспрессии генов клеток MKN-28 до и после обработки Убенимексом и оценки изменений в экспрессии генов.В этом исследовании скорость миграции клеток MKN-28 оценивалась с помощью скрининга высокого содержания (HCS). Более того, подвижность выбранных генов снижалась более чем в два раза, о чем ранее сообщалось в предыдущей литературе. Эффект подавления экспрессии CD13 на уровне мРНК вышеуказанных генов наблюдали в эксперименте с HCS, и был выбран важный ген с наиболее очевидным изменением экспрессии в процессе контроля метастазов GC.

Вестерн-блоттинг

Общий белок из клеток GC, обработанных Убенимексом, экстрагировали с использованием буфера для лизиса RIPA, содержащего фенилметансульфонилфторид (PMSF; Solarbio Biotechnology Co., Шанхай, Китай) и ингибитор протеинфосфатазы (Solarbio) после промывания клеток ледяным фосфатно-солевым буфером (PBS). Концентрацию белка измеряли с помощью анализа белка BCA (Solarbio) после центрифугирования при 10000 об / мин в течение 8 минут. Равные количества белка разделяли на 10% полиакриламидных гелях SDS и затем переносили на мембраны из поливинилиденфторида (PVDF) (Millipore, Billerica, MA, USA), которые затем блокировали в 5% обезжиренном молоке в течение 2 часов при комнатной температуре.Затем мембраны инкубировали в течение ночи при 4 ° C со следующими первичными антителами: анти-ANPEP, анти-фосфо-MAPK, анти-NAB1 и анти-β-актином. Затем мембраны трижды промывали трис-буферным физиологическим раствором-твином (TBST, Solarbio) и инкубировали с вторичными антителами, конъюгированными с пероксидазой хрена, при комнатной температуре в течение 1,5 часов. Данные анализировали с помощью программного обеспечения Bio-Rad Quantity One v4.62 (Bio-Rad Laboratories Co., Ltd.). Все анализы вестерн-блоттинга выполнялись не менее трех раз.Значения оттенков серого целевых полос анализировали с помощью программного обеспечения ImageJ (NIH Image, Bethesda, MD, США).

Анализаторы Transwell

Способность культивированных клеток к миграции и инвазии оценивали с использованием трансвелл-камеры (8 мм, 24-луночный формат; Corning) с разбавленным матригелем или без него (BD Biosciences, Сан-Хосе, Калифорния). Смесь 1: 8 матригель: DMEM (40 мкл) добавляли в верхнюю камеру при 37 ° C в течение 1 часа. Затем в верхнюю камеру добавляли Убенимекс (0,12 мг / мл) и клетки GC (3 × 10 5 клеток / мл), которым не хватало сыворотки в течение 10 часов.Среду с добавлением 20% FBS помещали в нижнюю камеру. После инкубации при 37 ° C с 5% CO 2 в течение 24 часов клетки, оставшиеся на верхней поверхности мембраны, осторожно протирали ватным тампоном, а нижнюю камеру трижды промывали PBS. Клетки фиксировали 4% параформальдегидом в течение 1 часа, а затем окрашивали кристаллическим фиолетовым в течение 40 минут. Количество мигрировавших клеток фотографировали и подсчитывали.

Анализы заживления ран

Анализ заживления ран использовали для определения способности клеток желудка к миграции.Клетки (5 × 10 5 клеток на лунку) добавляли в 6-луночные планшеты и инкубировали в течение ночи до 100% конфлюэнтности. На пластинах наносили царапину с помощью пипетки на 10 мкл. Клетки дважды промывали PBS, а затем в планшеты добавляли полную среду и 0,12 мг / мл или 0,25 мг / мл Убенимекса. Затем клетки инкубировали при 37 ° C в атмосфере с 5% CO 2 в течение определенного времени. Впоследствии были получены изображения и измерена площадь заживления.

Статистический анализ

Статистический анализ данных проводился с помощью GraphPad Prism 7.0 (Inc., Ла-Хойя, Калифорния, США). Данные были представлены как среднее ± стандартное отклонение или стандартная ошибка среднего, и они были оценены с помощью одностороннего дисперсионного анализа. Различия считались достоверными при P <0,05. Статистически значимые значения P были представлены как * P <0,05, ** P <0,01 и *** P <0,001. Эксперименты были выполнены в трех повторностях и независимо, и данные были представлены в трех повторностях из одного независимого эксперимента.

Результаты

Убенимекс значительно ограничивает миграцию и потенциал инвазии клеток GC

Во-первых, был проведен анализ заживления ран, чтобы определить, подавляет ли Убенимекс метастазы GC.Как показано на рис. 1A – F, Убенимекс подавлял способность к миграции клеток GC, и ингибирующий эффект варьировал при различных концентрациях (рис. 1A – F). Кроме того, результаты, полученные в ходе трансвеллентных анализов, подтвердили, что по сравнению с контрольной группой количество инвазированных и мигрирующих клеток GC, обработанных Убенимексом, было уменьшено (рис. 1G и I). Наши результаты показали, что Убенимекс ослабляет инвазионный и миграционный потенциал клеток MKN-28, MGC-803, BGC-823 и SGC-7901, а способность Убенимекса ослаблять метастазы GC увеличивалась с увеличением концентрации лекарственного средства (рис. 1H и J).После обработки клеток GC с различными концентрациями Ubenimex и экстракции белка использовали анализ вестерн-блоттинга для идентификации экспрессии белка EMT-маркеров в различных линиях клеток GC. В соответствии со сниженной экспрессией N-кадгерина, экспрессия белка виментина, определенная с помощью Вестерн-блоттинга, была заметно ниже в клетках GC, обработанных Убенимексом, чем в клетках контрольной группы. Однако экспрессия E-cadherin в клетках GC постепенно увеличивалась с увеличением концентрации Ubenimex (Рисунок 1K – N).В совокупности эти данные показали, что Убенимекс значительно ограничивает миграцию и инвазионный потенциал клеток GC.

Убенимекс ингибирует проникновение и миграцию клеток GC, в которых снижение CD13 имеет важное значение

Чтобы проверить основной механизм, в котором Убенимекс ингибирует миграцию и инвазию клеток желудка, мы оценили экспрессию белка CD13 с помощью Вестерн-блоттинга. Как и ожидалось, экспрессия белка CD13 демонстрировала различную степень снижения после обработки Убенимексом (рис. 2А и В).Кроме того, был проведен анализ трансвеллеров, чтобы определить, ингибирует ли Убенимекс инвазию и миграцию клеток GC за счет снижения экспрессии CD13. Как показано на Рисунке 2, количество инвазивных и мигрирующих клеток после трансфекции плазмиды сверхэкспрессии CD13 было меньше, чем у контрольной группы, но больше, чем у группы Ubenimex (Рисунок 2C-F). Таким образом, мы можем сделать вывод, что ингибирующая способность к инвазии и миграции GC, опосредованная Ubenimex, была компенсирована после сверхэкспрессии CD13.Эти результаты свидетельствуют о том, что Убенимекс подавляет способность к инвазии и миграции GC-клеток, в которых необходимо снижение CD13.

Рисунок 2 Убенимекс подавляет инвазию и миграцию клеток GC, в которых снижение CD13 имеет важное значение. ( A ) Вестерн-блоттинг-анализ экспрессии CD13 в клетках желудка человека MGC-803, SGC-7901, BGC-823 и MKN-28. ( B ) Столбчатый график показывает относительное значение в градациях серого каждой полосы по сравнению со значением β ‑ актина.( C и E ) Анализы инвазии и миграции через лунки MGC-803, SGC-7901, BGC-823 и MKN-28 клеток желудка человека, обработанных 0,12 мг / мл или 0,25 мг / мл Ubenimex после трансфекции CD13 плазмиды сверхэкспрессии. Бар = 100 мкм. Микрофотографии пораженных или мигрировавших опухолевых клеток. ( D и F ) Столбчатый график количества инвазированных или мигрировавших клеток. * P <0,05, ** P <0,01 и *** P <0,001.

Рисунок 3 Продолжение.

Фиг. 3 Скрининг генного чипа и идентификация целевого гена, связанного с опосредованным Убенимексом метастазированием в GC. ( A ) Спектр экспрессии генов клеток MKN-28 сравнивали до и после обработки, и разницу в скорости миграции выражали в соответствии с критериями выбора и отображения кластерной тепловой карты. ( B ) Убенимекс снижал скорость миграции клеток GC более чем в два раза.Были отобраны гены, связанные с метастазами GC и других опухолей из литературы. Были отобраны 25 генов с наиболее значительными изменениями. ( C ) После того, как 25 генов были заглушены, были выполнены анализы миграции, и скорости миграции показаны в таблице. ( D ) Столбчатый график показывает изменения в скоростях миграции после замалчивания 25 генов. Красная стрелка указывает на то, что изменение скорости миграции было наиболее очевидным после подавления NAB1. * Р <0.05 и ** P <0,01.

Скрининг генного чипа и идентификация гена-мишени, ассоциированного с метастазами, опосредованными убенимексом, в GC

Для получения гена-мишени, связанного с метастазами GC, мы использовали генный чип Affymetrix Clariom TM S для идентификации профиля экспрессии гена в клетках MKN-28 после обработки Убенимексом. Данные показали, что убенимекс подавлял и усиливал несколько генов (рис. 3А). Были отобраны предполагаемые гены, которые были подавлены более чем в два раза, и эти гены могут быть сильной силой, запускающей метастазирование опухоли (рис. 3B).Эти гены были обогащены сигнальными путями и отобраны для скрининга с высоким содержанием. Оценка изменений скорости миграции клеток MKN-28 после подавления родственных генов показала, что 25 генов играют важную роль в опосредованном Убенимексом ингибировании метастазов GC. Важно отметить, что NAB1 продемонстрировал наиболее значительное подавление, которое представляет собой инициатор зла в продвижении метастазов GC (рис. 3C и D). Таким образом, эти данные свидетельствуют о том, что Убенимекс подавлял метастазирование GC, воздействуя на CD13, в котором подавление NAB1 также было важным.

NAB1 — предполагаемая сигнальная молекула нисходящего потока CD13

Для изучения взаимосвязи между CD13 и NAB1 уровни экспрессии белка после трансфекции плазмиды со сверхэкспрессией CD13 или NAB1 измеряли с помощью Вестерн-блоттинга. Как показано на фиг. 4A – D, экспрессия NAB1 увеличивалась после сверхэкспрессии CD13, однако отчетливого изменения в экспрессии CD13 после сверхэкспрессии NAB1 не наблюдается. Эти данные свидетельствуют о том, что CD13 способствует экспрессии белка NAB1 в одном направлении.Кроме того, анализы вестерн-блоттинга подтвердили, что экспрессия NAB1 снижалась в клетках GC с помощью Ubenimex в различных концентрациях. Эти данные указывают на то, что NAB1 является предполагаемой мишенью ниже CD13 (фиг. 4E и F). Кроме того, Убенимекс ингибирует экспрессию NAB1, которая зависит от подавления экспрессии CD13, предполагая, что NAB1 является ключевой молекулой, с помощью которой Убенимекс регулирует экспрессию CD13 и ингибирует метастазирование клеток GC.

Фигура 4 NAB1 является предполагаемой сигнальной молекулой CD13.( A ) При сверхэкспрессии CD13 уровень NAB1 также повышался, что указывает на то, что NAB1 является молекулой-мишенью для CD13. ( C ) Когда NAB1 был сверхэкспрессирован, экспрессия CD13 не пострадала, что дает дополнительные сведения о взаимосвязи между NAB1 и CD13. ( B и D ) Столбчатый график показывает относительное значение шкалы серого для каждой полосы по сравнению с таковой для β ‑ актина. ( E ) Вестерн-блоттинг экспрессии NAB1 в клетках желудка человека MGC-803, SGC-7901, BGC-823 и MKN-28, обработанных 0.12 мг / мл или 0,25 г / мл Убенимекса. ( F ) Столбчатый график показывает относительное значение в градациях серого каждой полосы по сравнению со значением β ‑ актина. * P <0,05, ** P <0,01 и *** P <0,001.

Рисунок 5 Продолжение.

Рисунок 5 Убенимекс ингибирует метастазирование GC, ослабляя активацию сигнального пути CD13 / NAB1 / MAPK.( A D ) Вестерн-блоттинг-анализ экспрессии MAPK в клетках желудка человека MGC-803, SGC-7901, BGC-823 и MKN-28, обработанных 0,12 мг / мл или 0,25 мг / мл Убенимекса. Столбчатый график показывает относительное значение оттенков серого для каждой полосы по сравнению с β ‑ актином. ( E H ) Клетки GC обрабатывали 0,12 мг / мл Убенимекса и затем либо оставляли нетрансфицированными, либо трансфицировали плазмидой сверхэкспрессии NAB1. Затем сравнивали уровни экспрессии белка между трансфицированными и нетрансфицированными клетками.Столбчатый график показывает относительное значение оттенков серого для каждой полосы по сравнению с β ‑ актином. ( I и K ) Анализ инвазии или миграции через лунки с 0,12 мг / мл Убенимекса или 0,12 мг / мл Убенимекса с добавлением плазмид сверхэкспрессии NAB1 для MGC-803, SGC-7901, BGC-823 и MKN-28 человека клетки желудка. Показаны микрофотографии пораженных или мигрировавших опухолевых клеток. Бар = 100 мкм. ( J и L ) Столбчатый график количества инвазированных или мигрировавших клеток. * P <0,05, ** P <0.01 и *** P <0,001; MAPK: митоген-активированная протеинкиназа.

Убенимекс ингибирует метастазирование ГК, облегчая активацию сигнального пути CD13 / NAB1 / MAPK

Растущее количество доказательств предполагает, что сигнальные пути NAB1 и MAPK связаны с онкогенезом, пролиферацией и метастазированием. 18 Чтобы определить, участвует ли инактивация сигнального пути MAPK в опосредованном Убенимексом ингибировании метастазов GC, экспрессия фосфорилированной MAPK (p-MAPK) в клетках GC после обработки Убенимексом была обнаружена с помощью Вестерн-блоттинга.Значения в градациях серого для p90RSK, ERK1 / 2, RPS6 и Rab11 были значительно снижены с увеличением концентрации Убенимекса, предполагая, что смягченная активация сигнального пути MAPK участвует в подавлении метастазов, опосредованном Убенимексом (Рисунок 5A – D). Для дальнейшего изучения того, как Ubenimex проявляет этот эффект, воздействуя на CD13, тем самым влияя на активность NAB1 и регулируя активацию сигнального пути MAPK, плазмиды сверхэкспрессии NAB1 трансфицировали в клетки GC.По сравнению с группой, получавшей убенимекс, уровни экспрессии белков p90RSK, ERK1 / 2, RPS6 и Rab1 в группе плазмиды со сверхэкспрессией NAB1 были значительно выше. Таким образом, Убенимекс не только подавляет экспрессию NAB1, нацеливаясь на CD13, но также подавляет метастазирование GC, регулируя сигнальный путь MAPK (рис. 5E – H). Кроме того, в анализах миграции и инвазии через лунки высокая экспрессия NAB1 значительно увеличивала способность GC-клеток к миграции и инвазии по сравнению с GC-клетками, обработанными Убенимексом.(Рисунок 5I – L). Эти результаты показали, что Убенимекс ингибировал пролиферацию, миграцию и инвазию клеток GC посредством активации пути передачи сигнала CD13 / NAB1 / MAPK.

Обсуждение

Как известно, Убенимекс играет роль в усилении иммунной функции, в основном в ответ на химиотерапию и адъювантную лучевую терапию, а также при возрастном иммунодефиците. 19 Убенимекс можно использовать с химиотерапией, лучевой терапией или с обоими методами лечения лейкемии, множественной миеломы, синдрома костного мозга, трансплантации гемопоэтических стволовых клеток и солидных опухолей. 20 Однако в нескольких исследованиях сообщалось, что он имеет функции по подавлению метастазов в желудке. CD13 был впервые охарактеризован как поверхностный маркер для гемопоэтических клеток миелоидного происхождения, 21,22 , и он экспрессируется в различных типах клеток, таких как эпителиальные клетки, нервные клетки, фибробласты и эндотелиальные клетки. 23 Примечательно, что CD13 сверхэкспрессируется в клетках острого миелоидного лейкоза и множественных солидных опухолях, включая рак легких, рак толстой кишки и рак яичников, вызывая пролиферацию опухоли и подавляя апоптоз, а также усиливая клеточную агрессию и васкуляризацию. 24 Растущее число исследований продемонстрировало, что ингибиторы CD13 улучшают эффективность химиотерапии. Однако ни одно исследование не показало влияние Убенимекса в сдерживании метастазов ГК посредством нацеливания на CD13. Здесь мы продемонстрировали, что Убенимекс влияет на миграцию и инвазионную способность клеток GC, чтобы ингибировать метастазирование GC. По сравнению с контрольной группой Убенимекс снижал экспрессию белка CD13 и миграцию клеток GC после трансфекции плазмид со сверхэкспрессией CD13.

В этом исследовании для выявления гена, связанного с подавлением метастазов GC, опосредованным убенимексом, были использованы технология генных чипов и скрининг с высоким содержанием, и NAB1 был идентифицирован как предполагаемый ген-мишень. Фактор роста нервов (NGF1) -A-связывающий белок (NAB1), также известный как zif268, Egr1 и Krox-24, представляет собой фактор транскрипции цинкового пальца. 25 NAB1 связан с транскрипцией факторов транскрипции семейства Egr Egr1 (Krox-24), Egr2 (Krox-20) и Egr3 (PILOT). 9 NAB1 способствует развитию задней части мозга путем регулирования генов, связанных с оболочкой спинномозговых нервов, в шванновских клетках. Одно исследование показало, что NAB1 представляет собой фактор ингибирования транскрипции, который ингибирует отложение жира в миокарде, и его экспрессия подавляет прогрессирование патологического ожирения, но способствует росту и развитию мышечных клеток. 26 NAB1 кодируется в ответ на различные внеклеточные стимуляторы, 27 включая пролиферацию клеток, дифференцировку макрофагов, синаптическую активацию и усиление дальнего действия.В настоящем исследовании мы изучили механизм NAB1 как важной молекулы в опухолях, и мы исследовали связанные с ним сигнальные пути. Наше исследование показало, что Убенимекс, который широко используется в клиниках для иммуносупрессии, регулирует NAB1, воздействуя на CD13, тем самым влияя на метастазирование GC. В литературе мало сообщений о метастазах NAB1 и GC. Наше исследование выявило новую область исследований с участием NAB1 в GC.

MAPK принадлежат к семейству серин-треониновых киназ, которые широко экспрессируются в различных клетках в виде следующих трех основных подсемейств: киназы, регулируемые внеклеточными сигналами (ERK MAPK, Ras, Raf1, MEK и ERK), N-концевые киназы c-Jun или активируемые стрессом протеинкиназы (JNK или SAPK) и MAPK14. 28,29 Растущее число исследований продемонстрировало, что пути передачи сигналов MAPK, включая киназы JNK, ERK и p38, 30,31 играют решающую роль в пролиферации, инвазии и миграции раковых клеток. Некоторые исследования показали, что ERK является основной киназой семейства MAPK, а ERK играет решающую роль в стимулировании пролиферации, апоптоза, дифференцировки и роста клеток. 32,33 ERK активируется различными онкогенами и внеклеточными стимулами. Недавние исследования также показали, что пути ERK и MAPK имеют решающее значение для пролиферации и миграции клеток GC. 34 Эффекты инфекции Helicobacter pylori , экспрессия гепараназы (HPA) и белка MAPK в GC были проанализированы путем изучения ассоциаций между клиническими патологическими характеристиками GC и вышеуказанными факторами. 35 Как положительная экспрессия HPA, так и положительная экспрессия MAPK связаны с глубиной инвазии. 36 Многие исследования изучали участие p-38 и JNK в пути передачи сигналов MAPK, подтверждая, что путь, исследуемый в настоящем исследовании, связан с MAPK. 37–39 Однако в нашем исследовании изменения четырех молекул (p90RSK, ERK1 / 2, RPS6 и Rab11) продемонстрировали, что Ubenimex регулирует путь передачи сигналов MAPK. Это исследование предполагает, что Убенимекс ингибирует метастазирование GC, воздействуя на CD13 и дополнительно регулируя путь MAPK. Результаты экспериментов предоставили новые идеи и потенциальные новые приложения для Ubenimex в будущем.

Таким образом, настоящее исследование продемонстрировало, что Убенимекс подавляет рост линий GC-клеток человека MGC-803, SGC-7901, BGC-823 и MKN-28 in vitro.Убенимекс подавляет инвазию, миграцию и метастазирование человеческих GC-клеток, воздействуя на CD13 и активируя сигнальный путь MAPK. Кроме того, Убенимекс регулирует активность NAB1, выявляя корреляцию между белками сигнального пути CD13, NAB1 и MAPK. Таким образом, наше исследование подтверждает потенциальную терапевтическую ценность Убенимекса в подавлении метастазирования GC-клеток человека MGC-803, SGC-7901, BGC-823 и MKN-28, указывая на новое применение Убенимекса, тем самым обеспечивая новую основу для дальнейших научных исследований. исследовать.

Сокращения

GC, рак желудка; Убэ, Убенимекс; APN, аминопептидаза N; NAB1, связывающий белок 1 NGFI-A; JNK, Jun N-терминальная киназа; ERK, внеклеточные регулируемые протеинкиназы; MAPK, митоген-активированная протеинкиназа.

Заявление об обмене данными

Данные, использованные для подтверждения выводов этого исследования, можно получить у соответствующего автора по запросу.

Благодарности

Работа поддержана Фондом естественных наук провинции Шаньдун, Китай (ZR2017MH045).Мы все благодарим экспертов American Journal за языковое редактирование.

Авторские взносы

Все авторы внесли значительный вклад в описанную работу, будь то концепция, дизайн исследования, выполнение, сбор данных, анализ и интерпретация, или во всех этих областях; принимал участие в написании, редактировании или критическом рецензировании статьи; дал окончательное одобрение версии, которая будет опубликована; договорились о журнале, в который была подана статья; и соглашаемся нести ответственность за все аспекты работы.

Раскрытие информации

Авторы заявили об отсутствии потенциального конфликта интересов в этой работе.

Список литературы

1. Fock KM. Обзорная статья: эпидемиология и профилактика рака желудка. Алимент Фармакол Тер . 2014. 40 (3): 250–260. DOI: 10.1111 / apt.12814

2. Бьянка Б., Мейер TF. Возбудитель желудочного заболевания человека хеликобактер пилори и его связь с раком желудка и язвенной болезнью. Язвы . 2011; 2011: 1–23. DOI: 10.1155 / 2011/340157

3.Хушалани Н.И. Рак пищевода и желудка. Практикующий . 2008. 83 (6): 712–722. DOI: 10.1016 / S0025-6196 (11) 60900-2

4. Руань Т., Лю В., Тао К., Ву, Калифорния. Обзор результатов исследований механизмов множественной лекарственной устойчивости при раке желудка. Онко Мишеники . 2020; 13: 1797–1807. DOI: 10.2147 / OTT.S239336

5. июн SY, Park JK. Метахронные метастазы в яичники после резекции первичного рака желудка. J Рак желудка . 2011; 11 (1): 31–37.DOI: 10.5230 / jgc.2011.11.1.31

6. Гусман-Рохас Л., Рангель Р., Саламе А. и др. Совместные эффекты аминопептидазы N (CD13), экспрессируемой доброкачественными и раковыми клетками в микроокружении опухоли. Proc Natl Acad Sci U S A . 2012; 109 (5): 1637–1642. DOI: 10.1073 / pnas.11207

7. Хайли М.С., Парнис Ф.Х., Троттер Г.А. и др. Комбинированная химиотерапия с эпирубицином, цисплатином и 5-фторурацилом для паллиативного лечения распространенной аденокарциномы желудка и пищевода. Br J Surg . 1994. 81 (12): 1763–1765. DOI: 10.1002 / bjs.1800811218

8. Ямадзаки Т., Сугияма К., Итихара К. Влияние убенимекса на иммунную систему пациентов с гематологическими злокачественными новообразованиями. Биомед Фармакотер . 1991. 45 (2–3): 105–112. DOI: 10.1016 / 0753-3322 (91) -h

9. Свирнофф А.Х., Апель Э.Д., Сварен Дж. И др. Nab1, корепрессор NGFI-A (Egr-1), содержит активный домен репрессии транскрипции. Молекулярная биология . 1998. 18 (1): 512–524.DOI: 10.1128 / mcb.18.1.512

10. ЛаВалли Дж., Грант Т., Д’Анджело-Ранний С. и др. Уточнение сигнала ядерной локализации в корегуляторе транскрипции Egr NAB2. FEBS Lett . 2019; 593 (1): 107–118. DOI: 10.1002 / 1873-3468.13288

11. Zhao L, Yuan Y, Li P, et al. miR-221-3p ингибирует миелинизацию шванновских клеток. Неврология . 2018; 379: 239–245. DOI: 10.1016 / j.neuroscience.2018.03.019

12. Тикияни В., Ли Л., Шарма П., Лю Х., Ху З., Бабу К. Секреция Wnt регулируется тетраспановым белком HIC-1 через его взаимодействие с нейрабином / NAB-1. Cell Rep . 2018; 25 (7): 1856–1871.e6. DOI: 10.1016 / j.celrep.2018.10.053

13. Qiu FH, Devchand PR, Wada K, Serhan CN. Липоксин A4 и липоксин A4, запускаемый аспирином, активируют корепрессор транскрипции NAB1 в нейтрофилах человека. FASEB J . 2001. 15 (14): 2736–2738. DOI: 10.1096 / fj.01-0576fje

14. Xiang Z, Li J, Song S, et al. Положительная обратная связь между метаболитом IDO1 и COL12A1 через путь MAPK способствует метастазированию рака желудка. J Exp Clin Cancer Res .2019; 38 (1): 314. DOI: 10.1186 / s13046-019-1318-5

15. Лю Х., Чжао Ю.Р., Чен Б., Гэ З., Хуанг Дж. Высокая экспрессия SMARCE1 предсказывает плохой прогноз и способствует росту клеток и метастазированию при раке желудка. Cancer Manag Res . 2019; 11: 3493–3509. DOI: 10.2147 / CMAR.S195137

16. Вонг Д., Кандагатла П., Корз В., Чинни С.Р. Нацеливание на CXCR4 с помощью CTCE-9908 подавляет метастазирование опухоли простаты. БМК Урол . 2014; 14 (1): 12. DOI: 10.1186 / 1471-2490-14-12

17.Kobayashi H, Suzuki M, Kanayama N, Terao T. Генетическое подавление фосфоинозитид-3-киназы бикунином коррелирует с подавлением инвазии и метастазирования в HRA-клетках рака яичников человека. Дж. Биол. Хим. . 2004. 279 (8): 6371–6379. DOI: 10.1074 / jbc.M305749200

18. Косла Дж., Дворакова М., Дворак М., Чермак В. Эффективная дедифференцировка миофибробластов путем одновременного ингибирования передачи сигналов TGF-β и нарушения передачи сигналов MAPK. Eur J Cell Biol . 2013. 92 (12): 363–373.DOI: 10.1016 / j.ejcb.2013.10.013

19. Сакурая М., Тамура Дж., Ито К., Кубота К., Нарус Т. Ингибитор аминопептидазы убенимекс подавляет рост лейкемических клеточных линий и миеломных клеток за счет своей цитотоксичности. J Int Med Res . 2000. 28 (5): 214–221. DOI: 10.1177 / 147323000002800503

20. Урабе А., Муто Й., Мизогучи Х., Такаку Ф., Огава Н. Убенимекс в лечении острого нелимфоцитарного лейкоза у взрослых. Энн Гематол . 1993. 67 (2): 63–66. DOI: 10.1007 / BF01788128

21.Риман Д., Келен А., Лангнер Дж. CD13 — не только маркер при типировании лейкемии. Иммунол Сегодня . 1999. 20 (2): 83–88. DOI: 10.1016 / s0167-5699 (98) 01398-x

22. Харагути Н., Исии Х., Мимори К. и др. CD13 является терапевтической мишенью в стволовых клетках рака печени человека. Дж. Клин Инвест . 2010. 120 (9): 3326–3339. DOI: 10.1172 / JCI42550

23. Сайки И., Фуджи Х., Йонеда Дж. И др. Роль аминопептидазы N (CD13) в инвазии опухолевых клеток и деградации внеклеточного матрикса. Инт Дж. Рак .1993. 54 (1): 137–143. DOI: 10.1002 / ijc.2

0122

24. Pang L, Zhang N, Xia Y, Wang D, Wang G, Meng X. APN / CD13 в сыворотке как новый диагностический и прогностический биомаркер рака поджелудочной железы. Онкотоваргет . 2016; 7 (47): 77854–77864. DOI: 10.18632 / oncotarget.12835

25. Руссо М.В., Севетсон Б.Р., Милбрандт Дж. Идентификация NAB1, репрессора транскрипции, опосредованной NGFI-A и Krox20. Proc Natl Acad Sci U S A . 1995. 92 (15): 6873–6877. DOI: 10.1073 / pnas.92.15.6873

26.Сагрилло К.А., Селманов М. Влияние пролактина на экспрессию мРНК, кодирующих немедленные ранние гены zif / 268 (NGF1-A), nur / 77 (NGF1-B), c-fos и c-jun в гипоталамусе. Brain Res Mol Brain Res . 1998. 61 (1–2): 62–68. DOI: 10.1016 / s0169-328x (98) 00198-3

27. Моринобу С., Страусбо Х., Тервиллигер Р., Думан Р.С. Регулирование c-Fos и NGF1-A при лечении антидепрессантами. Синапс . 1997. 25 (4): 313–320. DOI: 10.1002 / (SICI) 1098-2396 (199704) 25: 4 <313 :: AID-SYN1> 3.0.CO; 2-D

28. Fang JY, Ричардсон, Британская Колумбия. Сигнальные пути MAPK и колоректальный рак. Ланцет Онкол . 2005. 6 (5): 322–327. DOI: 10.1016 / S1470-2045 (05) 70168-6

29. Кириакис Дж. М., Аврух Дж. Пути передачи сигнала MAPK млекопитающих, активируемые стрессом и воспалением: 10-летнее обновление. Physiol Ред. . 2012. 92 (2): 689–737. DOI: 10.1152 / Physrev.00028.2011

30. Hsieh YY, Shen CH, Huang WS, et al. Резистин-индуцированная экспрессия фактора-1, происходящего из стромальных клеток, через toll-подобный рецептор 4 и активация сигнального пути p38 MAPK / NFκB в клетках рака желудка. Дж. Биомед. Наука . 2014; 21 (1): 59. DOI: 10.1186 / 1423-0127-21-59

31. Дик М., Клифтон А.Д., Лукок Л.М., Алесси Д.Р. Активированная митогеном и стрессом протеинкиназа-1 (MSK1) напрямую активируется MAPK и SAPK2 / p38 и может опосредовать активацию CREB. EMBO J . 1998. 17 (15): 4426–4441. DOI: 10.1093 / emboj / 17.15.4426

32. Wei L, Li Y, Suo Z. TSPAN8 способствует росту и метастазированию рака желудка через путь ERK MAPK. Int J Clin Exp Med . 2015; 8 (6): 8599–8607.

33. Сегер Р., Кребс Э.Г. Сигнальный каскад MAPK. FASEB J . 1995. 9 (9): 726–735. DOI: 10.1096 / fasebj.9.9.7601337

34. Roux PP, Blenis J. ERK и p38 MAPK-активированные протеинкиназы: семейство протеинкиназ с различными биологическими функциями. Microbiol Mol Biol Rev . 2004. 68 (2): 320–344. DOI: 10.1128 / MMBR.68.2.320-344.2004

35. Лю Л.П., Шэн ХР, Шуай Т.К., Чжао YX, Ли Б., Ли Ю.М. Helicobacter pylori способствует инвазии и метастазированию рака желудка за счет увеличения экспрессии гепараназы. Мир Дж. Гастроэнтерол . 2018; 24 (40): 4565–4577. DOI: 10.3748 / wjg.v24.i40.4565

36. Бонни А., Брюнет А., Вест А. Е., Датта С. Р., Такасу М. А., Гринберг М. Е.. Выживанию клеток способствует сигнальный путь Ras-MAPK с помощью транскрипционно-зависимых и независимых механизмов. Наука . 1999. 286 (5443): 1358–1362. DOI: 10.1126 / science.286.5443.1358

37. Xing J, Ginty DD, Greenberg ME. Связывание пути RAS-MAPK с активацией гена RSK2, киназой CREB, регулируемой фактором роста. Наука . 1996. 273 (5277): 959–963. DOI: 10.1126 / science.273.5277.959

38. Карраседо А., Ма Л., Теруя-Фельдштейн Дж. И др. Ингибирование mTORC1 приводит к активации пути MAPK через PI3K-зависимую петлю обратной связи при раке человека. Дж. Клин Инвест . 2008. 118 (9): 3065–3074. DOI: 10.1172 / JCI34739

39. Song YX, Yue ZY, Wang ZN, et al. МикроРНК-148b часто подавляется при раке желудка и действует как супрессор опухолей, ингибируя пролиферацию клеток. Молочный рак . 2011; 10 (1): 1. DOI: 10.1186 / 1476-4598-10-

Катод смещен 6v6

Kit fts mods
Шаблон выписки из банка Chase

Производительность Parker 2320

Генератор стихов о рабстве

Колорадо-Спрингс, последние новости о преступлениях

Комбо на 5 Вт, 1х8 был одним из основных продуктов в мире усилителей с начала 1950-х годов. Он выдержал испытание временем, потому что благодаря его простоте достигаются удивительные оттенки.Tweedtone5 от Sonic Pipe Amplifiers имеет свое собственное звучание, которое делает его обязательным. Начнем с конструкции ВСЕЙ трубки. • Выходы с защитой от короткого замыкания • Истинный дифференциальный входной каскад • Работа от одного источника питания: от 3,0 В до 32 В • Низкие входные токи смещения: максимум 100 нА (LM324A) • Четыре усилителя на комплект • Внутренняя компенсация • Диапазон синфазного сигнала распространяется на отрицательное питание • Промышленность Стандартные распиновки • ESD …
Psiphon ipa download
Blue hp computer

Преобразование биологических измерений

Film korea romantis sekolah

Кентукки безработица reddit

Сообщество u / cathode_ Reddit.Reddit дает вам лучшее из Интернета в одном месте. [-] cathode_01 11 баллов 12 баллов 13 баллов 6 дней назад (0 детей). Не публикуйте сообщения на публичном форуме, если вас не интересует критика. 24,50 долларов США. Полностью твид! Лучшая OEM лампа для усилителей Fender Tweed Champ и Deluxe 50-х годов. Tung-Sol 6V6 имеет геометрию, разработанную для безопасной работы с более высокими напряжениями, используемыми в гитарных усилителях, плюс более тяжелые материалы пластин и решеток. Результат … лучшие средние и нижние частоты сохраняя …
Виджет Tradingview autosize
Как добавить новую строку в json-строку java

Каждую ночь мне снится мое близнецовое пламя

У какого из следующих элементов энергия ионизации будет выше, чем у мышьяка (как ) _

Обновление прошивки Atoto sa102

5881 эквивалентны лампам 6L6.Вы можете вставить 5881 в свой усилитель, но, вероятно, это будет очень холодное смещение, поскольку они предназначены для работы при более высоком напряжении пластины, чем 6V6.
Hagedorn 275 запчастей для разбрасывателя
Beijing capital wine co ltd

Breath of the dying essence quest

Схема подключения Yamaha banshee

Butler county pa 10 самых разыскиваемых

Billy Rocker: 16 -ваттные катодно-смещенные выходные лампы 6V6 или EL84, работающие в двухтактном классе A с лампами 5Y3, 12AY7 и 12AX7 / 7025.Напоминает теплоту винтажного твида, но с уникальными тональными качествами. Очень популярный выбор для студии или небольшого клуба (или любого другого места, где используется микрофон). 21 ноября 2015 г. · Обратите внимание на квазикатодное смещение. Где все четыре выходные лампы привязаны к одному катодному резистору и колпачку. Этап драйвера / разветвителя называется плавающим парафразом, но я, наверное, ошибаюсь. У PS есть дроссель, так что это своего рода бонус. Захотелось вытащить мою серию 9300, версию 6BQ5.
Civilization 6 apk obb
Vortex sonora 4 12×44 amazon

Tci урок игры ответы на главу 4

Аренда мобильных домов в Helena Montana

Лучшие латиноамериканские дополнения 2020

Yellow Jackets® Ламповые преобразователи позволяют использовать силовые лампы EL84 вместо наиболее распространенных силовых ламп для гитарных усилителей, включая 6L6, EL34, 6V6, 7027, 6550 и 7591.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.

[an error occurred while processing the directive]