Масса блоков фбс: Масса ФБС блоков — Справочник массы

Содержание

Вес фундаментных блоков (ФБС) — характеристики [таблица]

МаркаРазмеры, ммМасса, тКласс бетонаРасход материалов
LBHБетон, м 3Сталь, кг
ФБС24.3.623803005800.97В7,50.4061.46
ФБС24.4.623804004801.3В7,50.5431.46
ФБС24.5.623805005801.63В7,50.6792.36
ФБС24.6.623806005801.96В7,50.8152.36
ФБС12.2.611802005800.32В7,50.1330.76
ФБС12.3.611803005800.485В7,50.2030.76
ФБС12.4.611804005800.64В7,50.2651.46
ФБС12.5.611805005800.79В7,50.3311.46
ФБС12.6.611806005800.96В7,50.3981.46
ФБС12.2.311802002800.16В7,50.0660.38
ФБС12.3.311803002800.24В7,50.10.38
ФБС12.4.311804002800.31В7,50.1270.74
ФБС12.5.311805002800.38В7,50.1590.74
ФБС12.6.311806002800.46В7,5 0.1910.74
ФБС9.2.68802005800.2350.36
ФБС9.3.68803005800.35В7,50.1460.76
ФБС9.4.68804005800.47В7,50.1950.76
ФБС9.5.68805005800.59В7,50.2440.76
ФБС9.6.68806005800.7В7,50.2931.46

ГОСТ на блоки ФБС

Производственный комбинат «ЖБИ 24/7» предлагает предприятиям строительной отрасли недорогие и качественные железобетонные изделия.

Блоки бетонные фундаментные ФБС производятся по стандарту ГОСТ 13579-2018, введённому в действие взамен ГОСТ 13579 78. Документ содержит информацию о типах и конструкции блоков, области их применения, условных обозначениях. Приведены данные о расположении, марках и конструкции монтажных петель, о справочном расходе стали и допусках при монтаже.

Документ содержит допуски и предельные отклонения геометрических параметров, технические требования к бетону и армирующим изделиям, качеству поверхности.

Конструкция и применение

Бетонные блоки ФБС (фундаментные стеновые) — это изделия прямоугольной формы, весом от нескольких килограммов до нескольких тонн. Применяются в частном и коммерческом строительстве для устройства фундаментов, стен подвальных и технических подпольных помещений. ГОСТ 13579 78 и 13579-2018 разделяют изделия на 3 типа: ФБС — сплошные, ФБП — пустотные, ФБВ — с вырезом для пропуска коммуникаций и укладки перемычек.

Достоинства сплошных блоков:

  • простота укладки и большой выбор по длине, ширине и высоте;
  • стойкость к деформации, способность воспринимать высокие нагрузки, долговечность, морозоустойчивость;
  • возможность эксплуатации в умеренно-агрессивной среде, невосприимчивость к влаге, грибкам, бактериям и другим микроорганизмам.

Рис. 1. Блок ФБС шириной 300 мм

Рис. 2. Блок ФБС шириной 400, 500 и 600 мм.

Выбор блоков для закладки фундамента определяется типом грунта. Предварительно проводят геологические изыскания, после чего организация делает заключение о возможности использования ФБС. Глубина установки зависит от типа почвы: на щебневой изделия заглубляют, на песчаной устанавливают неглубоко.

Размеры изделий

Основные размеры фундаментных блоков ФБС по ГОСТ указаны в таблице. Кроме плотности, морозостойкости, марки бетона и веса изделий, следует учитывать габариты. Чтобы подобрать изделия с нужными параметрами, нужно знать толщину перекрытий и стен, площадь основания дома, расчётную нагрузку на фундамент. Блоки ФБС, изготовленные по стандарту ГОСТ 13579 78, могут иметь незначительные отличия от изделий, выпущенных по ГОСТ 13579-2018

Тип блока

Основные размеры блока, мм

Длина 

Ширина 

Высота 

ФБС

2380

300; 400; 500; 600

580

1180

400; 500; 600

280; 580

880

300; 400; 500; 600

580

Габариты изделия определяют по условному обозначению, которое выглядит как буквенно-цифровые индексы. Пример расшифровки наименования ФБС24.4.6-Т ГОСТ 13579-78:

  • ФБС — фундаментный блок сплошной, 24 — длина в дециметрах, округленная до целого числа;
  • 4 — высота в дециметрах, 6 — ширина (в них же), Т — тип бетона (тяжёлый), из которого изготовлена продукция;
  • ГОСТ 13579-78 — стандарт, требованиям которого соответствуют выпущенные изделия.

Кроме тяжёлого бетона, фундаментные элементы изготавливаются из плотного силикатного и на пористых заполнителях (керамзитобетона). Предприятие может применять другие обозначения марок, в соответствии с рабочими чертежами.

Технические характеристики

Класс бетона по прочности на сжатие для сплошных блоков из тяжёлого и лёгкого бетона — В7,5 (М100), из плотного силикатного — В15 (М200). При соответствующем обосновании допускается применять бетон других марок, при этом класс по прочности на сжатие должен быть не выше В15 и не ниже В12,5 для ФБС из силикатного бетона и В3,5 — из лёгкого и тяжёлого.

Таблица 1. Характеристики ФБС из тяжёлого бетона

Марка блока

Класс бетона по прочности на сжатие

Монтажная петля

Расход материалов

Масса блока (справочная), т

Марка

Кол.

Бетон, м

Сталь, кг

ФБС24.3.6-Т

В7,5

П2а

2

0,406

1,46

0,97

ФБС24.4.6-Т

0,543

1,30

ФБС24.5.6-Т

П3

0,679

2,36

1,63

ФБС24.6.6-Т

0,815

1,96

ФБС12.4.6-Т

П2

0,265

1,46

0,64

ФБС12.5.6-Т

0,331

0,79

ФБС12.6.6-Т

0,398

0,96

ФБС12.4.3-Т

П4

0,127

0,74

0,31

ФБС12.5.3-Т

0,159

0,38

ФБС12.6.3-Т

0,191

0,46

ФБС9.3.6-Т

П1

0,146

0,76

0,35

ФБС9.4.6-Т

0,195

0,47

ФБС9.5.6-Т

0,244

0,59

ФБС9.6.6-Т

П2

0,293

1,46

0,70

Таблица 2. Характеристики ФБС из лёгкого бетона

Марка блока

Класс бетона по прочности

Монтажная петля

Расход материалов (справочный)

Масса бетона (справочная), т

на сжатие

Марка

Количество, шт.

Бетон, м

Сталь, кг

ФБС 24.3.6-Л

В7,5

П2а

2

0,406

1,46

0,73

ФБС 24.4.6-Л

0,543

0,98

ФБС 24.5.6-Л

0,679

1,22

ФБС 24.6.6-Л

П3

0,815

2,36

1,47

ФБС 12.4.6-Л

П1

0,265

0,76

0,48

ФБС 12.5.6-Л

П2

0,331

1,46

0,60

ФБС 12.6.6-Л

П2

0,398

0,74

0,72

ФБС 12.4.3-Л

П4

0,127

0,23

ФБС 12.5.3-Л

0,159

0,29

ФБС 12.6.3-Л

0,191

0,35

ФБС 9.3.6-Л

П1

0,146

0,76

0,26

ФБС 9.4.6-Л

0,195

0,35

ФБС 9.5.6-Л

0,244

0,44

ФБС 9.6.6-Л

0,293

0,53

Таблица 3. Характеристики ФБС из силикатного бетона средней плотности (2000 кг/куб. м)

Марка блока

Класс бетона по прочности

Монтажная петля

Расход материалов (справочный)

Масса бетона (справочная), т

на сжатие

Марка

Количество, шт.

Бетон, м

Сталь, кг

ФБС 24.3.6-С

В15

П2а

2

0,406

1,46

0,81

ФБС 24.4.6-С

0,543

1,09

ФБС 24.5.6-С

0,679

1,36

ФБС 24.6.6-С

П3

0,815

2,36

1,63

ФБС 12.4.6-С

П1

0,265

0,76

0,53

ФБС 12.5.6-С

П2

0,331

1,46

0,66

ФБС 12.6.6-С

0,398

0,80

ФБС 12.4.3-С

П2а

0,127

0,74

0,25

ФБС 12.5.3-С

0,159

0,32

ФБС 12.6.3-С

0,191

0,38

ФБС 9.3.6-С

П1

0,146

0,76

0,29

ФБС 9.4.6-С

0,195

0,39

ФБС 9.5.6-С

0,244

0,49

ФБС 9.6.6-С

0,293

0,59

В компании «ЖБИ 24/7» вы можете купить любое количество ФБС, изготовленных по ГОСТ 13579-2018 (взамен ГОСТ 13579 78) с доставкой по Москве, МО и в соседние области.

ГОСТ 13579— 2018 БЛОКИ БЕТОННЫЕ ДЛЯ СТЕН ПОДВАЛОВ

Вес блока ФБС, зачем следует его знать, онлайн калькулятор веса блока ФБС

На чтение 4 мин Просмотров 1.2к.

Традиционным материалов в отечественном строительстве можно назвать ФБС. Подобного рода материал хорошо себя зарекомендовал при возведении фундамента и стен, цокольных частей здания.

Столь высокая популярность прежде всего связана с исключительными эксплуатационными качествами, которыми обладает рассматриваемый материал.

Блоки и их вес

Несмотря на применение схожей технологии производства различными поставщиками ФБС, они могут иметь различный вес. Также для предоставления большого выбора клиентам проводится создание ФБС различных размеров.

Наиболее распространенными типами блоков можно назвать:

  1. ФБС – стеновой тип материала, предназначенный для возведения фундамента. Они получили большое распространение в последнее время по причине возможности существенного ускорения процесса кладки и удешевления проекта. Большая площадь торцевой поверхности позволяет также уменьшить количество швов, а значит уменьшается объем работ у каменщика и снижается расход клеящего состава.
  2. ФБП – материал, предназначенный также для возведения фундамента, имеет пустотелости для уменьшения массы и повышения изоляционных качеств. Высокие изоляционные свойства можно связать прежде всего с тем, что в пустотах, выполненных в виде ячеек, находится воздух, выступающий в качестве изоляционного барьера. Также пустоты становятся причиной снижения количества используемого вещества при формировании блока, что становится причиной его удешевления.
  3. УДБ – унифицированные дырочные варианты исполнения. Применяются они в строительстве редко, но в некоторых ситуациях могут быть незаменимы.

Зависимость блоков от размеров проявляется изменением веса: чем больше линейные размеры, тем больше масса. Однако строительный материал одного и того же размера может иметь схожий показатель.

Это связано с тем, что другие факторы также оказывают влияние на рассматриваемый показатель:

  1. Плотность – еще один из основных показателей, которые учитываются при расчетах.
  2. Наличие пустот, их объем.

Большая часть параметровматериала для возведения фундамента стандартизированы.

Зачем следует знать вес блоков ФБС?

Если с линейными размерами все просто, то при рассмотрении веса может возникнуть довольно много вопросов, к примеру, зачем его знать.

Знание веса одного блока позволяет:

  1. Для расчета массы всей партии, что важно при выборе транспортного средства, на котором будет проводиться доставка строительного материала.
  2. Для определения давления, которое будет оказываться на грунт или непосредственно сам фундамент, если материал использовался для возведения стен.

Особое внимание следует уделить второму пункту. При проведении работы по проектированию фундамента учитывается общий показатель давления, оказываемого на грунт.

Сравнив этот показатель с тем, какой несущей способностью обладает грунт согласно результат проведенных исследований определяют возможность использования тех или иных материалов при строительстве. Также общий показатель давления используется при определении степени заземления фундамента.

Поэтому проводится расчет веса всех блоков, после чего это результат складывается с другими показателями и определяется общий вес сооружения и давления на один квадратный метр.

Онлайн-калькулятор веса и объема блоков

Если всего несколько лет назад расчеты предусматривали использования специальных формул, то сегодня можно использовать онлайн-калькулятор. Наиболее популярным сегодня можно назвать: http://stroy-calc.ru/raschet-blokov.

Он предназначен для определения огромного количества параметров, в том числе и общего объема блоков и их массу, необходимые для строительства.

К особенностям данного калькулятора отнесем следующие моменты:

  1. Проводится ввод линейных размеров ФБС, которые могут варьировать в достаточно большом диапазоне.
  2. Указывается плотность, которая должна быть определена производителем и выделена в характеристиках распространяемой продукции. Также можно указать вес одного блока.

Остальные характеристики касаются особенностей сооружения: длина, высота, толщина стен и особенности кладочной сетки. После расчетов выводится вся важная информация, в том числе и масса, объем партии, оказываемое давление при создании кладки с указанной толщиной раствора.

Современное строительство можно проводить с высокой точностью, для чего используются онлайн-калькуляторы. Математическая погрешность в случае их использования сводится к нулю, то есть человеческий фактор не сыграет.

Недостатком метода можно назвать то, что зачастую создатели онлайн-калькуляторов не указывают формулы, по которым ведется расчет.

Поэтому оценить погрешность расчетов с точки зрения используемых коэффициентов достаточно сложно. Всегда нужно учитывать полученные результаты с запасом на погрешность.

Фундаментные блоки (ФБС) в Набережных Челнах

ФБС фундаментные блоки используются при строительстве фундаментов, стен подвалов и т.п. Широко используются и при строительстве обыкновенных жилых домов, и при строительстве крупных промышленных объектов. Блоки представляют из себя железобетонные изделия при изготовлении которых используется бетон высоких сортов, а также армированная арматура. Для изготовления ФБС придерживаются стандартов и ГОСТ 13579-78. Сами блоки нужны для того, чтобы обеспечить прочную основу всей несущей конструкции сооружения. В некоторых случаях используются как ограждения или заграждения.

Каталог ФБС

Преимущество использования ФБС

Есть несколько основных плюсов, которые делают выбор в пользу фунламетных блоков при строительстве объектов.

  1. Время. При использовании ФБС не требуется выжидать время, как например при использовании основания ленточного типа. Стеновые панели из блоков можно начинать возводить сразу же, как будет готов фундамент!
  2. Широкий выбор различных размеров блоков позволяет без труда подобрать блоки нужного вам размера, а заводское качество гарантирует их высокую стойкость и долговечность.
  3. Благодаря стандартизации на ФБС вы без труда определите нужное вам для строительства количество блоков, что поможет при составлении сметы и при работе.
  4. При изготовлении ФБС используются специальные присадки, что позволяет этим блокам быть морозоустойчивыми и неподверженными атакам агрессивной среды.

Блоки ФБС при правильном использовании спокойно служат по 70-90 лет без деформаций и разрушений, но! Важно обратить внимание на следующие детали:
* Использовать ФБС лучше всего в теплое время года в период, когда нет осадков.
* Самостоятельно изготовить блоки, соответствующие всем нормам безопасности нельзя!


Таблица размеров фундаментных блоков

№ позиции Наименование изделия Размеры
Длина, мм Ширина, мм Высота, мм Масса ед., кг
 
1 ФБС 9.3.6Т 880 300 580 350.0
2 ФБС 9.4.6Т 880
400		 580 490.0
3 ФБС 9.5.6Т 880 500 580 595.0
4 ФБС 9.6.6Т 880 600 580 730.0
5 ФБС 12.3.6Т 1180 300 580 485.0
6 ФБС 12.4.6Т 1180 400 580 650.0
7 ФБС 12.5.6Т 1180 500 580 815.0
8 ФБС 12.6.6Т 1180 600 580 980.0
9 ФБС 24.3.6Т 2380 300 580 970.0
10 ФБС 24.4.6Т 2380 400 580 1 300.0
11 ФБС 24.5.6Т 2380 500 580 1 630.0
12 ФБС 24.6.6Т 2380 600 580 1 960.0

Доставка продукции

Мы поставим вам ФБС в Набережных Челнах, а так же в любую точку Ресупублики Татарстан в кратчайшие сроки. Благодаря собственному автопарку у нас есть возможность выполнять заказы сразу, без проволочек для поисков средств доставки. Мы доставляем заказы по графику и 24 часа 7 дней в неделю. Мы гарантируем качество и скорость выполнения заказа.

Конечная цена доставки Фундаментных блоков ФБС зависит от:

  • удаленности точки доставки
  • размеров блока и необходимого колличества
  • назначения сооружения и гидрогеологических условий
  • выбора грузоподъемности и габаритов транспортного средства, осуществляющего доставку

ФБС 24-6-6 т по стандарту: ГОСТ 13579-78

Фундаментные блоки сплошные ФБС 24-6-6 т – это надежная основа. Прочность, стойкость и долговечность – это лишь часть свойств, которым должна отвечать основа дома. Фундаментные блоки ФБС 24-6-6 т – «суровый» строительный материал, который представляет собой железобетонный краеугольный камень. Широкое применение этих элементов для строительства фундаментных конструкций не оставляет сомнений, что это действительно подходящий для этого материал. Может быть произведено строительство как жилых, так и производственных зданий.

1.Варианты написания маркировки.

Обозначение фундаментных блоков ФБС 24-6-6 т осуществляется согласно ГОСТ 13579-78 и включает две группы: буквенная – тип изделия, цифровая – размеры и класс по прочности. Написание маркировки производится следующими вариантами (ошибки в любом случае – нет):

1. ФБС 24-6-6 т т ;

2. ФБС 24-6-6 т п ;

3. ФБС 24-6-6 т ш ;

4. ФБС 24-6-6 т с ;

2.Основная сфера применения.

Блоки сплошного сечения ФБС 24-6-6 т используются для строительства сборных фундаментов для зданий различного назначения. Это могут быть как жилые дома, так и производственные строения. Блоки данного вида могут быть использованы и для дачного строительства, где заливка фундаментной конструкции не может быть произведена вручную. За счет особой формы этих железобетонных изделий строительство объекта сокращается по срокам вдвое.

Технология укладки блоков ФБС 24-6-6 т в качестве фундамента и стен подвального или технического подземного помещения полностью оправдывает себя на практике, как наиболее простая и быстровозводимая. Подвалы могут иметь различную глубину.

Фундаментные блоки ФБС 24-6-6 т могут быть применены для возведения технических зданий и неотапливаемых помещений. Монтаж фундаментных элементов производится при помощи спецтехники, для подъема на высоту используют монтажные петли. В качестве захватов используют однорогие крюки с защелкой.

3.Обозначение маркировки изделий

Фундаментные блоки сплошного сечения ФБС 24-6-6 т маркируют согласно ГОСТ 13579-78. В группе обозначений указывают тип изделия, размерный ряд. Габаритные размеры блока составляют 2380х600х580 , где соответственно указаны длина, ширина и высота.

Рассмотрим обозначение ФБС 24-6-6 т, где маркированы следующие параметры:

1. ФБС – фундаментный блок сплошной;

2. 24 – длина, указывается в дц.;

3. 6 – ширина, указывается в дц.;

4. 6 – высота, указывается в дц.

Дополнительные данные для характеристики фундаментных блоков сплошного сечения:

1. Масса – 1960 ;

2. Геометрический объем изделия – 0,8282 ;

3. Объем бетона, расходуемый на один элемент – 0,82 ;

Маркировочные знаки, дата изготовления и вес изделий должны быть нанесены на торцевую грань несмываемой черной краской. Дополнительно может быть указан товарный знак компании-производителя.

4.Основные материалы для изготовления и характеристики.

В качестве основного материала для изготовления блоков сплошного сечения ФБС 24-6-6 т используется пористый бетон. Это прочный и долговечный материал, который проявляет высокие свойства стойкости к действию различных сред. Пористая структура изделий обеспечивает их высокую теплопроводность. Малый вес позволяет не обустраивать внушительное основание для фундамента. Высокая несущая способность (могут быть построены стены в 1,5 кирпича) значительно расширяет сферу использования фундаментных блоков сплошного сечения. Так как «работа» производится под действием постоянных сдавливающих и сжимающих деформаций, блоки должны быть армированы. Плотность должна соответствовать величине – не менее чем 1800 кг/м3. Марка по прочности на сжатие должна соответствовать пределам М100, допускается применять марки М50 и М200. Бетон должен также отвечать требованиям по водонепроницаемости и морозостойкости (температурный диапазон достигает до -70 градусов), так как эксплуатация осуществляется в достаточно жестких условиях. Не допускается к закладке в фундамент элементов с трещинами, наплывами, сколами и торчащими элементами арматурной сетки. Армируется в редких случаях, используется стальная углеродистая проволока класса А1 и А111. Подобные дефекты снижают несущую способность готового элемента и приводят к его быстрой негодности (под действием пучения грунтов и в условиях постоянного действия грунтовых вод). На выходе

блок ФБС 24-6-6 т должен соответствовать заявленным качествам согласно ГОСТ 13579-78.

5.Хранение и транспортировка.

Хранение блоков сплошных ФБС 24-6-6 т производится в штабелях. Послойно укладывают деревянные подкладки. Под штабель обустраивается щебенчато-песчаная подушка. Предпочтительна сортировка по видам и сортам изделий. Транспортирование железобетонных блоков для фундаментов производится посредством спецтранспорта с надежным закреплением каждого изделия. Не допускается перегрузка транспорта, обязательно учитывается грузоподъемность машины.

Уважаемые покупатели! Сайт носит информационный характер. Указанные на сайте информация не являются публичной офертой (ст.435 ГК РФ). Стоимость и наличие товара просьба уточнять в офисе продаж или по телефону 8 (800) 500-22-52

Размеры фундаментных блоков фбс: технические характеристики и маркировка

 

Устройство надежного фундамента – необходимое условие при строительстве прочного и долговечного дома. В современном строительстве все более популярны сборные или комбинированные фундаментные конструкции. Оптимизировать затраты на сооружение фундамента с обеспечением его высокой прочности позволяют бетонные фундаментные блоки Ф, ФЛ, ФБС и другие, широкий ассортимент которых позволяет подобрать продукцию подходящих размеров.

Технические характеристики

По форме эта продукция представляет собой прямоугольный параллелепипед, материалы для изготовления: тяжелый, керамзитовый или силикатный бетон, плотность которого не менее 1800 кг/м3.

Класс прочности на сжатие и размеры этой продукции определяют:

  • прочность создаваемой конструкции;
  • технология укладки;
  • сроки проведения работ;
  • стоимость продукции.

Размеры фундаментных блоков регламентируются ГОСТом 13579-89, их выбор зависит от:

  • толщины стен;
  • характеристик грунта;
  • массы строения;
  • требуемой прочности основания;
  • площади фундамента.

Маркировка фундаментных блоков: Ф, ФЛ, ФБС, БФ, ФР, ФБП

Тип элементов нулевого цикла обозначается буквенно-цифровыми символами. Буквы означают:

  • Ф – изделия стаканного типа, устанавливаются под колонны, изготавливаются из тяжелого бетона или железобетона;
  • ФЛ – ж/б продукция, применяемая для устройства ленточных фундаментов;
  • ФБС – сплошные неармированные изделия, востребованные для сооружения фундаментов, стен подвалов и технических подполий;
  • ФБП – блоки фундаментные пустотные;
  • БФ – ж/б ленточные, используются при возведении стен объектов сельскохозяйственного и промышленного назначения;
  • ФР – ж/б элементы для трехшарнирных рам.

В маркировке после букв располагаются цифры, которые характеризуют размеры изделий, выраженные в дециметрах, округленных до целых чисел:

  • для ФЛ указывают ширину и длину блока;
  • для остальных – длину, ширину, высоту.

Как правильно выбрать элементы для нулевого цикла?

Советы по выбору размеров фундаментного блока:

  • Оптимально, чтобы на длину стены приходилось 4-5 штук.
  • Чем неустойчивей грунт, тем габаритнее должны быть блоки. Для глин и суглинков, оказывающих давление на элементы нулевого цикла, выбирают крупногабаритные полнотелые изделия ФБС 24.6.6. Для использования на сухих песчаных грунтах, не требующих глубокой закладки фундаментной ленты, подойдут ФБС 12.6.6.
  • Блок может выступать с одной стороны стены не более чем на 100 мм, с обеих сторон – не более чем по 60 мм.

Таблица размеров и других характеристик фундаментных блоков ФБС

Цифровое обозначение

Размеры, мм

Масса, кг

Длина

Ширина

Высота

24.3.6

2380

300

580

970

24.4.6

2380

400

580

1300

24.5.6

2380

500

580

1630

24.6.6

2380

600

580

1960

12.2.6

1180

200

580

320

12.3.6

1180

300

580

485

12.4.6

1180

400

580

640

12.5.6

1180

500

580

790

12.6.6

1180

600

580

960

12.2.3

1180

200

280

160

12.3.3

1180

300

280

240

12.4.3

1180

400

280

310

12.5.3

1180

500

280

380

12.6.3

1180

600

280

460

9.2.6

880

200

580

235

9.3.6

880

300

580

350

9.4.6

880

400

580

470

9.5.6

880

500

580

590

9.6.6

880

600

580

700

Для малоэтажных домов небольшой массы, построенных из дерева или пеноблоков, производители предлагают малогабаритные изделия, выпускаемые в соответствии с ТУ с размерами 400х200х200 мм. Их можно укладывать самостоятельно, без использования тяжелой строительной техники. Также популярны нестандартные ФБС 6.6.6 из тяжелых бетонов, применяемые для сооружения:

  • стен подвалов;
  • фундаментов столбчатого типа для небольших строений сезонного проживания;
  • для создания комбинированных оснований – в сочетании с ленточными фундаментами.
Поделиться ссылкой:

Производим и предлагаем продукцию:

Читайте также:

ФБС 24.6.3

Блоки ФБС 24.6.3 — бетонные фундаментные блоки широкого назначения, производятся согласно ГОСТ 13579-78 из тяжелого бетона класса В 7.5 (М100). Применяются для устройства прочного фундамента как жилых, так и производственных зданий, при строительстве подвалов, гаражей, складских помещений, для возведения стен, а иногда и в качестве преград при дорожном строительстве.

Основная задача фундаментных блоков ФБС — равномерное распределение нагрузки от каркаса здания по всему периметру грунтового пласта, поэтому крайне важно перед началом закладки фундамента определить тип почвы и грунта, проверить уровень и глубину промерзания в зимний период, определить место пролегания подземных вод и сделать расчет по ожидаемой нагрузке на фундамент (с запасом для безопасности). На основе этих данных готовится проект, в котором учитываются все нюансы раскладки фундаментных блоков и подушек, которые, к слову, обеспечивают надежность закладываемого фундамента. Помимо этого, необходимо сделать правильную гидроизоляцию фундаментных блоков, чтобы избежать агрессивного воздействия грунтовых вод, поэтому блоки покрываются битумом.

ФБС 24.6.3 идеально подходят для закладки ленточного фундамента, который представляет собой железобетонные полосы, идущие по периметру всего здания. Устройство ленточного фундамента подходит для домов с бетонными стенами; для домов с монолитными, сборными железобетонными и металлическими перекрытиями; для домов, где планируется подвал или цокольный этаж; а так же в тех случаях, когда существует угроза неравномерных осадок фундамента из-за неоднородности грунтов на участке. Ленточный фундамент из блоков ФБС 24.6.3 применяют в сильно пучинистых и влагонасыщенных грунтах, потому что он сработает как одно целое, перераспределит усилия и стены дома не дадут трещин и деформаций.

Аббревиатура ФБС расшифровывается как «фундаментный блок сплошной». Первая цифра в маркировке означает длину в дециметрах, вторая — ширину, а третья — высоту. Буква «Т» обозначает, что блок изготовлен из тяжелого бетона.

Сфера применения

Главная цель использования фундаментных блоков ФБС — это создание прочной и надежной опоры для постройки. Грамотно установленные ЖБИ данного типа предохраняют помещение от влаги и гниения. Бетонные блоки не деформируются со временем и отлично выдерживают воздействие грунтовых вод, так как отличаются низким водопоглощением. На поверхность блоков наносится битум, защищающий их от разрушения. Швы между блоками заполняются цементным раствором. Таким образом, железобетонные блоки ФБС используют в тех случаях, когда необходимо выдержать высокие нагрузки от стен здания на грунтовых поверхностях.

 

Фундаментные блоки ФБС являются идеальным материалом для подвальных и технических помещений. Помимо этого, они могут быть использованы для дачного строительства, в котором заливка фундаментной конструкции не может быть произведена вручную. Монтаж фундаментных блоков производится с помощью спецтехники. Для подъема на высоту применяются монтажные петли. Захват блоков осуществляется однорогими крюками с защелкой. Использование данного вида ЖБИ сокращает строительство объекта вдвое.

Габариты блоков ФБС 24.6.3

  • Длина – 2380 мм (с округлением значения до целого числа, т.к. длина вышеуказанного блока 2380 мм)
  • Ширина – 600 мм (с округлением значения до целого числа, т.к. ширина составляет 600 мм)
  • Высота – 280 мм (с округлением значения до целого числа, т.к. высота составляет 280 мм)
  • Масса – 1.000 т
  • Класс бетона по прочности на зажатие – В7.5
  • Марка бетона по прочности на зажатие – М100
  • Технические условия – ГОСТ 13579-78

Технические характеристики

Блоки ФБС из тяжелого бетона обладают высокими техническим характеристиками, благодаря чему не поддаются деформации. Они имеют повышенные показатели к морозоустойчивости, влагоустойчивости и агрессивной среде, поэтому спокойно выдерживают широкий диапазон температур, чем могут похвастаться далеко не все ЖБИ.

Такие изделия не крошатся, не гниют, не выделяют токсичных веществ и устойчивы к коррозии. Выгода от использования тяжелого бетона обуславливается еще и тем, что благодаря своей солидной массе фундаментный блок будет более прочным, долговечным и устойчивым. Армирование блоков осуществляется крайне редко, при этом используется стальная углеродная проволока класса А1 и А111. Но такая конструкция быстрее приводит фундаментные блоки в негодность.

Проверка качества фундаментных блоков происходит поэтапно:

  • Сначала оценивается состояние и качество бетона. Выбраковке подлежит изделие, в котором имеются трещины, не соответствующие стандартам. Допускаются только поверхностные трещины, шириной не более 0.3 мм, которые могут возникнуть в результате усадки бетонной смеси;
  • Готовый для монтажа блок отвечает определенным габаритам, обозначенным в проектных чертежах. Его поверхность должна быть плоской и гладкой. Отклонения по размерам не могут превышать 13 мм по длине, 8 мм по ширине и высоте, 5 мм по размерам вырезов. Отклонения по прямолинейности профиля не может превышать 3 мм на всю длину и ширину блока;
  • Поверхность изделия, которое допускается в дальнейшую эксплуатацию, должна быть без существенных дефектов. Имеющиеся углубления и наплывы, образование которых невозможно избежать на стадии производства, не должны превышать 15 мм. Небольшие дефекты можно будет замазать бетонной смесью, непосредственно перед установкой. Блоки ФБС могут иметь несколько типов поверхности — лицевую, под покраску; лицевую, под отделку с применением керамических плиток; лицевую, без отделки; нелицевую, которая не видна в условиях эксплуатации;
  • Особым условием пригодности фундаментного блока для дальнейшей эксплуатации является наличие технического паспорта (сертификата качества). В нем указывается вся информация о готовом изделии, технические параметры, дата производства, маркировочная формула, морозостойкость и водонепроницаемость. Кроме этого, наличие технического паспорта является обязательным условием при транспортировке и хранении изделия. Помимо этого на боковую поверхность блоков всегда наносятся маркировочные знаки.

Хранение и доставка

Готовые блоки рекомендуется укладывать штабелями, плотно подгоняя друг к другу. Между блоками укладываются деревянные прокладки. Толщина прокладок должна быть не менее 30 мм. Поверхность, на которой расположены нижние блоки, должна быть тщательно выровнена. Сортировку следует производить по маркам с партиям изделий. Транспортировка блоков производится с надежным закреплением, предохраняющим их от смещения.

Компания «ДСК-Столица» доставляет фундаментные блоки ФБС 24.6.3 посредством транспортных компаний, соблюдая установленные требования транспортировки.

Сравнительный анализ дифференциально секретируемых белков в бессывороточной и содержащей сыворотку средах с использованием BONCAT и импульсного SILAC

Культура клеток и импульсное мечение с AHA и SILAC

U87MG был получен из Korean Cell Line Bank (KCLB). hWJ-MSC были любезно предоставлены профессором Jong Wook Chang из Медицинского центра Samsung, Республика Корея, и культивирование клеток было выполнено в соответствии с его ранее опубликованным методом 49 . U87MG и hWJ-MSC культивировали в среде DMEM (Gibco, Rockville, MD) с добавлением 10% FBS (Gibco, Rockville, MD), 1% пенициллина и стрептомицина (Gibco, Rockville, MD) при 37 ° C в увлажненной 95 % воздуха, 5% CO 2 инкубатор .Клетки высевали 2,2 × 10 6 клеток в чашки для культивирования 100 мм (Nunc, Naperville, IL) или 5 × 10 6 клеток в чашки для культивирования 150 мм и инкубировали в течение 24 часов. В экспериментах по оптимизации BONCAT культивируемые клетки сначала обедняли метионином в среде без метионина (Gibco) с 10% диализованным FBS в течение 1 часа, а затем инкубировали в течение 24 часов в той же среде с добавлением 1 мМ AHA (Invitrogen, Carlsbad. , CA) и 10% диализованного FBS. В случае экспериментов BONCAT-pSILAC клетки были истощены по метионину, лизину и аргинину в обедненной среде (состав DMEM без GMP без метионина, аргинина и лизина; Gibco) с 10% диализованным FBS в течение 1 часа, а затем инкубировали в течение 24 ч в той же среде с добавлением 1 мМ AHA и либо 0.398 мМ [ 13 C 6 , 15 N 4 ] L-аргинин и 0,789 мМ [ 13 C 6 , 15 N 2 ] L-лизин (Cambridge Isotope Laboratories, Inc.) в виде тяжелого изотопа с 10% диализованного FBS или 0,398 мМ [ 13 C 6 ] L-аргинина и 0,789 мМ [4,4,5,5-D 4 ] L-лизина (Cambridge Isotope Laboratories, Inc.) как средний изотоп без FBS. После инкубации осторожно собирали питательную среду. Плавающие клетки и клеточный дебрис удаляли центрифугированием (400 × g, 10 мин, 4 ° C) с последующей стерильной фильтрацией (размер пор: 0.22 мкм, Millipore, MA). Любая среда, содержащая 5% или 10% FBS, называется SCM, а любая среда без FBS — SFM.

Обогащение вновь синтезированных белков с помощью фильтра и переваривание на гранулах

Недавно синтезированные и секретированные белки были обогащены из концентрированной среды с использованием набора Click-iT® Protein Enrichment Kit (Invitrogen C10416), используя протокол поставщика с небольшими изменениями 11 . Обычно для концентрированного SCM использовали 100 мкл суспензии агарозной смолы.Чтобы определить подходящий объем SCM для реакции CuAAC, эксперименты по обогащению проводили при пяти различных объемных условиях (3, 10, 20, 30 и 60 мл) среды, содержащей 10% FBS. SCM концентрировали до ~ 250 мкл путем ультрафильтрации с использованием устройств для центробежных фильтров Amicon Ultra-15 (Millipore, MA) и заменяли на денатурационный буфер, содержащий 8 М мочевину и 100 мМ Трис (pH 8,2), повторяя разбавление. ультрафильтрация дважды. Реакцию CuAAC проводили в течение ночи при комнатной температуре после смешивания образца с соответствующей смолой и растворами, предоставленными поставщиком.Всю смесь, доведенную до 0,5 мл водой, затем переносили в центробежный фильтр 0,22 мкм (Millipore). Все водорастворимые материалы были удалены вращением фильтрующего блока, оставив только смолу. После этого смолу с присоединенными белками обрабатывали 20 мМ DTT в 0,5 мл 1% SDS при 70 ° C в течение 15 минут, а затем 40 мМ йодацетамида в 0,5 мл 1% SDS при комнатной температуре в течение 30 минут в темноте. и промывали 0,5 мл 1% SDS, 0,5 мл 8 М мочевины / 100 мМ Трис (pH 8,2) и 0,5 мл 20% ацетонитрила.Каждый этап промывки повторяли не менее пяти раз. Промытую смолу ресуспендировали в буфере, содержащем 100 мМ Трис (pH 8,2), 2 мМ CaCl 2 и 10% ацетонитрил, смешивали с 0,5 мкг трипсина и инкубировали в течение 16 ч при 37 ° C. Пептиды продукта расщепления трипсина собирали центрифугированием, и смолу промывали 0,5 мл воды. Два раствора объединяли, подкисляли 0,5% TFA и анализировали с помощью ЖХ-МС / МС.

Жидкостная хроматография и тандемная масс-спектрометрия (LC-MS / MS)

Масс-спектрометр LTQ-XL (Thermo Scientific, Сан-Хосе, Калифорния) использовался во время экспериментов по оптимизации BONCAT.Образцы пептидов восстанавливали в 0,4% уксусной кислоте, и одну пятую образца вводили в колонку Magic C18aq с обращенной фазой (15 см × 75 мкм, 200Å, 5U) на системе ВЭЖХ Agilent 1200 (Agilent Technology). Колонку предварительно уравновешивали 95% растворителем A (0,1% муравьиной кислоты в воде) и 5% растворителем B (0,1% муравьиной кислоты в ацетонитриле). Пептиды элюировали при скорости потока 0,4 мкл / мин с линейным градиентом 5-40% растворителя B в течение 120 мин. Напряжение ESI было установлено равным 1,9 кВ, напряжение капилляра — 30 В, а температура нагретого капилляра — 250 ° C.МС-съемку сканировали от 300 до 2000 m / z, после чего следовали три зависимых от данных МС / МС-сканирования со следующими параметрами: ширина изоляции 1,5 m / z; нормализованная энергия столкновения 25%; длительность динамического исключения 180 с. Оптимизационный эксперимент проводился в двух, трех или четырех экземплярах.

Q Exactive масс-спектрометр (Thermo Fisher Scientific) использовался в экспериментах BONCAT-pSILAC. Один микрограмм образца, восстановленного в 0,4% уксусной кислоте, вводили в обращенно-фазовую колонку C18 (20 см × 75 мкм i.д., 3 мкм, 120 Å, в собственной упаковке; Dr. Maisch GmbH) на системе Eksigent nanoLC-ultra 1D plus при 95% растворителе A и 5% растворителе B. Пептиды элюировали с линейным градиентом от 5% до 40% растворителя B в течение 200 мин, а затем 80% растворителя B. промывка и 95% растворитель Повторное уравновешивание при скорости потока 300 нл / мин с общим временем работы 230 мин. Обзорные МС-спектры полного сканирования (m / z 350–1800) были получены с разрешением 70000. Параметры ионизации источника были следующими: напряжение распыления 2,5 кВ; капиллярная температура 300 ° С; и уровень s-линзы, 44.0. Ширина пика МС на полувысоте была <30 с. Спектры МС / МС 12 наиболее интенсивных ионов из сканирования MS1 с зарядовым состоянием ≥2 были получены со следующими параметрами: разрешение 17500; ширина изоляции 2,0 м / з; нормализованная энергия столкновения 27%; порог селекции ионов, 4.00E ± 03 отсчетов; и соответствующий пептид, «предпочтительный». Эксперимент проводили в трех повторностях. Данные масс-спектрометрической протеомики были депонированы в Консорциум ProteomeXchange через репозиторий партнеров PRIDE с идентификатором набора данных PXD007529 50 .

Анализ масс-спектрометрических данных

Необработанные данные ЖХ-МС / МС обрабатывали с использованием Sequest HT в Proteome Discoverer 2.1.1.21 (Thermo Fisher Scientific Inc.). Если не указано иное, использовалась эталонная база данных протеома UniProtKB человека (выпущена в январе 2016 г .; 20 218 записей) в сочетании со списком экспериментально подтвержденных белков FBS (199 записей). В нашей предыдущей публикации 4 результат поиска данных анализа секретома по такой составной базе данных FBS человека (HFDB) был более надежным с меньшим количеством ложноположительных и ложноотрицательных идентификаций по сравнению с использованием только базы данных человека.Параметры поиска включали два пропущенных сайта расщепления трипсином, карбамидометилирование цистеина как фиксированную модификацию, окисление метионина и ацетилирование N-концевого белка как вариабельные модификации. Идентификацию пептидов проводили с допустимым исходным допуском по массе предшественника до 15 м.д. и допустимым отклонением массы фрагмента 0,05 Да. Результаты по пептидам и белкам были отфильтрованы до 1% FDR. Для проверки включения AHA перед экспериментом по обогащению AHA (-4,9863 Да) и l-2,4-диаминобутаноат (-30.9768 Да), продукт восстановления AHA, были указаны как переменные модификации для метионина.

В случае данных pSILAC Proteome Discoverer 2.2.0.388 использовался с тремя поисковыми системами: Sequest HT, Mascot и MS Amanda. Каждая поисковая машина была настроена на средний и тяжелый изотоп SILAC в виде переменных модификаций с допуском массы предшественника до 15 ppm и допустимым отклонением массы фрагмента 0,05 Да. В окончательный список результатов были включены только белки с хотя бы одним уникальным пептидом, поддерживаемые всеми тремя поисковыми системами.Отношения H / M пептидов рассчитывали путем деления интенсивностей тяжелого изотопа на интенсивности средних изотопов и затем преобразовывали в значения log2. Для вменения пропущенного значения было дано наименьшее целое число, превышающее наибольшее отношение пептидов log2: значение -8 было присвоено пептидам, тяжелый изотоп которых не наблюдался; значение 8 было присвоено пептидам, средний изотоп которых не наблюдался. Соотношение белков представляло собой среднее геометрическое всех уникальных соотношений пептидов.

Совместное культивирование хондроцитов и hWJ-MSC

Человеческие хондроциты, полученные из АТСС (CRL-2847, Манассас, Вирджиния), культивировали в DMEM (Гибко, Роквилл, Мэриленд) с добавлением 10% FBS (Гибко, Роквилл, Мэриленд) , 1% пенициллина и стрептомицина (Gibco, Rockville, MD) при 37 ° C с 5% CO 2 .При ~ 80% конфлюэнтности клетки хондроцитов человека (нижняя камера блока Transwell) культивировали совместно с hWJ-MSC в течение 24 часов в SFM или SCM. hWJ-МСК были засеяны (1 × 10 5 / мл) в верхнюю камеру 6-луночных вставок для трансвеллеров (BD Falcon). После 24-часового инкубационного периода клетки собирали трипсинизацией (0,25%, Gibco-Invitrogen) и промывали DPBS (Gibco, Rockville, MD).

Анализ пролиферации клеток

Пролиферацию клеток анализировали с использованием набора для подсчета клеток-8 (CCK-8, Dojindo Molecular Technologies, Кумамото, Япония).Клетки хондроцитов человека (1 × 10 5 / мл, нижняя камера блока Transwell), культивированные совместно с hWJ-MSC (1 × 10 5 / мл, верхняя камера блока Transwell) в 6-луночной камере. -трансвелл за 24 ч. Затем в каждую лунку добавляли 10% раствор CCK-8 и клетки инкубировали в течение 4 ч при 37 ° C с 5% CO 2 . Затем реакционный раствор (по 100 мкл каждого) переносили в 96-луночный планшет и анализировали путем измерения оптической плотности при 450 нм с использованием считывающего устройства для микропланшетов (спектрофотометр Bio-Rad X-Mark, Hercules, CA).

Вестерн-блот-анализ

Клетки лизировали в буфере RIPA (Fisher Scientific, Pittsburgh, PA) в присутствии коктейля ингибиторов протеазы Xpert (GenDEPOT, Barker, TX). Белки разделяли 4–20% гелями трис-глицина (Bio-rad, Hercules, CA) и переносили на нитроцеллюлозную мембрану. Тестируемые антитела включали антитело против циклина D1, антитело против p53 (Cell Signaling, Дэнверс, Массачусетс), антитело против SOX9 (Santa Cruz Biotechnology, Даллас, Техас), антитело против MMP3, антитело против MMP13 (Abcam , Кембридж, Массачусетс) и антитела к β-актину (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури) при 4 ° C в течение ночи.После промывки мембраны инкубировали со вторичными антителами (козьи антимышиные IgG-HRP; козьи против кроличьих IgG-HRP; Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури) в течение 1 ч при комнатной температуре. Блоты проявляли с использованием ECL (Thermo Scientific Pierce, Rockford, IL), и полосы белка получали путем воздействия на систему обнаружения изображений LAS-4000 (Fujifilm, Токио, Япония).

Биоинформатический анализ

Идентифицированные белки анализировали с помощью биоинформатических инструментов ProteinCenter (Proxeon Bioinformatics, http: // www.cbs.dtu.dk/services). Мы сделали несколько белковых последовательностей в одном файле формата FASTA и отправили его в каждую программу. SignalP (версия 4.0, http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP4.0) использовался для прогнозирования присутствия сигнальных пептидов в идентифицированных белках (значения D-отсечки для сетей SignalP-noTM> 0,45. или сети SignalP-TM> 0,5 в качестве порогового значения по умолчанию для сигнального пептида = «Да») 51 . Программа SecretomeP (версия 2.0, http://www.cbs.dtu.dk/services/SecretomeP2.0) использовалась для прогнозирования возможности неклассической секреции белка (сигнальный пептид SignalP = «Нет»; и оценка SecretomeP> 0.6 в белках млекопитающих) 52 . Кроме того, программа TMHMM (версия 2.0, http://www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM2.0) использовалась для прогнозирования трансмембранных спиралей в интегральных мембранных белках 53 . Белки экзосом были определены как белки, опубликованные по крайней мере в 100 статьях в EVpedia (http://evpedia.info) 17 . Чтобы предсказать субклеточную локализацию идентифицированных белков, был использован CELLO (версия 2.5, http://cello.life.nctu.edu.tw/) 54 .

Анализ пути изобретательности (IPA, www.Ingenuity.com/) использовали для проведения анализа данных секретома hWJ-MSC вышестоящим регулятором. Загруженные данные для анализа вышестоящих регуляторов содержат доступ к UniProtKB и отношение log2 идентифицированных белков. Прогнозируемые вышестоящие регуляторы с Z-оценкой выше 2 и p-значением перекрытия ниже 0,01 считались значительно активированными.

Фетальная бычья сыворотка — FBS

Фетальная бычья сыворотка (FBS)

RMBIO способствует устойчивому здоровому росту клеток. Мы можем закупить нашу добавку для культивирования клеток FBS в Австралии, Новой Зеландии, США, а также в регионах Северной Америки, одобренных Министерством сельского хозяйства США.Мы предоставляем Сертификат анализа на все лоты.

  • FBS является наиболее часто используемым фактором роста в культуре клеток из-за высокого уровня содержания питательных веществ
  • Состав сыворотки, содержащей и восстановленной сывороткой среды для культуры клеток млекопитающих для производства антител, антигенов, стволовых клеток и вакцин
  • Криоконсервация, хранение и транспортировка биологических материалов, таких как клеточные линии и антитела
  • Базовые матрицы для элементов управления диагностического набора
  • Блокирующее средство для иммуноанализа и блоттинга
  • Вся фетальная бычья сыворотка полностью отслеживается и поставляется от проверенных поставщиков
  • Мы перерабатываем наши ФБС в одинарных контейнерах и тройных 0.1 µ стерильный фильтр. Это исключает возможность перекрестного загрязнения.
  • Доступны индивидуальные пакеты сыворотки, включая обработанные углем, инактивированные нагреванием и с низким уровнем эндотоксина. FBS расфасован в бутылки емкостью 500 мл и 1 л или индивидуальные контейнеры
  • Увеличьте рост клеток с помощью добавки Lipogro от RMBIO
  • Условия хранения: ≤ -10 ° C

Начиная с проверенных источников качественной фетальной бычьей сыворотки (FBS), мы продолжаем обрабатывать и производить FBS на нашем современном предприятии в Миссуле, штат Монтана, которое придерживается стандартов GMP и содержит строгий контроль процесса и проверенные процессы очистки CIP. .

FBS RMBIO производится в соответствии с высочайшими стандартами, чтобы снизить риски и вариативность продукта, а также обеспечить безопасность и производительность продукта. Эти стандарты встроены в всю цепочку поставок RMBIO.

Ваш заказ будет доставлен именно так, как вы его указали. У нас есть различные сорта FBS, в том числе обработанные древесным углем, инактивированные нагреванием и с низким уровнем эндотоксина. RMBIO также может быть адаптирован для удовлетворения очень специфических потребностей в добавках к среде для культивирования клеток. Наша FBS протестирована на соответствие 9CFR и соответствует требованиям FDA и USDA.Продукты фетальной бычьей сыворотки также могут быть протестированы на соответствие требованиям EMEA.

Безопасные источники и усовершенствованные производственные процессы

Фетальная бычья сыворотка — конкретные требования к тестированию продукта FBS и типичные значения приведены ниже:

Параметр Метод Спецификация
Всего белка Химический анализатор 3.0 — 4,5 г / дл
Осмоляльность По осмометру 280 — 360 мОсм / кг
pH pH-метр 6,5 — 8,5
Гемоглобин USP <90> <30 мг / дл
Альбумин Химический анализатор ≤ 4.5 г / дл
Эндотоксин LAL ≤ 10 EU / мл
IgG ELISA Как сообщалось
Анализ стерильности, микоплазмы и вирусов 9CFR 113.26, 28, 53 Проверено
Прочие параметры Комплексное химическое тестирование Как сообщалось
Параметр Метод Спецификация
Всего белка Химический анализатор 3.0 — 4,5 г / дл
Осмоляльность По осмометру 280 — 360 мОсм / кг
pH pH-метр 6,5 — 8,5
Гемоглобин USP <90> <30 мг / дл
Альбумин Химический анализатор ≤ 4.5 г / дл
Эндотоксин LAL ≤ 10 EU / мл
IgG ELISA Как сообщалось
Анализ стерильности, микоплазмы и вирусов 9CFR 113.26, 28, 53 Проверено
Прочие параметры Комплексное химическое тестирование Как сообщалось
Параметр Метод Спецификация
Всего белка Колориметрический анализ 3.0 — 4,5 г / дл
Осмоляльность По осмометру 280 — 360 мОсм / кг
pH pH-метр 6,5 — 8,5
Гемоглобин USP <90> <30 мг / дл
Альбумин Химический анализатор ≤ 4.5 г / дл
Эндотоксин LAL ≤10 EU / мл
IgG ELISA Как сообщалось
Анализ стерильности, микоплазмы и вирусов 9CFR 113.26, 28, 53 Проверено
Прочие параметры Комплексное химическое тестирование Как сообщалось
Параметр Метод Спецификация
Всего белка Колориметрический анализ 3.0 — 4,5 г / дл
Осмоляльность По осмометру 280 — 360 мОсм / кг
pH pH-метр 6,5 — 8,5
Гемоглобин USP <90> <30 мг / дл
Альбумин Химический анализатор ≤ 4.5 г / дл
Эндотоксин LAL Как сообщалось
IgG ELISA Как сообщалось
Электрофоретический ID Гель-электрофорез Характеристика
Прочие параметры Комплексное химическое тестирование Как сообщалось

Документы

Знакомство с фетальной бычьей сывороткой, класс

Обеспечение исследователей качества и прозрачности FBS

Сыворотка обычно используется в качестве добавки к основной ростовой среде в культуре клеток.Самый распространенный вид Сыворотка представляет собой фетальную бычью сыворотку (FBS) из-за высокого содержания в ней факторов, способствующих росту эмбриона. В культура клеток, сыворотка обеспечивает широкий спектр макромолекулярных белков, питательных веществ с низким молекулярным весом, белки-носители для нерастворимых в воде компонентов и другие соединения, необходимые для in vitro рост клеток, таких как гормоны и факторы прикрепления. Сыворотка также увеличивает буферную емкость среда и связывает или нейтрализует токсичные компоненты.Подбор сывороточной добавки для культивирования клеток применение в первую очередь зависит от химического определения базальной среды, типа клетки для быть выращенным, и используемая система культивирования. Ниже приведен подробный обзор методов сбора и разработка производства высокопроизводительных FBS.

Процессы сбора и обработки FBS

Процесс сбора FBS. В процессе производства FBS цельная кровь собирается в асептических одноразовые стерильные полиэтиленовые пакеты и дать им свернуться. После отделения сыворотки от сгустка объединяется и замораживается. Контроль над первоначальным сбором — решающий фактор качества финального сывороточный продукт. Для производства разрешено только сырье, соответствующее нашим спецификациям.

Обработка образцов сыворотки. Отобранные партии сывороточного сырья размораживают, проверяют на эндотоксины. и содержание гемоглобина, и только принятый материал объединяется. Объединенное сырье тщательно смешивают в условиях охлаждения и фильтруют через мембрану для обеспечения стерильности в соответствии с хорошо проверенным протокол фильтрации. Biological Industries обрабатывает FBS через последовательность предварительных фильтров и мембран. фильтры. Этап фильтрации включает использование трех 0.Мембранные фильтры 1 микрон стерилизующего класса в ряд.

После фильтрации сыворотка разливается во флаконы с помощью процесса асептического розлива, который подтверждены для обеспечения стерильности конечного продукта. Сывороточные продукты производятся в контролируемых окружающая среда (чистые помещения), предназначенная для тщательного контроля давления воздуха и твердых частиц. В производственная зона соответствует классу 100000 (ISO 8).Стерильные флаконы и оборудование хранятся в среде класса 10,000 (ISO 7), а камера розлива — в среде класса 1000 (ISO 6) с стерильный стол с ламинарным потоком воздуха класса 100 (ISO 5). Чистые помещения регулярно проверяются на предмет уровни твердых частиц и микробов, чтобы гарантировать, что система обработки воздуха, протоколы очистки и персонал осуществляет контроль стандартов. После розлива готовый продукт быстро замораживается до -20ºC. и содержаться в карантине до завершения всех тестов по контролю качества.

Контроль качества

Каждая партия FBS тестируется, чтобы подтвердить, что сыворотка соответствует письменным спецификациям. Конечный продукт выпуск осуществляется после проверки всех записей о производстве и контроле качества для определения соответствия все установленные, утвержденные письменные процедуры. Тесты включают:

Физико-химические тесты
  • Электрофоретическая картина
  • PH
  • Осмоляльность
  • Всего белков
  • Альбумин
  • IgG
  • Гемоглобин
  • Глобулины
Биохимические тесты
  • Аланинтрансаминаза (ALT)
  • Щелочная фосфатаза
  • Аспартатаминотрансфераза (АСТ)
  • Билирубин — всего
  • Билирубин — прямой
  • Азот мочевины крови (АМК)
  • Кальций
  • Хлорид
  • Холестерин
  • Креатинин
  • Креатининкиназа (CK)
  • Гамма-глутамилтрансфераза (GGT)
  • Глюкоза
  • Липопротеины высокой плотности (ЛПВП)
  • Лактатдегидрогеназа
  • Липопротеины низкой плотности (ЛПНП)
  • Фосфор (неорганический)
  • Калий
  • Натрий
  • Триглицериды (ТГ)
  • Мочевая кислота
Микробиологические тесты
  • Тесты на стерильность: тесты на бактериальную и грибковую стерильность в соответствии с действующим Фармакопеей США.
  • Загрязнение микоплазмой: в соответствии с CFR, раздел 9, часть 113 (метод культивирования).
  • Вирусные загрязнители: в соответствии с протоколами, описанными в CFR, раздел 9, часть 113 для BVD, IBR и PI3.
  • Вирусные антитела: скрининг для определения титра нейтрализующих антител к BVD, IBR и PI3.
  • Эндотоксины: исследование проводится кинетическим колориметрическим методом.
Биологическая эффективность

Тесты на рост клеток предназначены для проверки эффективности FBS в стимулировании роста клеток. Используемые клетки фибробласты (диплоидные нормальные клетки MRC-5), эпителиальные клетки (Hep-2) и клетки гибридомы. Каждый тест проведено с использованием протестированной сыворотки и проверенной контрольной партии. Стимуляция роста с использованием клеток MRC-5 — это оценивается в нескольких поколениях субкультур для выявления любых доказательств цитотоксичности и морфологические изменения клеток.

  • Клетки Hep-2 (ATCC, CCL 23): кривая роста.
  • Клетки MRC-5 (ATCC, CCL 171): тест 3 пассажей.
  • Клетки гибридомы: тестирование эффективности клонирования.

Гарантия качества — знак CE

Biological Industries Процесс производства FBS осуществляется в контролируемых условиях в контролируемой среде. Стерилизация паром на месте (SIP), фильтрация на стерильность и наполнение проходят валидацию в соответствии с требованиями основных асептических процессов.Для сыворотки существует досье (основная запись устройства) со всеми соответствующими данными, касающимися производства сыворотки. Процесс производства от сырья до конечного продукта на складе, а также тесты и результаты контроля качества документируются и регистрируются для обеспечения прослеживаемости и контроля процесса.

Продукция

Biological Industries производится в соответствии со стандартами менеджмента качества ISO 9001: 2008 и ISO 13485: 2016. Кроме того, процесс производства FBS соответствует Директиве по диагностике in vitro (IVDD 78/79 / EC) Европейского парламента.Таким образом, наша FBS получила знак CE, что делает ее пригодной для продажи в Европейском Союзе для диагностики in vitro. Сертификат соответствия губчатой ​​энцефалопатии крупного рогатого скота (BSE) был выдан биологической промышленности Европейским директоратом по качеству лекарственных средств (EDQM) в соответствии с монографиями Европейской фармакопеи. Все документы и сертификаты доступны по запросу.

Сырье, собранное или произведенное компанией Biological Industries

Biological Industries предлагает FBS американского происхождения и FBS уровня USDA.FBS американского происхождения — это FBS, произведенный из сырья, происходящего из США. FBS уровня USDA производится из сырья только из стран, сертифицированных как свободные от BSE (губчатая энцефалопатия крупного рогатого скота) и ящура (ящура). FBS класса USDA можно беспрепятственно импортировать в любую страну, и оба эти типа являются продуктом выбора во всех странах для производственных целей. Использование американского происхождения или класса USDA позволяет исследователям отправлять свои клетки или продукты своих клеток сотрудникам в других странах со строгими правилами импорта.Все продукты FBS, обрабатываемые на производственном предприятии Biological Industries в Израиле, соответствуют FBS уровня USDA.

У нас есть сыворотки, подходящие для специальных исследований и специальных анализов, включая исследования стволовых клеток, иммуноанализы, антитела и многое другое.
Продукт
Описание детали / использование
ГАММА-ОБЛУЧЕНИЕ FBS
Гамма-облучение — это процесс, который включает облучение материала гамма-фотонами высокой энергии, выделяемыми радиоизотопами, такими как кобальт 60.Эта энергия передается от фотонов к продуктам и отвечает за инактивацию организма за счет ионизации связей нуклеиновых кислот. Облучение сыворотки предназначено для обеспечения полной уверенности в вирусной инактивации. Было проведено обширное валидационное исследование для валидации процесса облучения с использованием FBS с добавлением нескольких вирусов. Мы продемонстрировали, что свойства и характеристики клеточной культуры FBS не изменяются под действием гамма-излучения до 3,5 Мрад.
ДИАЛИЗИРОВАННЫЙ FBS
Большинству клеток, выращиваемых в культуре, требуется сывороточный компонент ростовой среды для поддержания их пролиферативной способности.В то время как цельная сыворотка допустима для рутинных целей, исследования, включающие параметры питания или включение маркированного материала, требуют, чтобы исследуемый компонент был удален из сыворотки. Наиболее часто используемый метод удаления этих компонентов — диализ цельной сыворотки. Для диализа путем диафильтрации сыворотка циркулирует через полое волокно методом концентрирования. Однако фильтрат заменяется добавлением физиологического раствора к сыворотке.
ТЕПЛО НЕАКТИВИРОВАН FBS
Тепловая инактивация сыворотки осуществляется путем повышения температуры сыворотки до 56 ° C и поддержания этой температуры в течение 30 минут.Тепловая инактивация — это предпочтительный метод разрушения комплемента и гарантии того, что клетки не будут лизироваться связыванием антител.
ЭМБРИОНАЛЬНЫЕ СТВОЛОВЫЕ КЛЕТКИ ИСПЫТАНЫ FBS
Эмбриональные стволовые (ЭС) клетки — это плюрипотентные клетки, происходящие из внутренней клеточной массы бластоцисты. Стволовые клетки можно поддерживать in vitro в течение длительных периодов времени без потери их способности дифференцироваться во все клеточные линии при повторной имплантации обратно в бластоцисту.ES-клетки могут дифференцироваться in vitro в различные типы клеток, включая нейрональные, мышечные, эндотелиальные и гемапотоэтические клетки-предшественники. Общие условия культивирования хорошо установлены и обычно требуют выращивания ES-клеток на неактивном слое питающих клеток или с компонентами базальной мембраны (матригель, фибронектин, ламинин). При выращивании ES-клеток одним из наиболее важных параметров является поддержание клеток в недифференцированном состоянии. Перед использованием сыворотки для культивирования ES-клеток необходим предварительный скрининг.Различные партии сывороток проверяются на рост человеческих ES-клеток с использованием MEF в качестве питающего слоя для четырех пассажей. Для скрининга измеряются следующие параметры: Морфология колоний человеческих ES-клеток, эффективность посева и скорость дифференцировки: анализ поверхностного маркера ES-клеток человека, экспрессированного на мембране недифференцированных клеток (анализ FACS). Результаты используются как показатель качества сыворотки для роста и поддержания недифференцированных стволовых клеток.
ТЕСТИРОВАНИЕ МЕСЕНХИМАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК FBS
Мезенхимальные стволовые клетки человека (hMSC) представляют собой мультипотентные взрослые стволовые клетки, присутствующие в различных тканевых нишах человеческого тела. hMSC имеют преимущества по сравнению с другими типами стволовых клеток из-за широкого разнообразия их тканевых источников, поскольку они являются иммуно-привилегированными, а также из-за их способности специфически мигрировать в опухоли и раны in vivo. FBS, квалифицированные для мезенхимальных стволовых клеток, проходят предварительный скрининг на следующее: способность к дифференцировке стволовых клеток, морфология, рост и размножение клеток, а также клональная эффективность.Каждая партия FBS тщательно тестируется на способность поддерживать рост и распространение недифференцированных hMSC in vitro. Результаты используются как показатель высочайшей чистоты сыворотки, которая подчеркивает максимальное расширение неизмененных МСК, в то же время сохраняя их неограниченную мультипотентность.
ФУНКЦИОНАЛЬНО ИСПЫТАН для использования с ТЕТРАЦИКЛИН-РЕГУЛИРУЕМОЙ СИСТЕМОЙ FBS
В этих системах промотор включается или выключается тетрациклином, что позволяет контролировать экспрессию клонированного гена.Эти специальные партии FBS были предварительно протестированы, чтобы гарантировать, что они допускают диапазон регулируемой тетрациклином индукции с хорошо охарактеризованными линиями Tet. Как и все наши продукты FBS, сырье всегда происходит из стран, свободных от коровьего бешенства и ящура.
УГОЛЬНО-ПОЛОСНЫЙ FBS
FBS, очищенный от угля, используется для выяснения эффектов гормонов в различных системах in vitro.Исследования включают связывание стероидных рецепторов, стероидную регуляцию клеточных рецепторов, секрецию гормонов различными тканями и функцию гормонов щитовидной железы. Процедура производства включает использование древесного угля и декстрана для удаления гормонов из FBS.

Программа резервирования сыворотки

Сыворотка как биологический материал представляет собой неопределенную смесь компонентов, в которой состав фетальной бычьей сыворотки варьируется от партии к партии.Некоторые типы клеток чувствительны к изменениям в сыворотке крови. Заказчикам рекомендуется оценивать образцы сыворотки с помощью своей собственной системы культивирования и клеток, а мы резервируем количество конкретных партий до завершения тестирования заказчиком. Чтобы узнать больше, свяжитесь с нами, и сотрудник нашей службы поддержки свяжется с вами.

Удаление липидов сыворотки и липидных метаболитов для исследования клеточной биологии рака груди

RT соответствует времени удерживания.

i) Стандарты.

C16: 0-керамид. RT 45.9. [M-H] — m / z : наблюдаемое 536,4981; теоретическое 536,5048. Наблюдаемые фрагменты: 237.2196, 280.2620, 254.2460, 296.2555, 488.4770.

C16: 0-дигидроцерамид. РТ 46.4. [M-H] — m / z : наблюдаемое 538,5132; теоретическая 538,5205. Наблюдаемые фрагменты: 239.2371, 282.2787, 254.2477, 296.2564, 490.4931.

ТЕГ (13: 0/13: 0/13: 0). RT 45.7. [M + NH 4 ] + m / z : наблюдается 698,6358; Теоретический 698.6293. Наблюдаемые фрагменты: 197.1935, 467.4123.

ПК (16: 0/18: 1). RT 42.1. [M + H] + m / z : наблюдаемое 760,5863; теоретический 760,5851. Наблюдаемые фрагменты: 184.0779, 496.3480, 577.5164.

Холестерин. RT 40.2. [M + H-H 2 O] + m / z : наблюдается 369,3575; теоретический 369,3516. Наблюдаемые фрагменты: 81.0733, 109.1012, 135.1178, 147.1192, 203.1819, 215.1803, 233.2336, 243.2029, 247.2369, 257.2261, 259.2442, 287.2686.

ii) Идентификация видов на основе целевого анализа.

Показана информация о фрагментации двух или трех репрезентативных видов из каждого семейства.

C16: 0-керамид. RT 45.9. Соединение было назначено на основе картины фрагментации, обнаруженной стандартом церамидов. [M-H] — m / z : наблюдаемое 536,5083; теоретическое 536,5048. Наблюдаемые фрагменты: 237.2227, 254.2484, 280.2647, 296.2579, 488.4797, 506.4944.

C24: 0-керамид. RT 50.3. Соединение было назначено на основе картины фрагментации, обнаруженной стандартом церамидов.[M-H] — m / z : наблюдаемое 648,6270; теоретическая 648,6300. Наблюдаемые фрагменты: 237.2223, 349.3453, 392.3878, 600.6036, 618.6161.

C20: 0-дигидроцерамид. РТ 48.5. Соединение было назначено на основании картины фрагментации, обнаруженной стандартом дигидроцерамида. [M-H] — m / z : наблюдаемое 594,5852; теоретическая 594,5831. Наблюдаемые фрагменты: 239.2351, 282.2802, 300.2922, 310.3105, 336.3240, 546.5561.

C24: 0-дигидроцерамид. РТ 50.6. Соединение было назначено на основании картины фрагментации, обнаруженной стандартом дигидроцерамида.[M-H] — m / z : наблюдаемое 650,6401; теоретическая 650,6457. Наблюдаемые фрагменты: 239.2422, 366.3676, 392.3879, 602.6237, 618.6226.

C48: 1-триацилглицерин. RT 47.3. Соединение было назначено на основе картины фрагментации, обнаруженной стандартом триацилглицерина. [M + NH 4 ] + m / z : наблюдается 822.7553; теоретическое 822,7545. Наблюдаемые фрагменты: 237.2224, 239.2345, 551.5055, 549.4902.

C52: 2-триацилглицерин. RT 47.4. Соединение было назначено на основе картины фрагментации, обнаруженной стандартом триацилглицерина.[M + NH 4 ] + m / z : наблюдается 876,8114; теоретический 876.8015. Наблюдаемые фрагменты: 239.2425, 265.2647, 577.5202, 603.5477.

C56: 4-триацилглицерин. РТ 47,8. Соединение было назначено на основе картины фрагментации, обнаруженной стандартом триацилглицерина. [M + NH 4 ] + m / z : наблюдается 928,8383; теоретическая 928,8328. Наблюдаемые фрагменты: 267.2609, 287.2402, 607.5729, 627.5421.

C32: 0-фосфатидилхолин. РТ 41.4. Соединение было назначено на основе картины фрагментации, обнаруженной стандартом фосфатидилхолина. [M + H] + m / z : наблюдаемое 734,5636; теоретический 734,5694. Наблюдаемые фрагменты: 184.0751, 478.3329, 496.3373, 551.5079.

C36: 2-фосфатидилхолин. RT 42.2. Соединение было назначено на основании картины фрагментации, обнаруженной стандартом фосфатидилхолина. [M + H] + m / z : наблюдаемое 786,5964; теоретический 786,6007. Наблюдаемые фрагменты: 184.0813, 504.3491, 522.3605, 603.5394.

C40: 4-фосфатидилхолин. RT 42.9. Соединение было назначено на основании картины фрагментации, обнаруженной стандартом фосфатидилхолина. [M + H] + m / z : наблюдаемое 838,6285; теоретический 838,6320. Наблюдаемые фрагменты: 184.0787, 506.3569, 524.3685, 554.3639, 572.3662, 655.5576, 779.5633.

Холестерин. RT 40.2. Соединение было назначено на основе модели фрагментации, обнаруженной стандартом холестерина. [M + H-H 2 O] + m / z : наблюдается 369.3575; теоретический 369,3516. Наблюдаемые фрагменты: 81.0706, 109.1035, 133.1016, 147.1223, 203.1819, 215.1827, 233.2195, 243.2066, 257.2261, 259.2455, 287.2862.

Основы FBS | Thermo Fisher Scientific

Что такое фетальная телячья сыворотка (FBS)?

  • Сыворотка — фракция крови янтарного цвета, остающаяся после естественного свертывания крови; обычно ее дополнительно очищают центрифугированием, которое служит для удаления оставшихся клеток крови
  • Фетальная бычья сыворотка (FBS) — это сыворотка, полученная из крови, взятой у плода крупного рогатого скота через закрытую систему сбора

Для чего используется FBS?

  • Фетальная бычья сыворотка (FBS) используется в качестве добавки для роста in vitro клеточной культуры эукариотических клеток.Сыворотки животных — как бычьи, так и не бычьи — используются в клеточных культурах, наиболее широко используемой является фетальная бычья сыворотка (FBS).
  • FBS содержит факторы роста и очень низкие уровни антител, что делает его универсальным для многих различных применений в культуре клеток. В FBS содержится более 1000 компонентов, включая белки, электролиты, липиды, углеводы, гормоны, ферменты и другие неопределенные компоненты, которые необходимы во многих условиях культивирования для поддержки роста клеток.

Кто пользуется FBS?

  • Как академические, так и промышленные исследователи и ученые в производственной среде используют фетальную бычью сыворотку (FBS) в своих средах для культивирования клеток для исследований, включая биотехнологические исследования / производство, производство вакцин, клонирование и диагностику животных.

FBS продвигает здоровую культуру

Фетальная бычья сыворотка (FBS) обеспечивает наиболее надежную систему культивирования для самого широкого диапазона типов клеток, как клеточных линий, так и первичных клеток.

FBS является источником:

  • Факторы роста и прикрепления для клеток
  • Липиды
  • Гормоны
  • Питательные вещества и источники энергии, необходимые для роста
  • Носители
  • Буферная способность / защита — сдвиги pH, протеазы, токсины
  • Связывающие и передающие белки

Важно отметить:

  • Обычно используется в концентрации 5–10% в основной среде
  • Состав FBS не определен и варьируется от партии к партии

Важные факторы, которые следует учитывать при выборе FBS

FBS защищает клетки от:

  • больших сдвигов pH
  • протеаз
  • токсичных агентов
  • сил сдвига
  • агентов, которые обычно разрушают монослои прикрепленных клеток (FBS действует, инактивируя эти агенты)

рост клеток в наличие качественной FBS обычно составляет:

  • Rapid
  • Стабильность и воспроизводимость
  • Отсутствие нежелательных изменений дифференциации
  • Не затрудняется внесение вредных загрязняющих веществ

Основные проблемы исследователя в отношении непрерывности поставок FBS:

  • Согласованность между партиями
  • Воспроизводимые результаты
  • Колебания цен
  • Целостность продукта

Хотите узнать больше и расширить свои знания об основах FBS?

Обратитесь к нашим подробным руководствам ниже, чтобы узнать больше о сборе FBS, приложениях и многом другом.

Рыночные сценарии, определяющие доступность и цену FBS

Фетальная бычья сыворотка (FBS) является побочным продуктом мясной промышленности. Никто не может повлиять на количество доступных FBS. Засуха, высокие цены на корма и высокий спрос на говядину приводят к увеличению доступности FBS. Когда фермеры восстанавливают свои стада, на рынке становится меньше FBS. Результат? Трудно предсказать цену и доступность FBS.

Посмотреть видео: Почему цены на FBS постоянно колеблются?

В этом видеоролике объясняется динамика рынка индустрии FBS / SERA с учетом многих аспектов (т.д., климат), которые влияют на отрасль, особенно на цену.

Важные термины, которые следует знать при оценке FBS

Термины Определения
Тестирование на вирусы 9CFR Тестирование вирусной панели в соответствии с Сводом федеральных правил (CFR), раздел 9, часть 113.53 (c) [113.46, 113.47]. Обнаруживается флуоресцентным антителом.
Биохимический и гормональный профиль Количественная оценка биохимических и гормональных профилей (эстрадиол, инсулин, прогестерон, тестостерон и тироксин), которые могут повлиять на культуру клеток.
Статус BSE BSE (губчатая энцефалопатия крупного рогатого скота) — болезнь, в отношении которой МЭБ ( Всемирная организация здравоохранения животных ) официально признал санитарный статус стран и зон. Регионы с незначительным риском губчатой ​​энцефалопатии крупного рогатого скота (коровье бешенство) имеют меньший риск биобезопасности для импорта.
Тестирование на вирусы EMA Тестирование на вирусную панель в соответствии с Сводом федеральных правил (CFR), раздел 9, часть 113.53 (c) [113,46, 113,47]. Обнаруживается флуоресцентным антителом.
Тестирование эндотоксина Эндотоксин напрямую связан с качеством сбора и обработки сыворотки, чем выше уровень, тем больше попадание грамотрицательных бактерий.
Фильтрация Тройная фильтрация (0,1 мкм): Асептический процесс, который прошел валидацию, чтобы гарантировать соответствие всех продуктов промышленному стандарту уровня обеспечения стерильности 10 -3 .
Гемоглобин / гемоглобин Индикатор правильного и / или неправильного сбора и обработки крови и / или сыворотки.
Дополнительное тестирование на микоплазмы и микоплазмы (H-Stain) Прямое культивирование и окрашивание по Hoechst. Тестирование показывает, что микоплазма — не обнаружена.
Подтверждение происхождения Мы используем запатентованную технологию снятия отпечатков пальцев SERA для сывороток Gibco, чтобы подтвердить происхождение FBS и исключить возможность подделки продукта.Узнать больше
Осмоляльность Осмоляльность FBS, мера концентрации растворенных веществ, таких как соли и сахара, должна быть аналогична культуральной среде, чтобы избежать осмотического шока, который может повлиять на жизнеспособность клеток.
Показатели: относительное стимулирование роста (RGP) Анализ стимулирования роста измеряет способность каждой партии FBS поддерживать пролиферацию требовательных диплоидных фибробластов человека через множество субкультур.
pH: повышение относительного pH Сыворотка действует как буфер в системе культивирования клеток; pH проверяется для обеспечения точного качества и производительности клеточных культур.
Общий белок FBS богат множеством белков, которые могут воздействовать на культивируемые клетки; общий белок в сыворотке измеряется с помощью химического анализа сыворотки.
Прослеживаемость Полная прослеживаемость до исходного источника.Сертифицирован ISIA Traceability. Узнать больше

Стандартные определения крупного рогатого скота

Термины Определения
Сыворотка Сыворотка — это жидкая фракция свернувшейся крови. Он обеднен клетками, фибрином и факторами свертывания крови. Сыворотка отличается от плазмы тем, что антикоагулянт никогда не добавляется в кровь после сбора у животного. Сыворотку готовят центрифугированием до отделения сгустка и оставшихся клеток крови от жидкой фазы.Затем сыворотку удаляют и хранят замороженной до дальнейшей обработки.
Фетальная бычья сыворотка Полуобработанная фетальная бычья сыворотка Фетальная бычья сыворотка (FBS) получают, как описано выше, из крови плодов здоровых, дородовых самок крупного рогатого скота, которые были до и / или после родов. -вспомогательный ветеринарный осмотр. Его собирают на бойнях, проверенных компетентным органом страны происхождения. Кровь плода собирается в асептических условиях с помощью сердечной пункции, что снижает риск микробного заражения и образующихся эндотоксинов.Сбор происходит в зоне бойни, специально отведенной для этой цели, чтобы свести к минимуму риск заражения другими жидкостями.
Специальная фетальная бычья сыворотка Это полуобработанный FBS или стерильный отфильтрованный FBS, который был подвергнут одному или нескольким процессам модификации. Примерами являются диализованный, очищенный от угля, сверхнизкий уровень IgG, ES-клетки, MSC и истощенные экзосомы.
Сыворотка новорожденного теленка Сыворотка новорожденного теленка (NBCS) определяется как жидкая фракция свернувшейся крови, полученная от здоровых забитых телят в возрасте менее 20 дней, признанных пригодными для потребления человеком до и / или патологоанатомическое обследование.Его собирают на бойнях, проверенных компетентным органом страны происхождения. Никакие удаления или добавления (включая консерванты) не допускаются.
Донорская бычья сыворотка (также известная как донорская телячья сыворотка) Донорская бычья сыворотка (DBS) определяется как жидкая фракция свернувшейся крови, полученная от здорового крупного рогатого скота в возрасте 12 месяцев или старше из контролируемых донорских стад, чьи состояние здоровья подтверждается регулярным осмотром компетентных, уполномоченных на законных основаниях ветеринаров.
Сыворотка крупного рогатого скота (также известная как сыворотка взрослого крупного рогатого скота или телячья сыворотка) Сыворотка крупного рогатого скота определяется как жидкая фракция свернувшейся крови, полученная от здорового забитого крупного рогатого скота в возрасте 12 месяцев или старше, которая считается пригодной для человека потребление при пред- и / или патологоанатомическом осмотре. Его собирают на бойнях, проверенных компетентным органом страны происхождения.

Истории клиентов, использующих фетальную бычью сыворотку

Посмотрите видеоролики: Gibco FBS — преимущества использования нашей сыворотки для ваших исследований

Диализированная и очищенная от угля FBS

Основы клеточной культуры Gibco

Культура клеток имеет решающее значение для вашего успеха, поэтому убедитесь, что все в вашей лаборатории используют лучшие процедуры и продукты для постоянного получения ожидаемых результатов.Основы клеточных культур — это введение в культуру клеток, охватывающее такие темы, как устройство лаборатории, безопасность и асептические методы.

Узнать больше

Получите свой Gibco FBS сегодня!

Выберите подходящий FBS для конкретных потребностей в культуре клеток — от фундаментальных исследований до специальных анализов. Независимо от того, нужны ли вам сыворотки с наименьшим вирусным риском, с самым низким уровнем эндотоксина или FBS, подходящие для специальных применений и анализов, продукты Gibco предложат вам лучшую ценность.

Купить сейчас

Мы здесь, чтобы помочь

Получите рекомендации по устранению распространенных проблем или обратитесь напрямую к опытному ученому для получения технической помощи, связанной с приложениями, оборудованием и общим использованием продукта.

Свяжитесь с нами

Справочник по продукту One Cell Bio

Мы упростили наше портфолио, чтобы показать вам, как наши самые популярные продукты и услуги используются в качестве отдельных инструментов или интегрированных системных решений. Это руководство предназначено для того, чтобы ускорить ваш поиск подходящего продукта для клеточной биологии и дать вам подробное представление о том, как мы можем помочь ускорить исследования.

Узнать больше

Количественная оценка белков бычьего сывороточного альбумина для блокирующих приложений

% PDF-1.7 % 1 0 объект > / Метаданные 4 0 R / Страницы 2 0 R / StructTreeRoot 3 0 R / Тип / Каталог / Средство просмотра Предпочтения 5 0 R >> эндобдж 4 0 obj > поток Приложение Microsoft® Word 2016 / pdf

  • #MA JUNREN GAMALIEL #
  • Количественная оценка белков бычьего сывороточного альбумина для блокирующих применений
    • Microsoft® Word 20162019-12-10T07: 55: 43 + 09: 002021-07-26T17: 21: 41-07: 002021-07-26T17: 21: 41-07: 00uuid: 73D80B40-0B24-452D-A9E2-1F91C033DCF6uuid : a95da552-1dd1-11b2-0a00-810000000000 конечный поток эндобдж 2 0 obj > эндобдж 3 0 obj > эндобдж 5 0 obj > эндобдж 121 0 объект > эндобдж 122 0 объект > эндобдж 124 0 объект [151 0 R 152 0 R 153 0 R 154 0 R 155 0 R 156 0 R 157 0 R 158 0 R 159 0 R 160 0 R 161 0 R 162 0 R 162 0 R] эндобдж 125 0 объект [163 0 R 163 0 R 164 0 R 164 0 R] эндобдж 126 0 объект [165 0 R 165 0 R 166 0 R 166 0 R 167 0 R 167 0 R 168 0 R 168 0 R 169 0 R 169 0 R 170 0 R 170 0 R] эндобдж 127 0 объект [171 0 R 171 0 R 173 0 R 173 0 R 174 0 R 174 0 R 175 0 R 175 0 R 176 0 R 176 0 R 172 0 R] эндобдж 128 0 объект [177 0 R 177 0 R 178 0 R 178 0 R 179 0 R 179 0 R 180 0 R 180 0 R] эндобдж 129 0 объект [181 0 R 181 0 R 182 0 R 182 0 R 183 0 R 183 0 R 184 0 R 184 0 R] эндобдж 130 0 объект [185 0 R 187 0 186 0 R] эндобдж 131 0 объект [188 0 R 189 0 R 189 0 R 190 0 R 190 0 R 191 0 R 191 0 R] эндобдж 132 0 объект [192 0 R 192 0 R 193 0 R 193 0 R 194 0 R 194 0 R] эндобдж 133 0 объект [195 0 R 195 0 R 197 0 R 197 0 R 198 0 R 198 0 R 199 0 R 199 0 R 196 0 R] эндобдж 134 0 объект [200 0 R 200 0 R 201 0 R 201 0 R 202 0 R 202 0 R] эндобдж 135 0 объект [203 0 R 203 0 R 205 0 R 206 0 R 206 0 R 204 0 R] эндобдж 136 0 объект [207 0 R 207 0 R 208 0 R 208 0 R 209 0 R 209 0 R 210 0 R 210 0 R] эндобдж 137 0 объект [211 0 R 211 0 R 213 0 R 213 0 R 214 0 R 214 0 R 215 0 R 215 0 R 212 0 R] эндобдж 138 0 объект [216 0 R 216 0 R 217 0 R 217 0 R 218 0 R 218 0 R 219 0 R 219 0 R] эндобдж 139 0 объект [220 0 R 220 0 R 222 0 R 223 0 R 223 0 R 224 0 R 224 0 R 221 0 R] эндобдж 140 0 объект [225 0 R 225 0 226 0 R 226 0 R 227 0 R 227 0 R] эндобдж 141 0 объект [228 0 R 228 0 R 229 0 R 229 0 R 230 0 R 230 0 R 231 0 R 232 0 R 233 0 R 234 0 R 235 0 R 236 0 R 237 0 R 238 0 R 239 0 R 240 0 R 241 0 242 руб. 0 243 руб. 0 руб. 244 0 руб.] эндобдж 142 0 объект [245 0 R 246 0 R 247 0 R 248 0 R 249 0 R 250 0 R 251 0 R 252 0 R 253 0 R 254 0 R 255 0 R 256 0 R 257 0 R 258 ​​0 R 259 0 R 260 0 R 261 0 262 р. 0 263 р. 0 264 р. 0 265 р. 0 266 р.] эндобдж 143 0 объект [267 0 R 268 0 R 269 0 R 270 0 R 271 0 R 272 0 R 273 0 R 274 0 R 275 0 R 276 0 R 277 0 R 278 0 R 279 0 R 280 0 R 281 0 R 282 0 R 283 0 R 284 0 R] эндобдж 144 0 объект [285 0 R 286 0 R 287 0 R 288 0 R 289 0 R 290 0 R 291 0 R 292 0 R 293 0 R 293 0 R] эндобдж 145 0 объект [294 0 R 295 0 R 296 0 R 297 0 R 298 0 R] эндобдж 146 0 объект [299 0 R 300 0 R 301 0 R 302 0 R 303 0 R 304 0 R 305 0 R 306 0 R] эндобдж 147 0 объект [307 0 R 308 0 R 309 0 R] эндобдж 148 0 объект [310 0 R 311 0 R 312 0 R 313 0 R 314 0 R 314 0 R] эндобдж 149 0 объект [315 0 R 315 0 R 316 0 R 316 0 R 317 0 R 317 0 R 318 0 R 318 0 R 319 0 R 319 0 R 320 0 R 321 0 R 322 0 R 323 0 R 324 0 R 325 0 R 326 0 R] эндобдж 150 0 объект [327 0 R 328 0 R 329 0 R 330 0 R 331 0 R 332 0 R 333 0 R 334 0 R 335 0 R 336 0 R 337 0 R 338 0 R 339 0 R 340 0 R 341 0 R 342 0 R 343 0 R 344 0 R 345 0 R 346 0 R 347 0 R 348 0 R 349 ​​0 R 350 0 R 351 0 R 352 0 R 353 0 R 354 0 R 355 0 R 356 0 R 357 0 R 358 0 R 359 0 R 360 0 R 361 0 R 362 0 R 363 0 R 364 0 R 365 0 R] эндобдж 327 0 объект > эндобдж 328 0 объект > эндобдж 329 0 объект > эндобдж 330 0 объект > эндобдж 331 0 объект > эндобдж 332 0 объект > эндобдж 333 0 объект > эндобдж 334 0 объект > эндобдж 335 0 объект > эндобдж 336 0 объект > эндобдж 337 0 объект > эндобдж 338 0 объект > эндобдж 339 0 объект > эндобдж 340 0 объект > эндобдж 341 0 объект > эндобдж 342 0 объект > эндобдж 343 0 объект > эндобдж 344 0 объект > эндобдж 345 0 объект > эндобдж 346 0 объект > эндобдж 347 0 объект > эндобдж 348 0 объект > эндобдж 349 0 объект > эндобдж 350 0 объект > эндобдж 351 0 объект > эндобдж 352 0 объект > эндобдж 353 0 объект > эндобдж 354 0 объект > эндобдж 355 0 объект > эндобдж 356 0 объект > эндобдж 357 0 объект > эндобдж 358 0 объект > эндобдж 359 0 объект > эндобдж 360 0 объект > эндобдж 361 0 объект > эндобдж 362 0 объект > эндобдж 363 0 объект > эндобдж 364 0 объект > эндобдж 365 0 объект > эндобдж 123 0 объект > эндобдж 32 0 объект > / MediaBox [0 0 595.32 841.92] / Parent 2 0 R / Resources> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / StructParents 26 / Tabs / S / Type / Page >> эндобдж 367 0 объект [371 0 R] эндобдж 368 0 объект > поток HWmoF. ~: K} ᒛ + I $ {E`YI / D * nhk H> 33ˢ2 «| 3b. * | G ~~} Jyd: çO3W ޒ F! #! tD’dTsR dh 琬 t6 dqͨHhјw /

    5xhnw

    Неспецифические взаимодействия между растворимыми белками и липидами вызывают необратимые изменения свойств липидных бислоев

    DOI: 10.1039 / C3SM27769K (Бумага) Soft Matter, 2013, 9 , 4219-4226

    Получено 30 ноября 2012 г. , Принято 11 февраля 2013 г.

    Впервые опубликовано 12 марта 2013 г.

    Растворимые белки во внеклеточном матриксе находятся в тесноте.Однако большинство биофизических исследований, выполненных на сегодняшний день, сосредоточено на концентрациях белка в режиме разбавления (значительно ниже диапазона мМ). Здесь мы систематически изучали взаимодействие модельных систем клеточных мембран (гигантские однослойные везикулы и поддерживаемые липидные бислои) с растворимыми глобулярными белками, бычьим сывороточным альбумином, гемоглобином и лизоцимом в физиологически значимых концентрациях. Чтобы более точно имитировать внеклеточную среду, мы также использовали фетальную бычью сыворотку как хороший представитель биомиметической белковой смеси.Мы обнаружили, что независимо от используемого белка (и, следовательно, от их биологической функции), взаимодействия между модельной клеточной мембраной и этими белками определяются их физико-химическими характеристиками, в основном их диполярным характером (или заряженными участками). В этой статье мы обсуждаем специфичность и обратимость этих взаимодействий и их потенциальные последствия для живых клеток. В частности, мы сообщаем о первоначальных доказательствах дополнительной роли гликолипидов в клеточных мембранах: снижении эффектов неспецифической адсорбции растворимых белков на клеточной мембране.

    Введение

    Внеклеточный матрикс — это переполненная среда, в которой сосуществуют самые разные биомакромолекулы, включая коллаген, фибронектин и протеогликаны. 1 Ранее было показано, что увеличение концентрации белка с помощью краудинговых агентов может резко повлиять на подвижность 2–4 и сворачивание 5 белков. Несмотря на это, условия разбавления часто используются в биофизических и биохимических исследованиях именно с целью избежать межмолекулярных взаимодействий для более простой интерпретации данных.Например, монослойное насыщение глобулярных белков (например, альбумина бычьей сыворотки, BSA) на твердых поверхностях обычно происходит при ~ 50 нМ (ссылки 6 и 7), и поэтому мало внимания уделяется межфазным процессам, происходящим при более высоких концентрациях белка (> мМ), где могут иметь место неспецифические 8 белок-белковые и белок-липидные взаимодействия. Это довольно удивительно, учитывая, что и фетальная бычья сыворотка (FBS), и BSA обычно используются в средах для культивирования клеток или в качестве блокирующих агентов для молекулярной диагностики 9 в концентрации 1–10% об. 10 Следовательно, существует потребность в более глубоком понимании белково-липидного поведения в экспериментальных системах, которые более точно имитируют физиологические условия. 11 Режим концентрации мМ для растворимых белков имеет большое биологическое значение, учитывая, что в плазме крови, хорошем примере биологической среды, концентрации альбумина и гемоглобина составляют ~ 0,75 мМ (ссылка 12) и 0,15 (ссылка 13). ) –2,0 мМ (ссылка 14) соответственно.

    В этой работе мы сосредоточились на определении влияния растворимых белков в концентрациях, близких к их физиологическим уровням, на свойства модельных клеточных мембран.Эти выбранные концентрации белка были близки к пределу режима от разбавленного до полуразбавленного для небольших глобулярных белков в растворе, который имеет место в диапазоне от ∼19 до 81 мМ (3,4–5,5 нм в диаметре), и, таким образом, мы ожидаем более сильных эффектов из-за интер- белковые взаимодействия. Режим полуразбавления для полимера начинается с критической концентрации, определяемой как концентрация мономера, которая меньше, чем концентрация растворителя, но выше, чем перекрывающаяся концентрация. 15 В качестве модельных белков мы использовали наиболее распространенный белок в плазме (BSA) и два других глобулярных белка 16 , которые либо несут аналогичный общий заряд (гемоглобин) 17 , либо противоположный заряд (лизоцим) 18 до BSA (физико-химические свойства используемых белков см. В таблице 1).Мы также использовали FBS, поскольку он представляет собой хорошую модель смеси нативных внеклеточных белков.

    Таблица 1 Характеристики белков с точки зрения молекулярной массы, дзета-потенциала и среднего гидродинамического диаметра a
    Белки, использованные в данной работе Молекулярная масса [кДа] Дзета-потенциал [мВ] Гидродинамический диаметр [нм]
    BSA, гемоглобин и лизоцим измеряли при 1 мМ и 1% FBS в PBS растворителе.Данные дзета-потенциала представлены в виде среднего значения ± стандартное отклонение для шести повторов.
    BSA 66,5 −11,37 ± 0,96 6,8 (ссылка 20)
    Гемоглобин 64,5 -2,14 ± 0,90 5,5 (ссылка 21)
    Лизоцим 14.3 2,59 ± 0,30 4,2 (ссылка 20)
    FBS NA -9,05 ± 0,99 NA

    В качестве модельных клеточных мембранных систем мы использовали либо гигантские однослойные везикулы (GUV), либо поддерживаемые липидные бислои (SLB). Используя флуоресцентную микроскопию и GUV, мы оценили основные изменения в структуре и / или проницаемости везикул по отношению к растворимому красителю 19 , в то время как микровесы кристаллов кварца с контролем рассеяния (QCM-D) и SLB позволили нам проследить адсорбцию протеина и степень обратимости связывания. .Мы использовали два разных типа липидных мембран, которые были либо отрицательно заряжены (содержащие как 1-пальмитоил-2-олеоил-sn-глицеро-3-фосфохолин, POPC, так и 1-пальмитоил-2-олеоил-sn-глицеро-3-фосфоглицерин. , POPG) или нейтральный (содержащий только POPC) в псевдофизиологических условиях (pH и концентрация соли). Наши результаты показывают, что растворимые белки могут вызывать серьезные перестройки на модельной клеточной мембране при относительно высоких концентрациях белка, в основном из-за частично обратимого связывания белков с липидными бислоями при высоких объемных концентрациях белка.В этой статье мы обсуждаем специфичность и обратимость этих взаимодействий и их потенциальные последствия для живых клеток. Мы приводим исходные данные, предполагающие, что гликозилирование липидов играет дополнительную роль в ограничении неспецифического связывания белков или, по крайней мере, в ограничении эффекта неспецифического связывания белков на проницаемость липидных бислоев.

    Результаты

    Влияние совместного добавления белков на проницаемость гигантских однослойных везикул

    Были проведены эксперименты с широкопольной флуоресцентной микроскопией для характеристики эффектов различных белков на проницаемость липидных мембран против возможной утечки растворимого красителя (Alexa 488), инкапсулированного в просвет GUV.Везикулы несли нейтральный (только POPC) или чистый отрицательный заряд (POPC / POPG). Кроме того, любое серьезное изменение конформации липидных бислоев было визуализировано с использованием DiIC 18 (5) в качестве липидного красителя. В таблице 2 представлены минимальные концентрации белка, необходимые для того, чтобы вызвать утечку содержащегося красителя по меньшей мере в 5% везикул в течение одного часа после воздействия белков. Рис. 1A иллюстрирует события утечки, которые произошли для отрицательно заряженных везикул в присутствии гемоглобина.Ясно, что все белки были способны вызывать утечку из везикул независимо от их чистого заряда, за исключением BSA в нейтрально заряженных везикулах. Однако минимальная концентрация, необходимая для просачивания красителя в 5% везикул, значительно различалась как для исследуемых белков, так и для суммарного заряда везикул. Таблица 2 Минимальные концентрации, необходимые для индуцирования утечки красителя из 5% визуализированных везикул
    Состав GUV / белок POPC POPC / POPG
    NA относится к отсутствию наблюдаемой утечки до концентрации общего белка 1 мМ.Эксперименты повторяли не менее трех раз.
    BSA NA a 10 мкМ
    Гемоглобин 10 мкМ 1 мкМ
    Лизоцим 100 мкМ 10 мкМ
    FBS 1% 0.1%
    Рис.1 Результаты флуоресцентной микроскопии показывают влияние растворимых белков на проницаемость GUV против растворимого красителя. Репрезентативное изображение одного события утечки пузырьков дано в (A). Типичная скорость утечки отдельной везикулы, выраженная как отношение интенсивности в реальном времени к начальной интенсивности, I / I 0 , по сравнению с истекшим временем на GUV, несущем либо нейтральный заряд (B), либо чистый отрицательный заряд (C) при воздействии лизоцима, гемоглобина, FBS или BSA.Концентрации белка, использованные в (B) и (C), указаны в таблице 2.

    Все белки показали более высокое сродство к отрицательно заряженным, чем к нейтральным GUV. Для BSA случаи утечки наблюдались для отрицательно заряженных везикул, начиная с 10 мкМ, в то время как события утечки не регистрировались для нейтральных везикул до 100 мкМ. Точно так же гемоглобин более эффективно влиял на проницаемость липидных бислоев, чем БСА, независимо от заряда везикул: для наблюдения утечки красителя для 5% заряженных везикул требовалась концентрация в один раз выше, в то время как утечка красителя происходила при 10 мкМ для нейтральных единицы.Эти результаты согласуются с предыдущими исследованиями гемоглобина, 22 , где небольшие однослойные везикулы агрегировали и демонстрировали перекисное разложение в присутствии гемоглобина.

    Как и ожидалось, исходя из общего положительного заряда, лизоцим 18 был более эффективен в увеличении проницаемости против растворимого красителя Alexa для отрицательно заряженных везикул, чем их нейтрально заряженные аналоги (для воздействия на проницаемость требовалось однократное увеличение концентрации. нейтральные бислои).Однако чистая концентрация лизоцима, необходимая для индукции утечки, была на порядок выше, чем для гемоглобина, даже несмотря на то, что последний нес чистый отрицательный заряд (таблица 1). Это предполагает, что существуют другие механизмы помимо электростатического взаимодействия, возникающего из-за чистого заряда белков и липидов, которые способствовали повышенной способности гемоглобина изменять проницаемость липидных бислоев.

    FBS был очень реактивен против GUV: события утечки уже наблюдались с 0.1% -ное разведение для отрицательно заряженных везикул и 1% -ное разведение для нейтральных. Наконец, при используемых концентрациях белка не наблюдалось никакой дальнейшей модификации структуры везикул (с точки зрения образования мостиков, слияния или коллапса везикул), кроме простой утечки содержимого красителя Alexa, за исключением случая лизоцима, в котором происходило образование мостиков и слияние везикул. (ESI, рис. SI1 †), в соответствии с недавними открытиями Al Kayal et al. 23

    Кинетика событий утечки была записана для одиночных везикул, и репрезентативные данные показаны на рис.1B. Когда нейтральные везикулы подвергались воздействию гемоглобина и лизоцима, интенсивность флуоресценции красителя Alexa была достаточно стабильной в течение ∼6 и ∼8 минут соответственно, пока она не резко упала (1-2 минуты), постепенно выравниваясь до минимальных уровней. Таким образом, по-видимому, существует временной порог для значительного вытекания красителя в присутствии этих белков. Однако утечка красителя из везикул происходила сразу после инъекции FBS — хотя в целом процесс происходил довольно медленно — до достижения 80% начальной интенсивности красителя (после ~ 10 минут перемешивания).В этот момент произошло резкое снижение интенсивности, и в течение 1 мин сигнал достиг минимального уровня, при котором он оставался стабильным. Напротив, интенсивность окрашивания везикул, инкубированных с BSA (по крайней мере, до 1 мМ), оставалась постоянной на протяжении всего эксперимента.

    Интересно, что отрицательно заряженные везикулы были более восприимчивы к разрушению этими белками, несмотря на электростатическое отталкивание, ожидаемое для отрицательно заряженного BSA и гемоглобина (Таблица 1): для утечки требовались не только минимальные концентрации белка (BSA, лизоцим, гемоглобин и FBS). в целом на порядок ниже (таблица 2), но и падение интенсивности из-за утечки на уровне отдельных пузырьков произошло раньше (рис.1B и C) в этом случае. Более того, все белки проявляли два кинетических режима (медленный и быстрый) во время утечки красителя. В медленном режиме начальная интенсивность окрашивания снизилась на 20% (увеличиваясь в течение 3–8 мин в зависимости от типа белка). В быстром режиме дополнительное падение интенсивности на 60% произошло в течение 1 минуты для всех используемых белков, за исключением гемоглобина, для которого произошло всего 40% падения интенсивности.

    Адсорбция белков липидными бислоями

    ,00 Мы использовали QCM-D для измерения межфазных свойств белков на отрицательно и нейтрально заряженных SLB.Для сравнительных исследований также была проведена адсорбция протеина на подложке из чистого кремнезема. Кремнезем несет отрицательный заряд в используемых ионных условиях (∼0,25 e — нм −2 для SiO 2 (ссылка 24) по сравнению с ∼0,54 e — нм -2 для отрицательно заряженных GUV, как оценивается из номинального состава и средней средней молекулярной площади для липида на SLB 25,26 ).На рис. 2 представлены результаты измерений изменения частоты (ΔF) и рассеяния (ΔD) нейтральных и отрицательно заряженных SLB, подвергшихся воздействию различных концентраций белка. Мы начали с воздействия на SLB концентраций, указанных в таблице 2, для которых наблюдалась утечка красителя с помощью флуоресцентной микроскопии. Для отрицательно заряженных бислоев адсорбция лизоцима и гемоглобина не наблюдалась, тогда как для BSA и FBS наблюдались только небольшие ΔF (-5 Гц) и ΔD (+1,25 × 10 -6 ).Эти значения ΔF и ΔD соответствуют ∼50 мас.% Монослоя полного белка (размером BSA 27 ) на вершине SLB или ∼77 нг см −2 на основе уравнения Зауэрбрея (Δm = −CΔf n / n). 7
    Рис. 2 Чистые абсолютные изменения частоты (ΔF) и диссипации (ΔD) при добавлении белков к POPC (нейтрально заряженным) или POPC / POPG (отрицательно заряженным) SLB.Цифра включает значения устойчивого состояния при разбавлении или обширном промывании буфером после воздействия 1 мМ БСА и гемоглобина. Красный и синий соответствуют нейтральным или отрицательно заряженным SLB соответственно. Сигналы ΔF и ΔD QCM-D обычно изменялись на 2 Гц или 2 × 10 -6 единиц рассеяния соответственно при воспроизведении экспериментов. Примеры отдельных экспериментов приведены в ESI, рис. SI3–16. †

    Для нейтральных мембран, с другой стороны, более выраженный эффект наблюдался для 1% FBS, где наблюдалось резкое увеличение ΔF (от -11 до -14 Гц).Воздействие лизоцима 100 мкМ вызывало более сложное поведение (см. Рис. 3), чем просто адсорбция (уменьшение ΔF и увеличение ΔD), при которой существенная адсорбция (уменьшение ΔF и увеличение ΔD) сопровождалась удалением массы (увеличение ΔF и ΔD снижаться). При достижении условий устойчивого состояния чистые значения ΔF и ΔD были больше, чем для липидных бислоев до добавления лизоцима, что указывает на то, что больше влажной массы, чем полный липидный бислой, оставалось связанным с поверхностью. Недавно аналогичные ответы QCM-D были получены для развернутого лизоцима лошади (> 3 мкМ) на отрицательно заряженных жидких SLB (80% PC, 20% PG), в то время как для нативного лизоцима лошади до 10 мкМ, 28 такой эффект не наблюдался. в соответствии с нашими результатами.Действительно, при концентрациях белка <3 мкМ титрование развернутого лизоцима лошади приводит только к адсорбции, но не к перестройке пленки. Таким образом, здесь также есть доказательства пороговой концентрации поверхностного белка, необходимой для основных перестроек липидного бислоя.


    Рис. 3 Сигналы QCM-D (ΔF и ΔD синим и красным соответственно) для адсорбции 100 мкМ лизоцима в зависимости от времени (с) на нейтральных SLB.После адсорбции резкое изменение направления сдвига частоты указывает на начало удаления массы при t = 500 с, после чего были достигнуты установившиеся условия при непрерывном потоке при 0,1 мл мин. -1 . Показанные обертоны: 5–7–11. Небольшое распространение обертона указывает на образование относительно компактных и однородных слоев.

    Интересно, что при увеличении основной концентрации белка достигается определенная критическая точка, когда белки адсорбируются на SLB независимо от состава мембраны или типа белка, что обычно ожидается при неспецифическом связывании белков.Чем выше концентрация белка, тем больше измеренные ΔF и ΔD (рис. 2). Действительно, при достижении режима мМ (и при сравнимых концентрациях с плазмой крови) ΔD было довольно значительным, и наблюдалось значительное распространение обертонов (ESI, рис. SI4 †). Наблюдаемые ΔD и ΔF не связаны с изменениями вязкости основного раствора, поскольку воздействие на одни и те же растворы на границе раздела голый-SiO 2 дало значительно разные результаты (см. Рис. 4) с гемоглобином, имеющим большую способность. самоассоциироваться и образовывать мультислои на поверхности SiO 2 , поскольку в этом случае наблюдалось почти вдвое большее изменение частоты.


    Рис.4 Чистые изменения частоты (ΔF) и диссипации (ΔD) при добавлении 1 мМ BSA или гемоглобина на поверхность без покрытия SiO 2 . На рисунке показаны значения устойчивого состояния после разбавления избыточным буфером.

    Обширная промывка буфером после воздействия на липидные бислои 1 мМ БСА (рис. SI4 и 7 †) или гемоглобина (рис. SI11 и 12 †) была проведена для оценки силы такого неспецифического связывания белок-липид, см. Рис. .2. Произошло полное удаление белка из нейтрального SLB, поскольку сигналы ΔF и ΔD вернулись к своим значениям до добавления белка, в то время как для отрицательно заряженных бислоев было достигнуто только частичное удаление (чистое изменение частоты после удаления белка составило -3 Гц). и SiO 2 (рис.4). Оставшиеся ΔF (-34 и -7 Гц для BSA и гемоглобина соответственно на SiO 2 ) и относительно низкие значения D хорошо соответствовали заявленным значениям для образования монослоя на SiO 2 , по крайней мере, для BSA. (обычно для небольшого глобулярного белка, такого как БСА, полный монослой составляет 160 нг / см -2 или изменение F на -45 Гц). 27 Однако на отрицательно заряженных бислоях осталось менее полного монослоя (рис. 2). Таким образом, даже несмотря на то, что относительно аналогичная степень адсорбции протеина, по-видимому, происходит при достижении диапазона мМ на липидных бислоях, обратимость адсорбции затрудняется на отрицательно заряженных бислоях и соответствует более низким значениям, чем на полном монослое (при условии, что липиды не являются липидными). удаляется на этапе стирки).

    Поскольку для BSA на SLB были обнаружены только небольшие ΔF и ΔD в условиях, при которых происходит утечка красителя из пузырьков (сравните таблицу 2 и рис.1), мы использовали коммерчески доступный флуоресцентно меченый (Alexa Fluor® 647) BSA, чтобы подтвердить наличие адсорбции BSA на отрицательно заряженных везикулах (рис. 5). Через час после воздействия 1 мкМ меченого БСА на GUV можно было наблюдать флуоресцентный сигнал Alexa 647 вокруг везикулярной мембраны, что позволяет предположить, что альбумин действительно адсорбируется вокруг липидной мембраны. Обратите внимание, что та же самая концентрация BSA была ниже порога, вызывающего утечку, и поэтому неспецифическая адсорбция протеина на липидные бислои происходит легко до того, как произойдет реструктуризация липидного бислоя.Это, по-видимому, согласуется с двухступенчатым механизмом, наблюдаемым для событий утечки.


    Рис. 5 Определение действия меченого BSA на отрицательно заряженные GUV с помощью широкополосной флуоресцентной микроскопии через один час после добавления белка. Alexa 488 (зеленый) использовали для визуализации водного просвета мембранных везикул. Везикулы подвергали воздействию 1 мкМ BSA, меченного Alexa 647. Эти результаты являются репрезентативными для трех разных повторов.

    Обсуждение

    Все изученные белки влияли на проницаемость гигантских однослойных везикул независимо от заряда липидной мембраны, за исключением БСА в нейтральных везикулах (рис. 1 и табл. 2). Изменение проницаемости связано с адсорбцией протеина на липидных мембранах, как измерено с помощью QCM-D (рис. 2–4) и флуоресцентной микроскопии (рис. 5 только для BSA). Однако концентрация, необходимая для начала адсорбции (рис.1 и таблица 2), а также степень адсорбции (рис. 2) зависели не только от типа белка, но и от заряда везикул. Относительное сродство с точки зрения степени адсорбции (чистый ΔF, рис. 2) и концентрации, необходимой для индуцирования утечки содержимого из 5% всех визуализированных везикул (рис. 1 и таблица 2), не коррелировали с дзета-потенциалом или видимым плотности поверхностного заряда белков в использованных условиях (таблица 1). Что еще более интересно, более высокое сродство с точки зрения концентрации, необходимой для индуцирования утечки содержимого везикул, было обнаружено для белков с одинаковым зарядом (гемоглобин) и везикул (содержащих POPG), чем для лизоцима с противоположным зарядом (таблица 1) и везикул (содержащих POPG). .Это кажется нелогичным и удивительным из-за общего отрицательного заряда гемоглобина. Однако и БСА, и гемоглобин обладают весьма неоднородным распределением поверхностного заряда, 16,17 , что придает им диполярный характер с положительными пятнами по доменам (подробный недавний обзор влияния участков заряда на взаимодействия с белками см. ). Эти положительные пятна, вероятно, будут привлечены отрицательно заряженной головной группой липидов. Действительно, недавно было показано, что BSA обладает сродством к отрицательно заряженным объектам 30 и образует полный монослой на SiO 2 при концентрации около 1 мкМ. 27 Наконец, BSA образует полный монослой на границе раздела воздух-вода при более высоких объемных концентрациях (1–0 мкМ). 31 Таким образом, хотя гидрофобные взаимодействия также вносят вклад в взаимодействия белок-поверхность, электростатика между заряженными участками белка и заряженной поверхностью имеет больший диапазон. Более того, известно, что эти более дальнодействующие силы доминируют в скорости ассоциации, в то время как короткодействующие взаимодействия доминируют на стадии диссоциации. 32 Действительно, BSA проявлял сходное сродство к лизоциму, несмотря на то, что он имел более отрицательный дзета-потенциал, чем лизоцим (Таблица 1).Электростатические взаимодействия от чистых зарядов белков в любом случае должны играть роль, поскольку BSA имеет более низкое сродство, чем гемоглобин, в соответствии с разницей дзета-потенциала между этими двумя белками (таблица 1), которые связаны с разницей в изоэлектрической точке белков. , 6,8 и 4,7 для гемоглобина и БСА соответственно. 33,34

    Более пристальный взгляд на кинетику утечки красителя показывает, что утечка происходит по двухступенчатому механизму: (1) медленная кинетика, когда проницаемость отсутствует или изменяется незначительно, и (2) быстрая кинетика, когда большая часть утечки красителя протекает в пределах одного или двух минут (рис.1B и C). Это говорит о том, что адсорбция протеина происходит легко при контакте с везикулами, что приводит к некоторой степени перегруппировки липидов, но необходим критический порог поверхностной плотности для белков до возникновения большой утечки. Действительно, использование меченого БСА подтвердило, что адсорбция протеина происходит до начала утечки везикул (рис. 5). Таким образом, утечка может быть связана с порообразованием, проникновением виапротеина в липидные бислои 35,36 или локальными изменениями кривизны мембраны из-за адсорбции протеина, как предполагалось ранее для взаимодействий наночастиц с липидами. 37 Например, начальная адсорбция протеина происходит без видимой утечки (рис. 5). Для заряженных мембран, где перед этапом быстрой утечки наблюдается этап медленной кинетики утечки (рис. 1) и происходит частично обратимая адсорбция протеина (рис. 2), проникновение белка в липидные бислои в дополнение к изменениям в мембранных белках является более значительным. вероятный сценарий. С другой стороны, для нейтральных мембран утечка происходит только на быстрой стадии, и происходит обратимая адсорбция протеина, что позволяет предположить, что изменения кривизны мембраны из-за адсорбции протеина являются более вероятной причиной утечки без проникновения в липидный бислой, происходящего в этом случае.

    Мы измерили огромные изменения в значениях ΔD и ΔF при воздействии белков на липидные бислои, которые могут быть связаны с образованием мягких многослойных белков из-за неспецифических белок-белковых и белок-липидных сил. Интересно, что липидные мембраны были менее склонны к адсорбции протеина, чем исходная поверхность SiO 2 , поскольку чистые ΔF и ΔD были больше в последнем случае. В этом отношении неспецифические межбелковые взаимодействия были обнаружены для наночастиц, покрытых трансферрином, инкубированных в плазме крови, для которых с помощью флуоресцентной корреляционной спектроскопии была идентифицирована мягкая корона белков. 38 Внутри этой мягкой короны белковый обмен происходил в масштабе времени от двух минут и быстрее, что свидетельствует о высокодинамичной природе таких межбелковых неспецифических взаимодействий. 38 Действительно, существование такой мягкой белковой короны возникает из-за типичных неспецифических белок-белковых взаимодействий в переполненной белковой среде, вызванных более высокой концентрацией белков на границе раздела между раствором и любой поверхностью. Наши результаты показывают, что такие обратимые, динамические и «мягкие» взаимодействия белок-белок также происходят в непосредственной близости от липидных бислоев и вместе с неспецифическими взаимодействиями белок-липид действительно могут иметь необратимый эффект на структуру липидного бислоя с точки зрения их проницаемость по отношению к растворимым красителям и коллоидная стабильность везикул.

    Лизоцим

    демонстрирует совершенно отличное поведение: он не только вызывает утечку красителя из просвета везикул (рис. 1), но также вызывает агрегацию везикул (рис. SI1 †). Более того, первоначальная адсорбция лизоцима на SLB сопровождалась режимом десорбции (рис. 3), и, таким образом, в этом случае происходит более сложное явление, чем просто адсорбция протеина. Ранее считалось, что лизоцим разворачивается при контакте с липидными мембранами при индукции слияния везикул 23 , хотя также сообщалось, что липидные бислои могут вызывать повторную укладку денатурированного лизоцима. 28 Ответы QCM-D, представленные на рис. 3, действительно являются типичными ответами на реструктуризацию липидного бислоя, например, из-за внедрения молекул и образования смешанных мицелл. 39 Интересно, что развернутый лизоцим из-за образования комплекса с олеиновой кислотой, как было обнаружено, вызывает аналогичный эффект реструктуризации отрицательно заряженного SLB, но такой эффект не наблюдался для нативного лизоцима ниже 10 мкМ. 28 Таким образом, очевидно, что концентрация белка имеет решающее значение, поскольку здесь описан тот же механизм для развернутого лизоцима, что и для нативного лизоцима при 100 мкМ.

    Несмотря на то, что все три протестированных белка имеют очень разные биологические функции, все они демонстрируют сходное поведение в отношении липидных бислоев с точки зрения утечки красителя и степени адсорбции после достижения определенной концентрации белка, которая была близка к диапазону мМ или к режиму полуразведения. для мелких глобулярных белков. В частности, БСА связывается с лизолипидами и диациглицерином, 40,41 гемоглобин может вызывать перекисное окисление ненасыщенных липидов в физиологических условиях 42,43 , а лизоцим является протеолитическим ферментом.Недавно было показано, что последний индуцирует слияние отрицательно заряженных липосом в псевдофизиологических условиях. 23 В частности, лизоцим агрессивен по отношению к клеточной мембране грамположительных бактерий, и это в основном связано с его антибактериальной функцией. 44,45 Антибактериальная функция лизоцима может, в свете настоящих результатов, действительно быть связана с фактической дестабилизацией липидной мембраны. В целом влияние гемоглобина, БСА и лизоцима на структуру липидных бислоев, по-видимому, связано не с их структурой, а с их коллоидными свойствами, в основном с точки зрения распределения плотности поверхностного заряда.Все белки заряжены и несут постоянный диполь, что объясняет их более высокое сродство к отрицательно заряженным липидным мембранам, чем к нейтральным. Несмотря на то, что при достижении диапазона концентраций мМ, по крайней мере, для одинаково заряженных мембран, происходила относительно одинаковая степень адсорбции (рис.2), обратимость неспецифической адсорбции протеина затруднялась только на отрицательно заряженных бислоев, по крайней мере, для БСА и гемоглобина (рис. 2 и 4). Таким образом, более сильные электростатические взаимодействия между белками и липидами также вызывают эффекты необратимости.Таким образом, очевидно, что помимо благоприятных электростатических взаимодействий между заряженными участками белков и липидным бислоем, которые управляют связыванием белок-липид, существуют другие взаимодействия ближнего действия (ван-дер-Ваальсовы, водородные связи, гидрофобные взаимодействия и солевые мостики), которые уменьшаются. диссоциация белка от липидных бислоев. Это типичное поведение, наблюдаемое для белков и полиэлектролитов в целом, которое недавно было тщательно пересмотрено Kayitmazer et al. 29

    Для FBS, с другой стороны, утечки наблюдались, начиная с 0.1% -ное разведение для отрицательно заряженных GUV и 1% -ное разведение для нейтральных GUV (таблица 2 и рис. 1). Концентрация, обычно используемая в исследованиях клеточных культур 46 , представляет собой 10% -ное разбавление по объему этой среды, и, таким образом, добавление FBS должно вызывать адсорбцию протеина на клеточных мембранах, при условии, что условия поддерживаются аналогичными используемым здесь (плотность клеток по сравнению с плотностью везикул). Однако добавление FBS или BSA не вызывает лизис клеток в клеточных культурах. Действительно, мы использовали концентрации белка, близкие или находящиеся в пределах их физиологических значений.Таким образом, ни один из этих белков не должен влиять на структуру клеточной мембраны in vitro или in vivo. Следовательно, клетка должна обладать другими механизмами защиты от действия растворимых белков в режиме концентрации мМ. Головные группы гликозилированных липидов сильно гидратированы и, как известно, активно защищают липидную мембрану от высыхания 47–49 и перекисного окисления. 50 Мы предполагаем, что у гликолипидов есть еще одна биологическая функция 51 , связанная с препятствием связыванию растворимых белков.Эта гипотеза подтверждается тем фактом, что сахара используются в поверхностных покрытиях для предотвращения неспецифического связывания белков. 52 Действительно, предварительные эксперименты показывают, что использование фосфатидилинозита (PI) вместо фосфатидилглицерина (PG) при том же молярном соотношении (и, следовательно, той же плотности поверхностного заряда) снижает влияние связывания белка на проницаемость липидных мембран, поскольку при титровании до 50 мкМ BSA не было зарегистрировано утечки, см. рис. 6. Однако необходимы дальнейшие эксперименты с различными условиями, чтобы подтвердить эту гипотезу как общий эффект для других белков.


    Рис. 6 При экспонировании отрицательно заряженных GUV, сделанных из фосфатидилинозита (25 мол.%) Через час после добавления 50 мкМ BSA, значительной утечки не наблюдалось с помощью широкопольной флуоресцентной микроскопии. Alexa 488 (зеленый) использовали для визуализации водного просвета мембранных везикул. DilC18 (5) использовали для маркировки липидного бислоя (красный). Эти результаты являются репрезентативными для трех разных повторов.

    Экспериментальный

    Материалы

    POPG, POPC и 1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин-n-cap биотинил (DOPE-биотин) были приобретены у Avanti Polar Lipids, Inc.(Alabaster, AL), а 1,2-дипальмитоил-фосфатидилинозит (DPPI) был приобретен у Larodan Fine Chemicals AB. Все липиды использовали без дополнительной очистки. Красители DiIC 18 (5) (1,1′-диоктадецил-3,3,3 ‘, 3’-тетраметилиндодикарбоцианинперхлорат) и гидразид Alexa Fluor® 488 (Alexa) были использованы в том виде, в каком они были получены от Invitrogen (Paisley , ВЕЛИКОБРИТАНИЯ). Конъюгат Alexa Fluor® 647 был приобретен у Invitrogen (Пейсли, Великобритания), диспергирован в PBS до концентрации 100 мкМ и хранился при -20 ° C до использования.

    Получение и характеристика везикул

    Два типа GUV получали смешиванием двух липидов, POPG и POPC, в молярных соотношениях 1: 3 и 0: 1, соответственно. Исходя из pK и головных групп при физиологическом pH, везикулы POPC / POPG несли отрицательный заряд, в то время как POPC несли чистый заряд, равный нулю. 53 Кроме того, DPPI смешивали с POPC в молярном соотношении 1: 3 с получением везикул с таким же зарядом, что и везикулы, полученные с использованием POPG, но несущие инозитоловую группу вместо глицерина.

    Для исследований утечки оба типа везикул содержали 1% молярного отношения липидного красителя DiIC 18 (5) и 0,5% молярного отношения ДОФЭ-биотина, чтобы прикрепить везикулы к поверхности камеры для образца. Липиды растворяли в хлороформе в подходящих соотношениях и растворитель выпаривали в вакууме в течение по меньшей мере одного часа. Затем пленки повторно гидратировали 10 мкМ гидразида Alexa 488 в растворе сорбита с последующей инкубацией на водяной бане в течение ночи при 37 ° C.Эта процедура позволила везикулам нести DiIC 18 (5) в липидных бислоях, в то время как растворимый Alexa 488 был ограничен просветом везикул. Конечные растворы везикул хранили при 4 ° C и использовали в течение недели.

    Для экспериментов QCM-D были приготовлены небольшие однослойные везикулы (SUV) при тех же молярных отношениях двух липидов, как указано выше. Однако везикулы в данном случае не содержали ни DiIC 18 (5), ни ДОФЭ-биотина. Везикулы POPC / POPG были регидратированы в 2 мМ CaCl 2 , чтобы облегчить образование поддерживаемого липидного бислоя путем соединения отрицательно заряженных везикул с поверхностью SiO 2 , в то время как везикулы POPC просто регидратировали за миллилитр Q вода.Перед использованием везикулы подвергали обработке ультразвуком от двух до пяти минут до тех пор, пока раствор не стал прозрачным и прозрачным.

    Получение и характеристика белков

    Бычий сывороточный альбумин (BSA) с чистотой более 98%, гемоглобин крови человека (гемоглобин), фетальная бычья сыворотка (FBS) и лизоцим куриного яичного белка (лизоцим) были приобретены у Sigma-Aldrich (Дания) и использованы без дополнительной очистки. Белки сначала диспергировали в фосфатном буферном солевом растворе (pH 7.4, ионная сила 127 мМ) и дополнительно разбавили в том же буфере до экспериментальных концентраций. В этом исследовании концентрации белка BSA, гемоглобина и лизоцима варьировались от 1 мкМ до 1 мМ, тогда как FBS изучали при объемных соотношениях 0,1%, 1% и 2%. Дзета-потенциал каждого типа белка определяли измерениями электрофоретической подвижности с использованием Malvern Zetasizer NS (Вустершир, Великобритания), см. Таблицу 1. В этом случае образцы готовили путем диспергирования белков в PBS до конечной концентрации 1 мМ. , FBS разбавляли PBS до 1% по объему; и шесть измерений были выполнены на каждом образце при 25 ° C.

    Описание микроскопических экспериментов

    Камеры для образцов инкубировали с 1,0 мкл раствора -1 BSA-биотин-BSA (1:10, объемное соотношение), 0,025 г -1 стрептавидина и PBS, соответственно, при температуре окружающей среды в течение 10 минут. плюс полоскание PBS пять раз. Флуоресцентные везикулы добавляли в камеру для достижения конечной концентрации 0,01 мг / мл -1 . Везикулам давали возможность осесть и стабилизироваться на дне камеры в течение 30 минут перед введением белков в раствор.После воздействия белков поведение GUV контролировали в течение 60 минут на широкоугольном микроскопе Leica AF6000LX (Wetzlar, Германия). Для каждого эксперимента по утечке красителя визуализировали от 10 до 15 мест с примерно 20 пузырьками в каждом месте, что составляло от 200 до 300 пузырьков в каждом исследовании. Флуоресценция Alexa возбуждалась на λ = 488 нм с помощью аргонового лазера, а излучение регистрировалось при λ = 491–563 нм. Липидный краситель DiIC 18 (5) возбуждали при λ = 633 нм и регистрировали при λ = 640–700 нм.Для возбуждения Alexa и DiIC 18 (5) использовалась ртутная лампа с фильтрующими кубиками EGF cube 49002 ET и EC5 cube 49006 ET (Chroma Technology Corp, Bellows Falls, США) соответственно. Для каждой экспериментальной установки освещение, интенсивность и время экспозиции были оптимизированы для сбора сигнала. Целостность везикул проверяли в буферном растворе во время контрольных экспериментов без воздействия белков, чтобы гарантировать их устойчивость к механическому воздействию, и не наблюдали никаких признаков утечки красителя.Каждую серию экспериментов повторяли не менее трех раз.

    Описание экспериментов QCM-D

    QCM-D (кварцевые микровесы с контролем рассеяния) — это акустический метод измерения (1) изменения влажной массы на единицу площади путем измерения ΔF резонатора из кварцевого кристалла и (2) вязкоупругих свойств адсорбированной пленки путем измерения рассеивание энергии (D). Уменьшение резонансной частоты является индикатором увеличения адсорбированной массы на поверхности сенсора, в то время как увеличение рассеяния связано с уменьшением жесткости адсорбированной пленки.В этом исследовании мы использовали систему Q-Sense E4 (Гетеборг, Швеция). Все датчики SiO 2 были погружены в 2% раствор Hellmanex в течение 10 минут и промыты 15 циклами промывки водой и 96% этанолом с последующим процессом очистки УФ-озоном в течение еще 10 минут для удаления любого возможного слоя загрязнения с поверхности. сенсорная поверхность. Каждое измерение проводилось при 25 ° C, когда изменения частоты находились в пределах 0,5 Гц. Для очистки применяли 5% додецилсульфат натрия (SDS), а для удаления пузырьков в трубке при необходимости использовали 96% этанол.После получения стабильного сигнала раствор везикул (200 мкг мл -1 ) вводили со скоростью 100 мкл мин -1 . После образования SLB в систему закачивали PBS, чтобы смыть избыток липидов перед инъекцией белков. Затем была проведена серия титрований белков, начиная с 1 мкМ до 1 мМ для всех белков, кроме FBS, для которого использовали от 0,1% до 2% FBS.

    Выводы

    Неспецифическая протеинадсорбция в настоящее время изучается с точки зрения ее влияния на структуру липидных бислоев с точки зрения коллоидной стабильности везикул и проницаемости липидного бислоя.Мы обнаружили, что все изученные белки (бычий сывороточный альбумин, лизоцим куриных яиц, бычий гемоглобин и бычья эмбриональная сыворотка) были способны вызывать утечку из липидных везикул независимо от их поверхностного заряда (отрицательного или нейтрального), за исключением альбумина на нейтральных везикулах, по крайней мере, до 1 мМ. Концентрации белка, необходимые для протекания, были значительно выше диапазона мкМ, в котором происходят сильные межбелковые взаимодействия. В то же время физиологически актуален именно такой режим концентрации.Очевидно, что обширной адсорбции растворимых белков на клеточных мембранах in vivo не происходит. Мы предполагаем, что клетка обладает другими механизмами защиты от этого типа неспецифической адсорбции протеина, среди которых гликозилированные покрытия, введенные липидами и мембранными белками, могут быть основным параметром в игре.

    Благодарности

    Мы благодарим Карен Мартинес за предоставление доступа к широкопольному микроскопу и Томаса Гюнтера Поморски за плодотворные обсуждения. Кроме того, авторы выражают признательность за финансовую поддержку «Центра синтетической биологии» Копенгагенского университета, финансируемой исследовательской инициативой UNIK Министерства науки, технологий и инноваций Дании, и C.Гас Гласскок-младший учредил фонд за выдающиеся достижения в области наук об окружающей среде в Колледже искусств и наук Университета Бэйлора, США.

    Ссылки

    1. М. Ивата и С. С. Карлсон, J. Neurosci., 1993, 13, 195–207 Search PubMed.
    2. Y. Y. Kuttner, N. Kozer, E. Segal, G. Schreiber, G. Haran, J. Am. Chem. Soc., 2005, 127, 15138–15144 CrossRef CAS.
    3. D. S. Banks, C. Fradin, Biophys. J., 2005, 89, 2960–2971 CrossRef CAS.
    4. М.Вайс, М. Эльснер, Ф. Картберг и Т. Нильссон, Biophys. J., 2004, 87, 3518–3524 CrossRef CAS.
    5. S. Mukherjee, M. M. Waegele, P. Chowdhury, L. Guo and F. Gai, J. Mol. Биол., 2009, 393, 227–236 CrossRef CAS.
    6. C. Larsson, M. Rodahl и F. Hook, Anal. Chem., 2003, 75, 5080–5087 CrossRef.
    7. П. М. Вольни, Дж. П. Спатц и Р. П. Рихтер, Langmuir, 2010 г., стр. 26, 1029–1034 Search PubMed.
    8. А. В. Киселев, Обсудить. Faraday Soc., 1965, 205–218 Search PubMed.
    9. E. Pozio, L. Sofronic-Milosavljevic, M. A. Gomez Morales, P. Boireau и K. Nöckler, Vet. Паразитология, 2002, 108, 163–178 Поиск в PubMed.
    10. C. Incorporated, http://www.corning.com/lifesciences.
    11. A.H. Elcock, Curr. Opin. Struct. Биол., 2010, 20, 196–206 CrossRef CAS.
    12. Р. Л. Лундблад, Internet J. Genomics Proteomics, 2005, 1 Search PubMed, ISSN: 1540–2630.
    13. К. С. Броберг, А. Р. Джаявира, Г. П. Диллер, С.К. Прасад, С. Л. Тайн, Б. Э. Бакс, Дж. Берман и М. А. Гацулис, Am. J. Cardiol., 2011, 107, 595–599 Search PubMed.
    14. L. Detivaud, E. Nemeth, K. Boudjema, B. Turlin, MB Troadec, P. Leroyer, M. Ropert, S. Jacquelinet, B. Courselaud, T. Ganz, P. Brissot and O. Loreal, Blood, 2005, 106, 746–748 Search PubMed.
    15. М. Адам и М. Делсанти, Макромолекулы, 1985, 18, 1760–1770 CrossRef CAS.
    16. Q. Shi, Y. Zhou и Y. Sun, Biotechnol. Прог., 2005, 21, 516–523 Поиск в PubMed.
    17. S. X. Wang, K. C. Pandey, J. R. Somoza, P. S. Sijwali, T. Kortemme, L. S. Brinen, R. J. Fletterick, P. J. Rosenthal и J. H. McKerrow, Proc. Natl. Акад. Sci. США, 2006, 103, 11503–11508 CrossRef CAS.
    18. Д. П. Сан, Д. И. Ляо и С. Дж. Ремингтон, Proc. Natl. Акад. Sci. США, 1989, 86, 5361–5365.
    19. А. Акессон, К. В. Лундгаард, Н. Эрлих, Т. Г. Поморски, Д. Стаму и М. Карденас, Мягкая материя, 2012, 8, 8972–8980 RSC.
    20. Ф.Л. Гонсалес Флеха и В. Леви, Biochem. Мол. Биол. Образов., 2003, 31, 319–322 CrossRef CAS.
    21. С. Пападопулос, К. Д. Юргенс, Г. Гро, Biophys. J., 2000, 79, 2084–2094 CrossRef CAS.
    22. Дж. Себени, Х. Хаузер, К. Д. Эскельсон, Р. Р. Уотсон и К. Х. Винтерхальтер, Биохимия, 1988, 27, 6425–6434 Search PubMed.
    23. С. Н. Тамер Аль Каял, Э. Руссо, Д. Берти, М. Буччантини, М. Стефани и П. Баглиони, Мягкая материя, 2012, 8, 4524–4534 RSC.
    24. г.H. Bolt, J. Phys. Chem., 1957, 61, 1166–1169 CrossRef CAS.
    25. А. Акессон, Т. Линд, Н. Эрлих, Д. Стаму, Х. Ваклин и М. Карденас, Мягкая материя, 2012, 8, 5658–5665 RSC.
    26. А. Акессон, Т. К. Линд, Р. Баркер, А. Хьюз и М. Карденас, Langmuir, 2012, 28, 13025–13033 Search PubMed.
    27. Г. Оланья, Э. Торманн, И. Варга, Р. Макуска и П. М. Клаессон, J. Colloid Interface Sci., 2010, 349, 265–274 CrossRef CAS.
    28. С. Б. Нильсен, К. Вильгельм, Б.Vad, J. Schleucher, L.A. Morozova-Roche, D. Otzen, J. Mol. Биол., 2010, 398, 351–361 CrossRef CAS.
    29. А. Б. Кайитмазер, Д. Симан, Б. Б. Мински, П. Л. Дубин, Ю. Сюй, Мягкая материя, 2013, 2553–2583 Search PubMed.
    30. Б. Яхимска и А. Пайор, Биоэлектрохимия, 2012, 87, 138–146 Поиск в PubMed.
    31. К. Иберт и Дж. М. ди Меглио, Langmuir, 1998, 14, 471–475 CrossRef CAS.
    32. T. Selzer, S. Albeck и G. Schreiber, Nat. Struct. Биол., 2000, 7, 537–541 CrossRef CAS.
    33. Т. Шиоми, М. Мацуи, Ф. Мизуками и К. Сакагути, Биоматериалы, 2005, 26, 5564–5571 CrossRef CAS.
    34. С. Р. Беллара, З. Ф. Куй и Д. С. Пеппер, Biotechnol. Prog., 1997, 13, 869–872 CrossRef CAS.
    35. G. Fuertes, D. Gimenez, S. Esteban-Martin, A. Garcia-Saez, O. Sanchez и J. Salgado, Adv. Exp. Med. Биол., 2010, 677, 31–55 Search PubMed.
    36. M. J. Zuckermann, T. Heimburg, Biophys. J., 2001, 81, 2458–2472 CrossRef CAS.
    37. А. Акессон, Т. К. Линд, Р. Баркер, А. Хьюз и М. Карденас, Langmuir, 2012, 28, 13025–13033 Search PubMed.
    38. С. Милани, Ф. Б. Бомбелли, А. С. Питек, К. А. Доусон и Дж. Радлер, ACS Nano, 2012, 6, 2532–2541 Search PubMed.
    39. А. Мехлер, С. Прапорски, К. Атмури, М. Боланд, Ф. Сепарович и Л. Л. Мартин, Biophys. J., 2007, 93, 3907–3916 CrossRef CAS.
    40. D. M. Ojcius, J. D. Young, Mol. Immunol., 1990, 27, 257–261 Search PubMed.
    41. H. Ahyayauch, G. Arana, J. Sot, A. Alonso и F. M. Goni, Biochim. Биофиз. Acta, Biomembr., 2009, 1788, 701–707 CrossRef CAS.
    42. W. S. Pietrzak, I.F. Miller, Biomater., Artif. Cells, Artif. Органы, 1989, 17, 563–581 Поиск в PubMed.
    43. J. Szebeni, C.C. Winterbourn и R.W. Carrell, Biochem. J., 1984, 220, 685–692. Поиск в PubMed.
    44. В. Дж. Яконо, Б. Дж. Маккей, С. ДиРиенцо и Дж. Дж. Поллок, Infect. Immun., 1980, 29, 623–632 Search PubMed.
    45. R. Cegielska-Radziejewska, G. Lesnierowski и J. Kijowski, Eur. Food Res. Technol., 2009, 228, 841–845 Search PubMed.
    46. Дж. Чой, Дж. Х. Чанг, Г. Ю. Квон, К. В. Ким, С. Ким и Х. Чанг, Банкинг клеточных тканей, 2012 г., 1–10 Search PubMed.
    47. C. W. Harland, Z. Botyanszki, D. Rabuka, C. R. Bertozzi и R. Parthasarathy, Langmuir, 2009, 25, 5193–5198 CrossRef CAS.
    48. С. Б. Лесли, Э. Исраэль, Б. Лайтхарт, Дж. Х. Кроу и Л. М. Кроу, Appl.Environ. Microbiol., 1995, 61, 3592–3597 CAS.
    49. S. J. Halperin и K. L. Koster, J. Exp. Бот., 2006, 57, 2303–2311 Search PubMed.
    50. И. Варани, А. Терзаги, Л. Донати, М. Марацци, М. Массерини и Г. Теттаманти, Arch. Дерматол. Res., 1994, 286, 481–483 Search PubMed.
    51. А. Варки, Гликобиология, 1993, 3, 97–130 CrossRef CAS.
    52. Дж. Джогикалмат, патент США, публикация заявки США 2008/0213910, 2008 г.