Блоки фбс что такое: Что такое ФБС? — статьи завода «ЭКО», в Москве

Содержание

Эмбриональная бычья сыворотка ингибирует прикрепление вируса гепатита С к клеткам-хозяевам

. 2013 ноябрь; 193(2):261-9.

doi: 10.1016/j.jviromet.2013.06.024. Epub 2013 8 июля.

Чжао-лин Цинь ¹ , Хэ-пэн Цзюй, Юань Лю, Тин-тинг Гао, Ван Вэнь-бо, Лора Аврелиан, Пин Чжао, Чжун-тянь Ци

Принадлежности

принадлежность

¹ Кафедра микробиологии, Шанхайская ключевая лаборатория медицинской биозащиты, Второй военно-медицинский университет, Шанхай 200433, Китай.

PMID: 23845899
DOI: 10.1016/j.jviromet. 2013.06.024

Чжао-лин Цинь и др. Дж. Вироловые методы. 2013 9 ноября0003 . 2013 ноябрь; 193(2):261-9.

doi: 10.1016/j.jviromet.2013.06.024. Epub 2013 8 июля.

Авторы

Чжао-лин Цинь ¹, Хэ-пэн Цзюй, Юань Лю, Тин-тин Гао, Вэнь-бо Ван, Лора Аврелиан, Пин Чжао, Чжунтянь Ци

принадлежность

¹ Кафедра микробиологии, Шанхайская ключевая лаборатория медицинской биозащиты, Второй военно-медицинский университет, Шанхай 200433, Китай.

PMID: 23845899
DOI: 10.
1016/j.jviromet.2013.06.024

Абстрактный

Эмбриональная бычья сыворотка (FBS), обычно используемая в качестве основной добавки для культивирования клеток, ингибирует рост вируса гриппа. Однако роль FBS в регуляции инфекции, вызванной вирусом гепатита С (ВГС), широко не изучалась и остается в значительной степени неясной. Мы использовали установленный культивированный HCV (HCVcc), выделенный из штамма JFH-1, и два набора растворов (cDMEM7.4 и cDMEM6.8; RHMNB6.8 и RHMN6.8) для исследования влияния FBS на инфекцию HCV. Наши данные показывают, что FBS блокирует инфекцию HCV дозозависимым образом. Инфекционность HCV, разбавленного в растворе RHMNB, была более чувствительна к добавлению FBS, чем в растворе cDMEM. Кроме того, FBS-опосредованное блокирование HCV-инфекции происходило на этапе прикрепления вируса к клеткам-мишеням, что свидетельствует о том, что FBS содержит факторы, препятствующие ранним стадиям HCV-инфекции.

Ключевые слова: Вложение; привязка; Культура клеток; Фетальная бычья сыворотка; вирус гепатита С; Инфекционное заболевание.

Цитируется

Вирусная инфекция Зика запускает липофагию, стимулируя передачу сигналов AMPK-ULK1 в клетках гепатомы человека.
Цинь З.Л., Яо К.Ф., Чжао П., Рен Х., Ци З.Т. Цинь З.Л. и др. Front Cell Infect Microbiol. 2022 2 ноября; 12:959029. doi: 10.3389/fcimb.2022.959029. Электронная коллекция 2022. Front Cell Infect Microbiol. 2022. PMID: 36405969 Бесплатная статья ЧВК.
Создание суспензионной клеточной линии MDBK в бессывороточной среде для продукции бычьего альфагерпесвируса-1.

Ван П., Хуан С., Хао С., Ван З., Чжао Х., Лю М., Тянь С., Гэ Л., У В., Пэн С. Ван П. и др. Вакцины (Базель). 2021 9 сент.;9(9):1006. doi: 10.3390/vaccines9091006. Вакцины (Базель). 2021. PMID: 34579242 Бесплатная статья ЧВК.
Клеточный метаболический профиль клеток CrFK, инфицированных вирусом инфекционного перитонита кошек, с использованием микрочипов фенотипа.
Ng SW, Selvarajah GT, Cheah YK, Mustaffa Kamal F, Omar AR. Нг С. В. и др. Возбудители. 2020 25 мая; 9 (5): 412. doi: 10.3390/патогены9050412. Возбудители. 2020. PMID: 32466289 Бесплатная статья ЧВК.
Культура клеток фибробластов десны человека, клеток рака полости рта и клеток мезотелиомы с бессывороточной средой, STK1 и STK2.

Цугено Ю, Сато Ф, Мурагаки Ю, Като Ю. Цугено Ю. и др. Biomed Rep. 2014 Sep;2(5):644-648. doi: 10.3892/br.2014.306. Epub 2014 27 июня. Биомед Респ. 2014. PMID: 25054004 Бесплатная статья ЧВК.

Типы публикаций

термины MeSH

вещества

Block, Stock and Barrel – Руководство по выбору блокирующего буфера

Блокирование – это важный третий элемент в любых отношениях антитело/антиген. Правильный блокирующий буфер может улучшить способность вашего антитела связывать свой антиген, в то время как плохая блокировка может сделать связывание специфического антитела практически невозможным. Не позволяйте плохой блокировке стать камнем преткновения в ваших экспериментах с вестерн-блоттингом — читайте дальше, чтобы узнать, чего достигает блокировка и как выбрать правильный блокирующий буфер для вашего вестерн-блоттинга.

Зачем нужна блокировка

Итак, вы нанесли гель, выполнили перенос, и теперь у вас есть мембрана с белком, ожидающая исследования. Те из нас, кто несколько раз участвовал в блокировании вестерн-блоттинга, знают, что то, что вы делаете дальше, имеет решающее значение для предотвращения неспецифического связывания антител и неспецифического сигнала на вашем последнем вестерн-блоттинге. Да, вы уже догадались… Я говорю о блокировке. Мембраны, используемые для вестерн-блоттинга, обладают высоким сродством к белкам, и это хорошо — вы хотите, чтобы ваши перенесенные белки прилипали. Однако антитела — это тоже белки, и если их не заблокировать должным образом на мембране, они тоже прилипнут. Не потому, что ваше антитело обнаружило свой специфический антиген, а просто потому, что это белок. Поэтому важно выполнять блокирование на мембране вестерн-блоттинга сразу после переноса белка и непосредственно перед инкубацией с первичным антителом. Цель блокировки состоит в том, чтобы покрыть любую поверхность мембраны, к которой еще не прикреплен белок, то есть пространство мембраны между дорожками и между разделенными полосами белка. Если они не будут должным образом заблокированы, эти пространства схватятся за ваше антитело и вызовут «неспецифическое связывание». Неспецифическое связывание может вызвать ложноположительные сигналы по всему вашему пятну, также известному как «шум» или «фон», что существенно испортит ваш вестерн-блот. К счастью, блокирующие буферы могут уменьшить этот фоновый шум и улучшить отношение сигнал/шум. Звучит просто, правда? Но, как и в остальной части вашего западного протокола, существует множество способов блокировки, которые могут пойти не так, и вам захочется снять чью-то блокировку.

Плюсы и минусы 7 распространенных блокирующих агентов

Выбор блокирующего буфера зависит от трех факторов: вашего антитела, интересующего вас белка и вашей системы обнаружения. Вот 7 распространенных блокирующих буферов и несколько важных советов по их использованию:

1) Сухое обезжиренное молоко

Самым дешевым и доступным блокирующим средством является сухое обезжиренное молоко. Сухое обезжиренное молоко можно приобрести либо в научной компании, либо без рецепта в супермаркете. Обычно сухое молоко используют в виде 2,5-5% раствора. Но имейте в виду, что молоко содержит смесь белков, включая фосфопротеины, по этой причине молоко не следует использовать, если вы используете фосфоспецифические антитела. То есть, если вам не нужен дополнительный фоновый шум, которого, конечно же, нет.

2) Бычий сывороточный альбумин (БСА)

Это очищенная фракция, содержащая альбумин, из бычьей сыворотки и, наряду с сухим обезжиренным молоком, является наиболее распространенным блоком выбора. Обычно блокирующие буферы, содержащие БСА, находятся в концентрации 2-5%. Тем не менее, исследователи часто варьируют концентрацию BSA в своем протоколе, чтобы использовать как можно меньше, потому что это может быть дорого. Хотя этот BSA подходит для использования с фосфопротеинами, он может содержать загрязняющие IgG или сывороточные белки, которые могут давать неспецифический фоновый шум.

3) Рыбный желатин

Использование рыбьего желатина обусловлено использованием предшествующего блокирующего агента, свиного желатина. Рыбий желатин очищают от кожицы холодноводных рыб, и его практическое преимущество заключается в том, что он остается жидким даже при низких температурах. Он используется в более низких концентрациях в диапазоне от 0,1 до 5%. В отличие от BSA или обезжиренного молока, рыбий желатин не содержит сывороточных белков, которые могут перекрестно реагировать с антителами млекопитающих, сводя к минимуму фоновый шум. Но рыбий желатин нельзя использовать для блокировки систем обнаружения биотина, поскольку он содержит эндогенный биотин.

4) Нормальная сыворотка (например, эмбриональная телячья сыворотка, кроличья сыворотка, козья сыворотка и т. д.)

Цельная сыворотка, содержащая смесь белков, также может использоваться для блокирования вашей мембраны для вестерн-блоттинга. Обычная сыворотка реже используется в качестве блокирующего агента, потому что она дает мало практических преимуществ по сравнению с обезжиренным молоком или БСА и более дорогая. Обычная сыворотка также должна использоваться в более высоких концентрациях (~ 5-10%). Как и BSA, нормальная сыворотка содержит иммуноглобулины и сывороточные белки, которые могут перекрестно реагировать с антителами млекопитающих.

5) Очищенный казеин

Можно сказать, что это чип от старого блока, так как это просто очищенный молочный белок. Вы можете использовать казеин вместо обезжиренного молока, но имейте в виду, что казеин — это фосфопротеин, присутствующий в цельном молоке, поэтому этот буфер также не подходит, если вы пытаетесь обнаружить фосфопротеины.

6) Патентованные коммерческие буферы (например, SuperBlock от Thermo Scientific)

Обычно они содержат чистые фракции загадочного патентованного белка. Преимущество этих буферов в том, что вы знаете, что в них нет фосфопротеинов, иммуноглобулинов, альбумина или биотина (плохих парней в других блокирующих буферах), но недостатком является то, что коммерческие буферы дороже. Протоколы специфичны для каждого коммерческого буфера, поэтому ознакомьтесь с рекомендациями производителя. Большим плюсом этих блокирующих буферов является то, что некоторые из них довольно быстрые, что позволяет вам, так сказать, «быстро снимать блоки» и быстрее переходить к этапам обнаружения.

7) Поливинилпирролидон (ПВП)

ПВП представляет собой небелковую альтернативу обычным блокирующим буферам. Несмотря на то, что он впервые был опубликован в 1993 году, он является новичком в области технологии блокировки. ПВП представляет собой водорастворимый полимер, который легко связывается с нитроцеллюлозой и мембраной из ПВДФ (наиболее распространенными мембранами для вестерн-блоттинга).